花生和土壤中噻虫胺超高效液相-串联质谱仪检测及分析方法

李清华，任立瑞，尹明明，陈福良，李文明

（1.中国农业科学院植物保护研究所，农业农村部作物有害生物综合治理重点实验室，北京 100193；2.河南农业大学植物保护学院，郑州 450000）

噻虫胺（clothianidin），分子式为C6H8ClN5O2S，是高效、安全、高选择性的一类新烟碱类农药，具有卓越的内吸、触杀和胃毒作用。2012年，噻虫胺在我国取得登记，已登记的噻虫胺剂型以颗粒剂和悬浮剂为主，此外还有水分散粒剂、悬浮种衣剂和可湿性粉剂等。噻虫胺已被广泛用于水稻、番茄和茶树等作物，用以防治稻飞虱、蚜虫等害虫[1]。近年来，已报道关于噻虫胺的残留检测方法有：液相色谱法（LC）[2-3]，高效液相色谱法（HPLC）[4-6]，液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）[7-9]，超高效液相色谱-串联质谱法（UPLC-MS/MS）[10-12]。前处理方法有：基质分散萃取法（MDE）[13]，固相萃取法（SPE）[14]，分散固相萃取（DSPE）[15]，液液微萃取法（LLM）[16]。检测作物有：韭菜[17]、草莓[18]、绿豆[19]等。目前，关于噻虫胺在花生上的残留及分布情况尚未见报道，我国也尚未制定噻虫胺在花生中的MRL值[20]。因此，本文建立了同时检测花生及土壤中噻虫胺残留的QuEChERS方法及超高效液相-串联质谱（UPLC-MS/MS）检测方法，为噻虫胺在花生中的残留检测提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

XevoTM TQ-S超高效液相-串联质谱仪（UPLCMS/MS），美国沃特世公司；BSA224S-CW电子天平，德国Sartorius公司；Vottex QL-861涡旋仪，海门市其林贝尔仪器制造有限公司。

99.0%噻虫胺标样，德国Ehrenstorfer公司；18%噻虫胺包埋颗粒剂，中国农业科学院植物保护研究所；乙腈（色谱纯），美国Fisher Scientific公司；乙腈（分析纯），国药集团化学试剂有限公司；NaCl（分析纯）、无水MgSO4（分析纯），国药集团化学试剂有限公司；PSA、C18，美国安捷伦公司；纯净水，杭州娃哈哈集团有限公司。

1.2 试验方法

1.2.1 仪器条件

色谱条件：Acquity UPLC BEH C18色谱柱（2.1 mm×50 mm，1.7 μm），美国沃特世公司；柱温：35℃；流动相：乙腈＋0.2%甲酸水溶液（体积比90∶10）；流速：0.28 mL/min；进样量：3 μL。

质谱条件：ESI正离子源模式电离；多反应检测（MRM）；毛细管电压：3.0 kV；锥孔电压：52 V；离子源温度：150℃；脱溶剂温度：300℃；脱溶剂气流量：500 L/h；锥孔气流量：50 L/h；定量离子对：168.80/249.90。

图1为0.1 mg/L噻虫胺乙腈溶剂标准溶液色谱图，在上述液相色谱条件下，噻虫胺的相对保留时间为1.33 min。

1.2.2 样品前处理

分别称取花生仁、花生壳、土壤各10.0 g，花生叶片5.0 g，置于50 mL离心管中，加入5 mL超纯水（花生叶片不加水），加入10 mL乙腈，振荡10 min；再加1 g NaCl和4 g无水MgSO4，振荡5 min，4 000 r/min离心5 min。取1.5 mL上清液至装有50 mg PSA和150 mg无水MgSO4的2 mL离心管中（花生仁、叶片净化剂为50 mg PSA和50 mg C18），涡旋2 min，以5 000 r/min速度离心5 min，将上清液过0.22 μm滤膜至2 mL进样瓶，待测。

