SPF 金黄仓鼠乳主要营养成分及氨基酸组成分析

范方玲, 夏 爽, 甘 露, 夏 放

(成都生物制品研究所有限责任公司, 成都610023)

金黄仓鼠(Mesocricetus auratus; Golden hamster)又称叙利亚仓鼠，属哺乳纲啮齿目仓鼠科仓鼠亚科动物，来源于1930年从叙利亚Aleppo地区捕获的3 只野生仓鼠。世界上育成的金黄仓鼠近交系38 个, 部分近交系8 个, 突变系17 个，封闭群38个，目前使用的金黄仓鼠大部分属于封闭群[1]。金黄仓鼠作为实验动物的时间短于大鼠和小鼠，但现已广泛应用于生理学、肿瘤学、遗传学、传染病学、药理学、毒理学和营养学等诸多生物医学领域[2]。本公司于2003 年率先在国内建立疫苗生产用SPF 金黄仓鼠种群，种群质量长期保持稳定[3-4], 并用微卫星标记对SPF 金黄仓鼠进行遗传检测[5]。谢夏阳等[2]对于SPF 金黄仓鼠的主要生物学特性进行了详细的研究报道。但目前国内外尚无关于无菌仓鼠种群的相关研究报道，本文通过采集SPF 金黄仓鼠乳, 对其主要营养成分和氨基酸进行检测, 并与文献报道的小鼠乳[6-8]、大鼠乳[7,9,10]、豚鼠乳[6-7]、兔乳[11-13]、牛乳[14-15]及婴儿配方乳[16]的主要成分进行比较，以便为创建无菌金黄仓鼠配方乳提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 材料

SPF 级金黄仓鼠乳：采自成都生物制品研究所有限责任公司饲养的SPF 金黄仓鼠种群[SCXK(川)2016-126]。动物饲养在万级屏障设施中，环境温度控制在20～26 ℃，相对湿度40%～70%，每日光照12 h，定期更换笼具和清洁消毒，饲养间内保持清洁、安静、通风良好。金黄仓鼠妊娠哺乳期间自由采食全价颗粒饲料, 饲料主要营养成分符合国家实验动物配合饲料标准GB14924.1-2001 和GB14924.3-2010。

1.2 方法

1.2.1 乳汁的采集 共选取了160只分娩后1～10 d的哺乳期雌鼠(70～90 日龄，体质量170～200 g)。每批选取10 只，先将幼崽与母鼠分笼饲养4 h 以上，同时保持母鼠水料充足。4 h 后给母鼠腹腔注射3%戊巴比妥钠0.6 mL/只，再注射兽用缩宫素(宁波市三生药业有限公司, 2 mL: 10单位/支)0.3 mL/只。待母鼠处于完全麻醉放松状态后，暴露乳头, 用温水清洁乳头皮肤并轻柔按摩, 用自制电动吸奶装置收集乳汁, 隔日1次, 连续3～5次，每只金黄仓鼠采取乳汁总量约6～10 mL，每次采集完毕立即冻存于-26 ℃备用。

1.2.2 基本营养成分和矿物质元素的测定 将所冻存的金黄仓鼠乳汁(混合样品)低温运送至广州金域医学检验中心有限公司[该公司是拥有美国病理学会(College of American Pathologists，CAP)和ISO15189 双认可的第三方医学实验室]，由该公司按照国家标准进行基本营养成分和矿物质元素的检测。粗蛋白含量测定参照GB/T6432-1994，采用自动凯氏定氮仪法；粗脂肪测定参照GB/T 6433-2006，采用石油醚提取法；乳糖测定参照GB/T 6433-2006，采用莱茵-埃农氏法；灰分测定参照GB 5009.4-2016，采用灼烧法；水分测定参照GB 5009.3-2016，采用直接干燥法；钾、锌、钙、铁、钠、铜、镁、硒测定参照G B 5009.268-2016，采用电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)；磷测定参照GB/T 5009.87-2016，采用钼蓝分光光度法。

1.2.3 氨基酸测定 将冻存的金黄仓鼠乳汁(混合样品)低温运送至中国广州分析测试中心，由该中心按照国家标准GB5009.124-2016，使用氨基酸检测仪检测。

