25%咪鲜胺·稻瘟酰胺微囊悬浮-悬浮剂的高效液相色谱分析

潘 静，刘润峰，高敬雨

（北京明德立达农业科技有限公司，北京 102206）

咪鲜胺（prochloraz）化学名称：N-丙基-N-[2-(2,4,6-三氯苯氧基)乙基]咪唑-1-甲酰胺，是一种广谱性杀菌剂，广泛用于治疗和铲除由尾孢属、核腔菌属、喙孢属、核盘菌属、镰孢属及白粉菌、炭疽菌等致病菌所引起的油料作物、谷类、热带和亚热带水果、观赏植物、蔬菜及各种经济作物的病害，也用于种子、苗木处理及防治收获后水果贮存期的病害[1]。我国自20世纪90年代开始对咪鲜胺进行广泛的药效试验，其对花生褐斑病、油菜菌核病、茶炭疽病等都有明显的防效，且用量较低[2]。稻瘟酰胺（fenoxanil）化学名称：N-(1-氰基-1，2-二甲基丙基)-2-(2，4-二氯苯氧基)丙酰胺，属黑色素生物合成抑制剂[3]。稻瘟酰胺是一种用于防治水稻稻瘟病的苯氧酰胺类杀菌剂[4]，作用机制新颖，在叶面和水下施用时防治稻瘟病效果极佳。25%咪鲜胺·稻瘟酰胺囊悬浮-悬浮剂对水稻稻瘟病有较好的防治效果[5]。咪鲜胺和稻瘟酰胺单剂的分析方法已有报道，但两者复配剂型的分析方法未见报道[6]。本文采用高效液相色谱的反相法对25%咪鲜胺·稻瘟酰胺微囊悬浮-悬浮剂进行了测定，旨在探索检测咪鲜胺和稻瘟酰胺复配制剂的理论方法。

1 材料与方法

1.1 仪器设备

1260高效液相色谱仪，具可变波长紫外检测器，带自动进样装置和色谱数据处理工作站，美国安捷伦公司；过滤器：滤膜孔径0.45 μm。

1.2 试剂

乙腈，色谱纯；冰乙酸，分析纯；水，新蒸二次蒸馏水；咪鲜胺标样（≥98.0%）、稻瘟酰胺标样（≥98.0%）、25%咪鲜胺·稻瘟酰胺微囊悬浮-悬浮剂（15%咪鲜胺＋10%稻瘟酰胺），北京明德立达农业科技有限公司。

1.3 色谱操作条件

色谱柱：ZORBAX Eclipse Plus C8色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；检测波长230 nm；流动相：乙腈＋0.3%冰乙酸水溶液（体积比为72∶28）；流速1.0 mL/min，进样量：5 μL，柱温：23～27℃。

在上述色谱操作条件下，咪鲜胺的保留时间约为5.1 min；稻瘟酰胺的保留时间约为6.1 min（图1、图2）。

图1 咪鲜胺、稻瘟酰胺标准样品的高效液相色谱图

图2 25%咪鲜胺·稻瘟酰胺微囊悬浮-悬浮剂的高效液相色谱图

1.4 溶液配制

1.4.1 标样溶液的配制

称取含咪鲜胺0.015 g、稻瘟酰胺0.010 g的标准品（精确至0.000 02 g），置于同一50 mL的容量瓶中，加入适量的乙腈溶解，超声脱气10 min，使标样全部溶解，冷至室温后，用流动相定容、摇匀后备用。

1.4.2 试样溶液的配制

称取咪鲜胺0.015 g、稻瘟酰胺0.010 g（精确至0.000 02 g），置于50 mL容量瓶中，加入适量乙腈溶解，并超声脱气10 min，使试样全部溶解，冷却至室温，用流动相定容、摇匀后，用孔径为0.45 μm有机系滤膜过滤后备用。

1.5 测定方法

按以上色谱操作条件，待仪器基线稳定后，连续注入数针标样溶液，计算各针相对响应值，直至相邻两针咪鲜胺（稻瘟酰胺）响应值相对变化小于1.5%时，按照标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序进行测定。用外标法计算各自含量。

