microRNA-137基因多态性与缺血性卒中后抑郁的相关性

符家武，吴昊，李君良，叶烨，陈婧，周海红，李友

广东医科大学附属医院神经内科，广东湛江市524001

脑卒中是我国发病率、致残率、致死率和复发率较高的一种脑血管疾病，已成为我国国民死亡的主要原因[1-3]。卒中后抑郁(post-stroke depression，PSD)是脑卒中最常见的一种精神心理障碍并发症，是抑郁障碍的特殊类型，在脑卒中患者中的发病率为25%～79%，其中缺血性脑卒中患者PSD 的发病率更高[4-5]。PSD 临床表现主要为情绪低落和兴趣缺失，严重者引起认知功能障碍，影响患者神经功能康复，降低患者生活质量[6-7]。

PSD 具体的发病机制尚未完全明确。microRNA通过调控神经系统发育信号通路和靶基因表达，参与神经元的生成、塑形和突触发育等过程，与神经精神障碍等疾病密切相关[8-10]。鲁豫等[11]发现，缺血性PSD患者外周血microRNA-137 表达水平降低。Zhao 等[12]发现，PSD 大鼠脑组织和外周血microRNA-137 表达低于正常对照组，过表达microRNA-137 可改善抑郁行为。本研究以广东汉族人为对象，分析microRNA-137 基因内含子区rs1625579 位点多态性与缺血性PSD易感性的关系，并探讨rs1625579 位点不同基因型与microRNA-137表达水平的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料

2017 年1 月至2019 年1 月，广东医科大学附属医院神经内科住院的初发急性缺血性脑卒中患者，均符合全国第四届脑血管病学术会议通过的缺血性脑卒中诊断标准，并经头颅MRI 或CT 检查确诊；发病2 周后，17 项汉密尔顿抑郁量表评分≥8 分者纳入患者组(n=250)。

纳入标准：①年龄≥18 岁；②发病至入院时间≤1周；③能独立配合完成汉密尔顿抑郁量表评分。

排除标准：①并发可能对患者产生消极影响的其他疾病，如恶性肿瘤、自身免疫性疾病、癫痫、出血性脑卒中、痴呆及甲状腺功能减退等；②既往有原发性抑郁症等精神疾病史。

选择同期本院体检中心体检的健康人250 例为对照组。

所有研究对象均为广东汉族人，相互间无血缘关系。两组性别、年龄无显著性差异(P＞0.05)。见表1。

本研究已经广东医科大学附属医院伦理委员会审核通过。所有研究对象均签署知情同意书。

1.2 方法

1.2.1 基因型检测

采集空腹外周静脉血2 ml，基因组抽提试剂盒(QIAGEN公司)提取基因组DNA。SNaPshot[13]检测microRNA-137 基因内含子区rs1625579 多态性位点基因型。

rs1625579 位点多重聚合酶链反应(polymerase chain reaction，PCR)引物序列：

上游5'-TTT AGT CAA CAT TTG CAT TTG GAA GC-3'；

下游5'-CAA CAG ATT CCA AAG GTC TCT AGT GTG C-3'。

1.2.2 外周血单个核细胞microRNA-137检测

密度梯度离心和TRIzol法分别外周血单个核细胞及其总microRNA，逆转录试剂盒将单个核细胞总microRNA 逆转录。SYBR®Premix Ex TaqTM荧光定量试剂盒和实时荧光定量PCR 仪检测microRNA-137 相对表达量，以U6 为内参。PCR 扩增反应体系10 μl，预变性94 ℃3 min，1 个循环；变性94 ℃15 s，退火、延伸和检测荧光62 ℃40 s，共40个循环。

表1 两组一般资料比较

U6引物序列：

上游5'-ATT GGA ACG ATA CAG AGA AGA TT-3'；

下游5'-GGA ACG CTT CAC GAA TTT G-3'。

每个样本重复检测3次，计算2-ΔΔCt值。

1.3 统计学分析

采用SPSS 19.0 统计软件分析数据。Hardy-Weinburg 平衡检验遗传平衡吻合度；等位基因和基因型分布组间比较采用χ2检验。计量资料以()表示，组间比较采用t检验。显著性水平α=0.05。

2 结果

2.1 等位基因和基因型分布

患者组(P=0.116)和对照组(P=0.379)microRNA-137 基因rs1625579 位点基因型分布符合Hardy-Weinburg 平衡。两组间TT、GT 和GG 基因型分布有显著性差异(P＜0.05)；TT 基因型是危险因素(OR=2.139，95%CI 1.272～3.595，P=0.004)；患者组T 等位基因频率明显高于对照组(OR=2.033，95%CI 1.255～3.294，P=0.003)。见表2。

2.2 microRNA-137表达

患者组microRNA-137 相对表达量为(0.68±0.32)，显著低于对照组(1.71±0.48)(t=28.230，P＜0.001)。对照组中，TT 基因型microRNA-137 相对表达量(1.63±0.47)，显著低于GT和GG基因型(1.92±0.52) (t=3.764，P＜0.001)。

3 讨论

PSD 在脑卒中后1 个月内、1～6 个月以及6 个月后，发病率分别约为33%、33%和34%[14-16]。PSD 临床症状多样，难以被早期识别，许多患者未能得到及时有效治疗，延缓神经功能恢复。

microRNA 是一种长度为19～23 个碱基的内源性小RNA 分子，在调控转录后基因表达水平中发挥重要作用。microRNAs 广泛存在于中枢神经系统，参与神经细胞增殖、发育、分化、凋亡，神经元迁移和突触塑形等过程，与缺血性脑卒中、精神分裂症和抑郁症等神经精神疾病密切相关[17-18]。Smalheiser 等[19]发现，抑郁症患者脑组织microRNA-137 表达水平降低。杨晓煜等[20]发现，缺血性PSD 大鼠外周血和脑组织microRNA-137 表达水平降低，可能通过抑制N-甲基-D-天冬氨酸离子能谷氨酸受体2A 基因的表达参与缺血性PSD发病。

microRNA-137 位于1p21.3。Ripke 等[21]的全基因组关联分析发现，microRNA-137 基因rs1625579 位点多态性与精神分裂症易感性相关。本研究以广东汉族人为对象，首次分析microRNA-137 基因rs1625579 位点多态性与缺血性PSD 易感性的关系，发现TT 基因型可能是缺血性PSD 易感的危险因素，可能因为TT基因型导致microRNA-137 表达下降。rs1625579 多态性影响microRNA-137 表达的具体机制，以及microRNA-137 异常表达参与缺血性PSD 发病机制，有待进一步探讨。

本研究样本量相对小，分析了microRNA-137 基因的rs1625579 位点，存在不足。进一步研究可增加样本量，并探讨microRNA-137 基因其余位点多态性与缺血性PSD 易感性的关系。PSD 在卒中后不同时期均可发病，本研究参考以往文献，只选取发病2 周后发病的患者为研究对象。可收集卒中后不同时期并发抑郁症的患者，做进一步分析。

综上所述，microRNA-137 基因内含子区rs1625579 位点多态性与缺血性PSD 易感性密切相关，TT 基因型可能通过下调microRNA-137 的表达，参与缺血性PSD的发病。

表2 两组microRNA-137基因rs1625579位点基因型和等位基因分布

利益冲突声明：所有作者声明不存在利益冲突。