赖氨酸磷酸氢钙片中磷酸氢钙的含量测定

薛维丽，姜群英，咸瑞卿，巩丽萍，陈晓

(1.山东省食品药品检验研究院，山东济南250101；2.费县中医医院，山东临沂273400)

赖氨酸磷酸氢钙片是由盐酸赖氨酸、磷酸氢钙和适宜辅料制成的复方制剂，20世纪80年代开始最早在吉林省注册生产，曾用名为强灵助长片，临床上主要用于促进幼儿生长发育以及儿童及孕妇补充钙质。磷酸氢钙的含量直接影响该药品的质量与疗效，大多数生产企业均执行国家药品标准 WS-10001-(HD-0388)-2002-2012，该标准中规定磷酸氢钙的含量测定方法为返滴定法，该方法存在专属性不强的问题。

磷酸氢钙的含量测定方法除了国家标准中规定的返滴定法[1-4]外，还有采用以三氯化铁为沉淀剂，除去溶液中的磷干扰，用EDTA直接滴定法[5]；高锰酸钾滴定法[6]；电位滴定法[7]；电感耦合等离子体原子发射光谱法[8]等，本研究采用原子吸收分光光度法，该方法相比其他方法专属性强、准确度高，且操作简单，特别适合大批量样品的快速检测。

1 仪器与试药

1.1 仪器 iCE3000原子吸收分光光度计(赛默飞公司)；XSE205电子天平(瑞士梅特勒托利多公司)。

1.2 试剂 磷酸氢钙(含量100.0%，广西嘉进药业股份有限公司)；盐酸(分析纯，国药集团化学试剂有限公司)；氧化镧(分析纯，国药集团化学试剂有限公司)；片剂辅料(硬脂酸镁、盐酸赖氨酸、蔗糖、阿司帕坦、甘露醇等，企业提供)；赖氨酸磷酸氢钙片(修正药业集团股份有限公司、浙江金华康恩贝生物制药有限公司、广西嘉进药业股份有限公司、白求恩医科大学制药厂、贵州圣都药业有限公司)。

1.3 溶液的制备

1.3.1 供试品溶液的制备 取本品细粉适量(约相当于磷酸氢钙25 mg)，精密称定，置50 mL量瓶中，加适量0.1 mol·L-1盐酸溶液超声使磷酸氢钙溶解，用0.1 mol·L-1盐酸溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5 mL，置50 mL量瓶中，加5%镧溶液(取氧化镧6.6 g，加盐酸10 mL使溶解，加水稀释至 100 mL，摇匀)1 mL，用 0.1 mol·L-1盐酸溶液稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

1.3.2 标准曲线溶液的制备 取磷酸氢钙对照品约25 mg，精密称定，置 50 mL量瓶中，加 0.1 mol·L-1盐酸溶液使溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取 4.0、5.0、6.0 mL，分别置 50 mL 量瓶中，各加5%镧溶液1 mL，用0.1 mol·L-1盐酸溶液稀释至刻度，摇匀，作为标准曲线溶液。

1.3.3 空白干扰溶液的制备 取片剂辅料适量(约相当于磷酸氢钙25 mg的处方量)，精密称定，按“1.3.1”项下同法制备，作为空白干扰溶液。

1.3.4 空白溶液的制备 量取5%镧溶液1 mL，置50 mL量瓶中，用0.1 mol·L-1盐酸溶液稀释至刻度，摇匀，作为空白溶液。

1.3.5 样品测定 取空白溶液、标准曲线溶液、供试品溶液，照原子吸收分光光度法[《中国药典》2015年版(四部)通则0406第一法][9]，在422.7 nm波长处测定吸光度，根据线性方程计算，即得。

2 方法与结果

2.1 专属性试验 取空白溶液、空白干扰溶液分别在422.7 nm波长处测定吸光度，结果空白干扰溶液与空白溶液的吸光度值相当。结果表明片剂辅料对磷酸氢钙的含量测定基本无干扰。

