S100B 蛋白、NSE 与HIE 患儿病情严重程度及神经行为功能相关性分析

付 慧，熊 虹，康文清，许邦礼，卢瑞存

（郑州大学附属儿童医院 河南省儿童医院 郑州儿童医院新生儿内科，河南 郑州 450003）

新生儿缺氧缺血性脑病（hypoxic-ischemic encephalopathy，HIE）是围产期新生儿窒息引起脑部缺氧缺血导致的脑损伤，其临床症状以中枢神经系统异常为主。早产儿HIE发病率较足月儿高，但足月儿是主要的新生儿群体，故足月儿HIE发生例数较早产儿多[1]。目前，HIE是我国新生儿慢性神经系统后遗症及死亡的主要原因，是需重点预防和治疗的新生儿疾病，早期诊断、有效治疗和准确判断预后、及时进行康复干预对降低HIE围生期新生儿死亡率，促进患儿健康成长，降低致残风险有重要意义[2]。神经元特异性烯醇化酶（neuron-specific enolase，NSE）是临床常用的脑损伤生物标志物，具有高特异性和高敏感性，是脑损伤预后评估的可靠指标之一。脑部缺血缺氧损伤后，脑细胞释放S100B蛋白进入脑脊液，随后进入外周血，故外周血S100B蛋白水平与脑损伤有关[3]。本研究拟分析S100B蛋白、NSE与HIE的关系。

1 材料和方法

1.1 研究对象

选取2015年1月—2017年3月河南省儿童医院儿科收治的HIE患儿68例，按HIE病情严重程度分为重度HIE组、中度HIE组和轻度HIE组。（1）重度HIE组：20例，男11例，女9例，胎龄（35.15±0.95）周，体质量（2.39±0.38）kg，足月17例，早产2例；（2）中度HIE组：25例，男12例，女13例，胎龄（35.04±0.90）周，体质量（2.40±0.19）kg，足月21例，早产4例；（3）轻度HIE组：23例，男12例，女11例，胎龄（35.20±0.68）周，体质量（2.37±0.22）kg，足月22例，早产1例。HIE诊断参考中华医学会儿科分会新生儿学组修订的2005年版HIE诊断标准[4]。另选取同期河南省儿童医院体检健康的新生儿25 名作为正常对照组，其中男13例、女12例，胎龄（35.17±0.66）周，体质量（2.41±0.22）kg，足月23例，早产2例。HIE组与正常对照组性别、胎龄、体质量差异均无统计学意义（P＞0.05）。本研究经河南省儿童医院伦理委员会审批通过。

1.2 相关标准

1.2.1 纳入标准 患儿法定监护人签署知情同意书，患儿符合HIE诊断标准。

1.2.2 排除标准 新生儿高胆红素血症、产伤、感染性脑损伤、宫内感染、电解质紊乱、颅内出血、严重脑发育异常。

1.2.3 HIE病情分级标准[5]（1）轻度：意识兴奋且在24 h较显著，原始反射、肌张力正常，无中枢性呼吸衰竭、瞳孔异常、惊厥，前囟张力正常；（2）中度：嗜睡、反应迟钝、偶尔前囟较饱满，原始反射、肌张力减弱，有惊厥，有较轻的或没有瞳孔变化及中枢性呼吸衰竭；（3）重度：意识昏迷，间歇性伸肌张力增加或肌张力松软，原始反射逐渐消失，常有中枢性呼吸衰竭和惊厥，前囱张力较高。

1.2.4 新生儿行为神经测定（neonatal behavioral neurological assessment，NBNA）评分[6]NBNA评分包括新生儿行为能力、被动肌张力、主动肌张力、原始反射、一般反应共5个维度。新生儿行为维度包括：（1）对光的习惯形成；（2）对“格格”声的习惯形成；（3）非生物性听定向反应；（4）生物性视、听定向反应；（5）非生物性视定向能力；（6）安慰。被动肌张力维度包括以下项目：（1）围巾正；（2）前臂回缩；（3）下肢弹回；（4）腘窝角。主动肌张力维度包括：（1）支持反应；（2）牵拉反应；（3）握持反应；（4）头竖立反应。原始反射维度包括：（1）吸吮反射；（2）拥抱反射；（3）自动踏步。一般反应维度包括：（1）活动度；（2）哭声；（3）觉醒度。以上每个小项目的分值均分为0、1、2分。本量表适用于足月新生儿，早产儿需纠正到40周时再进行评估，分别于出生后2～3 d、12～14 d、26～28 d评估3次。以1周内新生儿NBNA评分＞37分为正常，分值越高则神经系统发育预后越好，反之越差。

1.3 方法

1.3.1 样本采集 分别采集HIE患儿出生24 h、48 h、72 h和7 d的清晨空腹静脉血2 mL。采集正常新生儿出生24 h的清晨空腹静脉血2 mL。所有静脉血样本以1000×g离心10 min后取0.5 mL血清，-80℃保存待测。样本收集、保存由专人统一进行。

1.3.2 S100B蛋白及NSE检测采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）检测血清S100B蛋白和NSE水平，试剂盒购自美国BPB公司，检测仪器为Multiskan FC酶标仪（美国Thermo公司）。严格按试剂盒说明书操作。

1.4 统计学方法

采用SPSS 18.0软件进行统计分析。呈正态分布的数据以表示，多组间比较采用方差分析，两两比较采用q检验。计数资料以率表示，组间比较采用χ2检验。采用Spearman相关分析评估血清S100B蛋白、NSE水平与NBNA评分及HIE病情严重程度的相关性。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 HIE组与正常对照组血清S100B蛋白、NSE水平及NBNA评分、NBNA评分异常率的比较

