PRR11和SKA2在宫颈癌组织中的表达及其与预后的关系

赵 郑 逄子瑶 徐丽萍 陈勇华 杨 瑛

作者单位：264000 烟台 青岛大学附属烟台毓璜顶医院妇科

宫颈癌是妇科常见的恶性肿瘤，在我国发病率高，且呈年轻化发展趋势［1］。宫颈癌患者尤其是中晚期宫颈癌患者的局部复发及远处转移率较高，预后较差，5年生存率为50%～60%［2］。研究证实，肿瘤的发生发展及预后与原癌基因及抑癌基因密切相关［3］。因此，筛选与宫颈癌发生发展相关的基因，对其早期诊断和预后判断，以及精准治疗具有重要意义。肿瘤相关基因 PRR11（priline-rich 11）和 SKA2（spindle and kinetochore associated complex subunit 2）均定位于染色体17q22区，两者共享一个独特的双向启动子，组成独特的转录单元，是一个典型的“基因对”。目前研究发现PRR11-SKA2“基因对”参与肺癌和乳腺癌的发生发展［4-5］，但两者在宫颈癌中的作用尚未知。本研究检测PRR11和SKA2蛋白在宫颈癌组织中的表达，并分析其与患者临床病理特征及预后的关系，为宫颈癌的预后评估及靶向治疗提供新的思路。

1 资料与方法

1.1 研究对象

收集2012年1月—2015年12月于青岛大学附属烟台毓璜顶医院行宫颈癌根治术切除的289例宫颈癌患者的临床资料，获取所有患者癌组织及其相应癌旁正常组织（距癌灶边缘2 cm处）标本。纳入标准：⑴经组织病理学检查诊断为宫颈癌；⑵术前均未接受放化疗；⑶临床病理资料完整。排除合并其他恶性肿瘤、自身免疫系统疾、感染性疾病等。289例患者平均年龄（44.7±7.1）岁（范围：26～68岁）；临床 FIGO 分期：Ⅰ期140例，Ⅱ期93例，Ⅲ期54例，Ⅳ期2例；低分化52例，中分化196例，高分化41例；淋巴结转移130例。本研究经我院伦理委员会批准（批号：201702368），患者及家属均知情同意并签署知情同意书。

1.2 免疫组化检测PRR11和SKA2蛋白的表达

兔抗人PRR11多克隆抗体（稀释比例1∶200）、兔抗人SKA2单克隆抗体（稀释比例1∶200）购自上海长岛生物技术有限公司，辣根过氧化物标记的羊抗兔IgG购自上海沪峰化工有限公司，链霉抗生物素蛋白-过氧化物酶（SP）试剂盒购自美国Abcam公司，二氨基联苯胺（DAB）显色试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司。组织样本固定、包埋、切片，脱蜡，进行SP法免疫组化染色。镜检观察并记录实验结果。由2位病理科医师采用双盲法判定结果，若意见不一致则由本科室另一主任医师最终判定。每张切片在400倍显微镜下随机选取5个视野，每个视野随机取200个细胞进行计数。结果判定：PRR11蛋白主要定位于细胞质，SKA2蛋白定位于细胞核，均以呈现黄色或棕黄色颗粒为阳性表达，最终染色结果以阳性细胞数所占的比例及染色强度综合判定。染色强度计分依据：无着色计0分，淡黄色计1分，棕黄色计2分，棕褐色计3分。阳性细胞数所占的比例计分依据：无阳性细胞计0分，＜25%计1分，25%～50%计2分，51%～75%计3分，＞75%计4分。以上两项计分相乘后，9～12分为强阳性（+++），5～8分为阳性（++），1～4分判弱阳性（+），0分则为阴性（-）。

1.3 随访

采取门诊、电话、电子邮件及信件等方式进行随访，每月随访1次，随访截至2018年12月26日。随访时间为6～36个月，中位随访时间为22个月，平均随访时间为24.4个月，无失访病例。统计患者生存情况。总生存（overall survival，OS）定义为接受手术治疗日开始至患者死亡或随访截止的时间。

1.4 统计学方法

采用SPSS 16.0和GraphPad Prism 5.0软件进行数据分析。计数资料以n（%）表示，组间比较采用χ2检验；PRR11和SKA2表达的相关性分析采用Spearman检验；采用Kaplan-Meier法计算生存率，组间生存率比较采用Log-rank检验；采用Cox等比例风险回归模型分析影响预后因素，计算风险比（HR）及其对应的95%可信区间（CI）。以双侧P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 PRR11和SKA2在宫颈癌组织和癌旁正常组织中的表达