2.2 精密度试验 取标准曲线溶液中间浓度溶液连续测定6次，6次吸光度值的RSD值为0.92%。结果表明该方法的仪器精密度良好。

2.3 线性关系试验 取磷酸氢钙对照品约25 mg，精密称定，置50 mL量瓶中，加0.1 mol·L-1盐酸溶液使溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取2.5、4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、7.5 mL，分别置50 mL 量瓶中，各加5%镧溶液1 mL，用0.1 mol·L-1盐酸溶液稀释至刻度，摇匀，作为磷酸氢钙对照品系列溶液，在422.7 nm波长处测定吸光度。以磷酸氢钙浓度C为横坐标，以吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。结果见表1，表明磷酸氢钙在25.88～77.63μg·mL-1浓度范围内与吸光度值呈良好的线性关系。

表1 磷酸氢钙浓度与吸光度值线性关系

2.4 重复性试验 取同一批供试品(样品编号为P0163)，同法重复测定6次，6次测定的结果见表2，表明该方法的重复性良好。

表2 磷酸氢钙含量测定重复性试验结果

2.5 加标回收率试验 精密称取本品细粉适量(约相当于磷酸氢钙25 mg)，置100 mL量瓶中，共9份，分别精密加入磷酸氢钙对照品20、25、30 mg，每个质量浓度各加3份，按照“1.3.1”项下方法处理，共制得9份加标供试品溶液。按“1.3.5”项下方法测定，计算加标回收率，结果磷酸氢钙的平均回收率为99.39%，RSD为1.2%(n＝9)，结果见表3，表明该方法的准确度良好。

表3 磷酸氢钙含量测定加标回收率试验结果

2.6 样品测定 取不同生产企业的赖氨酸磷酸氢钙片按“1.3.1”项下方法制备供试品溶液，按“1.3.5”项下方法测定，并与按照现行国家药品标准WS-10001-(HD-0388)-2002-2012中磷酸氢钙的含量测定方法(滴定法)的结果进行比较，结果见表4。

表4 两种不同方法磷酸氢钙含量测定结果

3 讨论与结论

赖氨酸磷酸氢钙片现行质量标准为国家药品标准WS-10001-(HD-0388)-2002-2012，该标准中规定磷酸氢钙的含量测定方法为样品加适量稀盐酸溶解后，加入过量的EDTA滴定液，再加氨试液调节pH＝10，用锌滴定液滴定过量的EDTA，然后根据消耗的锌滴定液计算磷酸氢钙的含量。赖氨酸磷酸氢钙片的辅料中通常含有硬脂酸镁作为润滑剂，在pH＝10时，钙离子和镁离子均可与EDTA生成稳定的络合物，因此，辅料中镁离子会带来干扰导致钙含量测定结果偏高。此外，采用返滴法测定时终点颜色变化不明显且终点颜色容易褪色，导致滴定终点不易判断，从而影响测定结果的准确性。

有文献报道，郭国宁[5]磷酸氢钙中钙含量的测定方法首先采用三氯化铁为沉淀剂，除去溶液中的磷，用三乙醇胺作掩蔽剂，调节溶液pH值至13，用EDTA直接滴定法测定钙的含量。该方法调节pH＝13，可使镁离子沉淀，消除其对钙离子测定的干扰，但该法需要严格控制三氯化铁的加入量和沉淀磷时溶液的pH值，否则将会影响测定结果的准确性，因赖氨酸磷酸氢钙片中磷酸氢钙含量测定时，样品取样量少，且辅料较多，调节pH时不宜控制，同样会影响测定结果的准确性。该法与高锰酸钾法均操作烦琐，试验时间长，不适于大量样品的检测。

本研究采用原子吸收分光光度法，前处理过程中将不溶性的辅料滤除，减少了干扰，过滤后仅存在少量镁离子，在422.7 nm波长处不干扰钙离子的测定，样品测定结果显示，原子吸收分光光度法测定的结果与法定标准测定的结果偏低，说明原子吸收分光光度法可以消除硬脂酸镁的干扰。

该方法与国家药品标准WS-10001-(HD-0388)-2002-2012中规定的磷酸氢钙含量测定方法相比，专属性更强，准确度更高，并且样品分析快速，特别适合大批量样品的快速检测。该方法经过详细的方法学验证及大批量样品分析，证明该方法的检测结果可靠，可用于赖氨酸磷酸氢钙片中磷酸氢钙的含量测定。