1.6 计算方法

将测得的两针试样溶液以及试样前后两针标样溶液中的咪鲜胺（稻瘟酰胺）峰面积分别进行平均。被试物中各检测成分的质量分数w（%）按式（1）计算。

式中：A1为标样溶液中咪鲜胺（稻瘟酰胺）峰面积平均值，mAU·s；A2为试样溶液中咪鲜胺（稻瘟酰胺）峰面积平均值，mAU·s；m1为标样溶液中咪鲜胺（稻瘟酰胺）的质量，g；m2为试样的质量，g；P为标样中咪鲜胺（稻瘟酰胺）的质量分数，%。

2 结果分析

2.1 检测波长的选择

检测波长是影响紫外吸收的因素，波长的选择决定峰面积和峰高的大小。分别对咪鲜胺和稻瘟酰胺标样溶液进行紫外扫描，得到相应的吸收波长。咪鲜胺和稻瘟酰胺在200 nm附近均有最大紫外吸收，但稻瘟酰胺在230 nm处还有一较大紫外吸收，而且在200 nm的波长下杂质的响应值较多，对咪鲜胺和稻瘟酰胺会有一定的干扰，综合多种因素考虑，最终决定咪鲜胺、稻瘟酰胺的检测波长为230 nm。两者紫外吸收光谱图见图3。

图3 咪鲜胺和稻瘟酰胺紫外扫描图

2.2 流动相的选择

经过多次试验，分别以甲醇＋水和乙腈＋水及甲醇＋冰乙酸水溶液和乙腈＋冰乙酸水溶液等的配比作为流动相进行，结果发现用乙腈＋0.3%冰乙酸水溶液（体积比为72∶28）作为流动相，流速为1.0 mL/min时，分离效果好，出峰时间短，且峰形较尖锐、对称。综合以上因素，最终选定乙腈＋0.3%冰乙酸水溶液（体积比为72∶28）作为流动相。

2.3 分析方法的线性关系曲线

称取咪鲜胺标准品约0.077 16 g、稻瘟酰胺标准品约0.050 36 g置于同一50 mL容量瓶中，用适量乙腈溶解、流动相定容，用移液管分别量取0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL溶液于6个10 mL容量瓶中，乙腈定容，配制咪鲜胺、稻瘟酰胺标准溶液。待仪器稳定后，在上述色谱条件下，按浓度从低到高的顺序进样，每个浓度进样两次。以进样的质量浓度为横坐标、峰面积为纵坐标，作标准曲线，得咪鲜胺线性方程y=9.639 6x-9.304 7，线性相关系数R2=0.999 2，表明线性关系良好（图4）；稻瘟酰胺线性方程y=9.580 1x-38.785 4，线性相关系数R2=0.999 4，表明线性关系良好（图5）。

2.4 分析方法的精密度

选取一个有代表性的25%咪鲜胺·稻瘟酰胺微囊悬浮-悬浮剂试样，在上述色谱操作条件下，对其有效成分（咪鲜胺、稻瘟酰胺）的质量分数进行测定，计算标准偏差和相对标准偏差，结果见表1。由表1可见咪鲜胺和稻瘟酰胺的标准偏差分别为0.14和0.08，相对标准偏差分别为0.93%和0.81%，表明该方法的精密度好。

2.5 分析方法的准确度

在已知含量的样品中加入不同质量的咪鲜胺、稻瘟酰胺的标样，按上述色谱操作条件进行5次测定，计算其各自回收率，结果见表2。咪鲜胺平均回收率为99.72%；稻瘟酰胺平均回收率为99.36%，表明此方法具有较高的准确度。

图4 咪鲜胺线性关系图

图5 稻瘟酰胺线性关系图

表1 25%咪鲜胺·稻瘟酰胺微囊悬浮-悬浮剂精密度测定

表2 25%咪鲜胺·稻瘟酰胺微囊悬浮-悬浮剂准确度测定

3 结 论

本文提出了25%咪鲜胺·稻瘟酰胺微囊悬浮-悬浮剂中有效成分咪鲜胺、稻瘟酰胺质量分数的高效液相色谱分析方法，该方法既可以检测咪鲜胺与稻瘟酰胺的复配剂型的制剂，还可以检测咪鲜胺、稻瘟酰胺单个剂型的制剂，也适用于咪鲜胺、稻瘟酰胺原药的检测。此方法具有操作容易、速度快、分离好的优点，精密度和准确度较高，是咪鲜胺和稻瘟酰胺复配制剂检测的理想方法。