正常对照组、轻度HIE 组、中度HIE 组、重度HIE组血清S100B蛋白、NSE水平及NBNA 评分异常率依次升高，NBNA 评分依次降低，各组间差异均有统计学意义（P＜0.001）。见表1。

表1 HIE患儿与正常对照者血清S100B蛋白、NSE水平及NBNA评分、NBNA评分异常率的比较

2.2 HIE患儿血清S100B蛋白、NSE水平与NBNA评分及HIE病情严重程度的相关性分析

血清S100蛋白、NSE水平与NBNA评分呈负相关（r值分别为-0.243、-0.542，P＜0.001），与HIE 病情严重程度呈正相关（r值分别为0.398、0.476，P＜0.001）。

2.3 轻度HIE组、中度HIE组、重度HIE组不同出生时间S100B蛋白、NSE水平的变化

随着出生时间的延长，重度HIE组、中度HIE组、轻度HIE组血清S100B蛋白和NSE水平均逐渐降低（P＜0.001）。轻度HIE组、中度HIE组、重度HIE组同一时间点血清S100B蛋白和NSE水平均依次升高（P＜0.001）。见表2、表3。

表2 轻度HIE组、中度HIE组、重度HIE组不同出生时间血清NSE水平的比较 μg/mL，

表2 轻度HIE组、中度HIE组、重度HIE组不同出生时间血清NSE水平的比较 μg/mL，

表3 轻度HIE组、中度HIE组、重度HIE组不同出生时间血清S100B蛋白水平的比较 μg/mL，

表3 轻度HIE组、中度HIE组、重度HIE组不同出生时间血清S100B蛋白水平的比较 μg/mL，

3 讨论

HIE主要由围生期新生儿窒息引起，是由多个因素经多个途径综合引起的生化反应“瀑布样”发生的结果，病情较重，其主要机制有神经元细胞内钙离子超负荷、脑血管自主调节障碍、细胞代谢障碍、氧自由基损伤、神经细胞凋亡、谷氨酸的兴奋毒性、免疫因子损伤等[7-8]。目前，HIE主要采用影像学方法，如电子计算机断层扫描（computed tomography，CT）、超声、磁共振成像等进行诊断，但影像学方法有明显的局限性，因此无法早期诊断HIE[9]。阿氏评分应用较广，但诊断HIE的特异性较低[10]。因此，临床亟需更好的方法用于HIE的早期诊断。

S100B蛋白是神经组织蛋白，主要分布于周围神经系统和中枢神经系统的星型胶质细胞、某些神经元细胞、雪旺细胞中，是神经元与角质细胞相互作用的桥梁，对神经元及其周围环境有重要影响[11]。脑组织出现缺氧、缺血时，细胞发生凋亡，S100B蛋白被释放并进入脑脊液，通过被破坏的血脑屏障进入血液循坏系统[12]，缺氧、缺血的程度越严重，细胞死亡越多，S100B蛋白释放量越多，血清中S100B蛋白水平越高[13]。因此，血清S100B蛋白是评估急性脑梗死及中枢神经系统损伤程度的重要指标。本研究结果显示，正常对照组、轻度HIE组、中度HIE组、重度HIE组S100B蛋白依次升高（P＜0.001），且与HIE病情严重程度呈正相关（r=0.398，P＜0.001），与曾祥士等[13]的研究结果一致。

血清及脑脊液NSE水平能反映神经系统损伤的范围和程度。脑组织缺血、缺氧时，神经细胞受损，导致NSE水平升高，因此NSE常与临床症状、体征等结合用于神经系统疾病的早期诊断和病情评估，同时还可评估脑实质损伤的严重程度[14]。本研究结果显示，正常对照组、轻度HIE组、中度HIE组、重度HIE组NSE水平依次升高（P＜0.001），且与HIE病情严重程度呈正相关（r=0.476，P＜0.001），与王石等[15]的研究结果[血清S100B与HIE严重程度呈正相关（r=0.402，P＜0.001）]一致。本研究还比较了HIE患儿出生24 h、48 h、72 h和7 d的血清S100B蛋白、NSE水平，结果显示随着出生时间的延长，血清S100B蛋白、NSE水平明显降低（P＜0.001）。提示S100B蛋白、NSE水平可用于HIE病情的动态观察。中枢神经系统症状是HIE发病后的主要表现，因此HIE患儿存在不同程度的神经行为功能异常。钱庆燕等[16]的研究结果显示，中枢神经行为功能损伤越重，HIE患儿血清NSE水平越高，与本研究结果一致。NBNA评分是目前评估新生儿神经行为功能较为客观的评价工具，能反映新生儿行为能力、主动肌张力、被动肌张力、原始反射等情况。本研究结果显示，血清S100B蛋白、NSE水平与NBNA评分呈负相关（r值分别为-0.243、-0.542，P＜0.001）。提示S100B蛋白、NSE水平与中枢神经系统损伤程度有关。

综上所述，血清S100B蛋白、NSE水平与HIE的病情及患儿神经行为功能异常有关，或可用于HIE的早期辅助诊断和病情动态观察。本研究详细分析了不同出生时间HIE患儿血清S100B蛋白、NSE水平的变化情况，并分析其与NBNA评分的关系，进一步明确了血清S100B蛋白、NSE在HIE预后评估中的意义。但本研究样本量较小，今后还需扩大样本量进一步验证本研究结论。