图1 0.1 mg/L 噻虫胺乙腈溶剂标准色谱图

1.3 标准溶液配制

称取噻虫胺标准品0.010 1 g于50 mL容量瓶中，用乙腈溶解并定容，制备200 mg/L的标准储备液，置于4℃冰箱保存。分别用乙腈将噻虫胺标准储备液梯度稀释至0.005、0.010、0.020、0.050、0.100、0.200、0.500、1.000、2.000 mg/L，作为噻虫胺溶剂标准工作溶液。用空白基质提取液配制相同浓度梯度的噻虫胺溶液，作为噻虫胺基质标准工作溶液。

2 结果与分析

2.1 方法标准曲线、线性相关性和基质效应

将噻虫胺标准溶液在上述仪器条件下测定，以噻虫胺浓度与对应峰面积绘制标准曲线，噻虫胺标准溶液进样质量浓度（x）为横坐标，峰面积（y）为纵坐标。结果表明，在0.005～2.000 mg/L质量浓度范围内，y=294 824x＋8 145.6，R2=0.999 3，线性关系良好。以方法的最低检测浓度0.005 mg/kg为定量限。基质效应（ME值）为基质标准曲线斜率/溶剂标准曲线斜率，当ME值大于1.1时，表现为基质增强效应；ME值小于0.9时，表现为基质减弱效应；当ME值介于0.9～1.1时，基质效应可以忽略[21]。由表1可知，花生叶片和花生壳均存在基质增强效应，故需引入基质标准曲线校正。

2.2 添加回收率与精密度

分别在空白花生叶片、花生仁、花生壳及土壤样品中添加3个水平的噻虫胺标准溶液，使得噻虫胺添加浓度分别为0.01、0.10、1.00 mg/kg，每个添加水平重复5次。将添加样品密封，静置2 h后，按照1.2.2操作，得到的添加回收样品，采用1.2.1分析方法进行测定，结果见表2。当添加浓度为0.01～1.00 mg/kg时，噻虫胺在3种花生基质中平均添加回收率为93.8%～110.6%，变异系数为1.38%～8.13%；在土壤中的添加回收率为93.2%～104.0%，变异系数为1.21%～1.41%。结果表明，本方法具有较高的回收率与精确度，满足农药残留检测要求[22]。

表1 噻虫胺标准曲线方程及相关系数

表2 添加回收率与相对标准偏差

2.3 方法应用

采用本文建立的方法，播种时，花生经18%噻虫胺包埋颗粒剂混土穴施且仅施药1次，收获期检测花生及土壤样品中噻虫胺残留量，河南和山东两地样品中，噻虫胺在花生叶片、花生壳、花生仁及土壤中均能检测到，并且其残留量由高到低的顺序依次为花生叶片、花生壳、土壤、花生仁，且花生叶片中残留量明显高于花生样品其他组织部位。检测结果见表3。

表3 噻虫胺在花生各部位及土壤中平均残留量

噻虫胺在河南新乡地区花生叶片中平均残留量为0.730 mg/kg，花生仁中为0.017 mg/kg，花生壳中为0.260 mg/kg，土壤中为0.031 mg/kg；山东日照地区噻虫胺在花生叶片中平均残留量为0.300 mg/kg，花生仁中为0.007 mg/kg，花生壳中为0.12 mg/kg，土壤中为0.010 mg/kg。中华人民共和国国家标准《食品安全国家标准食品中农药最大残留限量》（GB 2763—2016）中规定，噻虫胺每日最大允许摄入量为0.1 mg/kg。而国内外对花生中噻虫胺最大残留限量标准尚未做明确规定。

3 结论与讨论

采用超高效液相-串联质谱仪检测花生及土壤中噻虫胺残留，结果表明，噻虫胺在花生及土壤中添加回收率为93.2%～110.6%，变异系数为1.21%～8.13%，定量限为0.005 mg/kg，符合农药残留检测要求。本文前处理方法简单可行，选用试剂经济易得，检测方法精确度及灵敏度高，能保证检测结果的精确度和可靠性，可为噻虫胺在花生中的残留检测提供参考依据。