1.3 其他动物乳及婴儿配方乳主要营养成分

通过文献检索获取其他动物乳及婴儿配方乳主要营养成分资料。婴儿配方奶粉的主要营养成分和矿物质元素参照雅士利奶粉a 金装1 段。

1.4 数据处理

2 结果

2.1 基本营养成分

金黄仓鼠乳汁中主要成分有蛋白质、脂肪 、水、乳糖和矿物质 (无机盐类)，与其他哺乳动物乳汁的营养成分相似，各成分含量见表1。金黄仓鼠乳汁与小鼠、豚鼠、大鼠这几种小型啮齿类动物乳汁相比(表1)，其蛋白质和脂肪含量均较低，水分含量较高。金黄仓鼠乳汁与兔乳、牛乳、婴儿配方奶粉相比(表1)，其蛋白质含量远低于兔乳和婴儿配方奶粉，是兔乳的51%，婴儿配方奶粉的57%，但高于牛乳，是牛乳的2 倍;脂肪含量也远低于兔乳和婴儿配方奶粉，略低于牛乳；乳糖含量也低于牛乳和婴儿配方奶粉，但高于兔乳。与牛乳相比，金黄仓鼠乳具有高蛋白、低脂肪、低乳糖的特点。

2.2 矿物质元素

金黄仓鼠乳汁的矿物质成分主要由钙、磷、钾、钠、镁、锌、铜等组成(表2)。从表2 可见，金黄仓鼠乳中的钙和磷含量与大多数啮齿动物和其他哺乳动物乳中钙磷含量相当。此外，金黄仓鼠乳中的钙磷比(Ca∶P)为1.46，接近其他几种啮齿动物乳(1.2～1.85)，属于适合产后生长的钙磷比范围(1.5～2.0)。金黄仓鼠乳中矿物质成分的含量均低于婴儿配方奶粉；但钾含量比兔乳高，钙磷钠镁的含量和兔乳相差不大；除锌、铜外，其他元素含量和牛奶较为接近。

表1 金黄仓鼠乳汁与其他动物乳汁主要营养成分比较Table 1 Comparison of the major nutrients of golden hamster’s milk with other animal milk (g/kg)

表2 金黄仓鼠乳汁与其他动物乳汁矿物质含量比较Table 2 Comparison of the mineral composition of golden hamster’s milk with other animal milk

2.3 氨基酸组成

金黄仓鼠乳汁中有天冬氨酸、苏氨酸、丝氨酸等16 种氨基酸(表3)。其中每千克乳汁中水解氨基酸总含量为61 g，必需氨基酸(EAA)含量24.4 g 。EAA 与总氨基酸(TAA)含量比值为0.4，EAA 与非必需氨基酸(NEAA)比值为0.667，与FAO/WHO提出的EAA/TAA为0.400，EAA/NEAA为0.600[17]相接近。以上结果说明，金黄仓鼠乳是一种优质蛋白质。金黄仓鼠乳中谷氨酸含量最高，达14.5 mg/g，占氨基酸总量的23.77%；其次为亮氨酸，含量为6.3 mg/g ，占氨基酸总量的10.32%。金黄仓鼠乳的16 种氨基酸总量是牛乳的2 倍，是婴儿配方乳的31%，是小鼠乳的51%，也低于大鼠乳和兔乳。各氨基酸含量均比牛乳高，但均低于婴儿配方乳，与小鼠乳、大鼠乳、兔乳相比存在较大差异。

3 讨论

无菌动物(germfree)，是指不能检出任何活的微生物和寄生虫的动物。由于无菌动物体内外不携带任何生物体，由此可排除生物对于实验结果的干扰，从而明显提高实验的敏感性、重复性，并有利于探究生命活动基本规律，目前已在生物、医学等方面有广泛的应用[18]。无菌动物主要通过无菌剖宫产手术或无菌胚胎移植进行无菌化而获得，并且利用无菌饲养方法维持于无菌隔离器中[19]。目前国内无菌金黄仓鼠正处于研发阶段，所以通过无菌剖宫产手术方法获得无菌金黄仓鼠前，必须对无菌金黄仓鼠营养需求进行研究，筛选出满足无菌金黄仓鼠营养需求的人工配方乳，才能提高无菌金黄仓鼠乳鼠的成活率，这也是能否成功培育无菌金黄仓鼠的关键所在。文献报道[20-21]，根据大鼠乳的营养成分，配制的大鼠人工配方乳能够成功饲养大鼠乳鼠，其营养成分完全符合大鼠乳鼠的营养需求，人工配方乳是能够替代鼠乳饲喂乳鼠的。因而，通过了解金黄仓鼠乳汁营养成分对配制无菌金黄仓鼠人工配方乳至关重要。金黄仓鼠乳汁中蛋白质、脂肪、乳糖等基本营养成分、矿物质元素以及16种氨基酸的含量与牛乳、婴儿配方乳、兔乳、小鼠乳、大鼠乳、豚鼠乳的含量都存在着较大差异，因而不能使用一种乳作为代乳品，但可以参照其营养成分加以调配。

表3 金黄仓鼠乳汁与其他动物乳汁氨基酸组成比较Table 3 Comparison of amino acid composition of golden hamster’s milk with other animal milk (g/kg)