免疫组化检测结果显示，PRR11蛋白阳性信号主要定位于细胞质，SKA2蛋白定位于细胞核。见图1。在宫颈癌组织和癌旁正常组织中，PRR11阳性表达率分别为 60.21%（174/289）和 16.96%（49/289），SKA2阳性表达率分别为 69.55%（201/289）和37.37%（108/289）。PRR11和SKA2在宫颈癌组织中阳性表达率均高于癌旁正常组织（χ2=114.081，P＜0.001；χ2=60.143，P＜0.001）。Spearman 相关分析显示，宫颈癌组织中PRR11和SKA2蛋白表达呈正相关（r=0.725，P＜0.001）。

2.2 PRR11和SKA2蛋白表达与宫颈癌患者临床病理特征的关系

289例宫颈癌组织中，PRR11和SKA2蛋白的表达与患者的FIGO分期、组织分化程度及淋巴结转移有关（P＜0.05），但未发现与年龄、肿瘤直径、肌层浸润和脉管浸润有关（P＞0.05）。见表1。

图1 PRR11和SKA2在宫颈癌组织和癌旁正常组织中的表达（SP×400）Fig.1 Expression of PRR11 and SKA2 in cervical cancer tissues and adjacent normal tissues（SP×400）

表1 PRR11和SKA2蛋白的表达与宫颈癌患者临床病理特征的关系（n）Tab.1 Relationship between the expression of PRR11 and SKA2 proteins and the clinicopathological characteristics of patients with cervical cancer（n）

2.3 PRR11和SKA2蛋白表达与宫颈癌患者OS的关系

本组患者3年总生存率为84.78%。PRR11阳性和阴性表达患者的3年总生存率分别为78.16%和94.78%，两者比较差异有统计学意义（χ2=8.293，P=0.002）；SKA2阳性和阴性表达患者的3年总生存率分别为82.09%和90.91%，两者比较差异有统计学意义（χ2=4.323，P=0.036）；PRR11、SKA2均为阴性表达的患者3年总生存率为95.35%，PRR11阴性、SKA2阳性表达患者3年总生存率为94.44%，PRR11阳性、SKA2阴性表达患者3年总生存率为86.67%，PRR11、SKA2均阳性表达的患者3年总生存率为75.19%，PRR11、SKA2均阳性表达的患者3年总生存率明显低于其他交互表达方式（均 P＜0.05）。见图 2。

单因素Cox回归模型分析显示，年龄、FIGO分期、组织分化程度、淋巴结转移、PRR11阳性表达和SKA2阳性表达与宫颈癌患者预后有关（P＜0.05）。多因素Cox回归模型分析显示，FIGO分期Ⅲ～Ⅳ期、PRR11阳性表达和SKA2阳性表达是影响宫颈癌患者预后的独立危险因素（HR=1.698，95%CI：1.369～2.876，P ＜0.001；HR=2.392，95%CI：1.294～3.596，P＜0.001；HR=1.597，95%CI：1.024～2.302，P＜0.001）。见表2。

3 讨论

图2 PRR11和SKA2蛋白表达与宫颈癌患者总生存率的关系Fig.2 Relationship between PRR11 and SKA2 protein expression and overall survival in patients with cervical cancer

SKA2位于PRR11上游，与PRR11共享一个典型的双向启动子，也是与细胞周期调控密切相关的基因，在肿瘤组织中异常表达，可能发挥癌基因作用［6-8］。研究发现PRR11参与细胞周期调控和增殖，与前列腺癌、胰腺癌、肺癌等肿瘤的发生发展密切相关［9-12］。在结直肠癌组织中PRR11高表达，且可促进癌细胞增殖和迁移［13］。SKA2在食管癌中亦表现出同样的作用［14］。本研究采用免疫组化检测宫颈癌组织及癌旁正常组织中PRR11和SKA2的表达情况，结果亦发现PRR11和SKA2在宫颈癌组织中高表达，与上述文献报道一致。提示两者可能参与宫颈癌发生发展，可能是宫颈癌诊断的有效指标和潜在的治疗靶点。

表2 宫颈癌患者总生存相关因素的单因素及多因素分析Tab.2 Univariable and multivariable analysis of factors related to overall survival in patients with cervical cancer

人类基因组超过10%的基因转录起始位点间隔小于1 000 bp碱基，共享一个双向启动子［15］。双向启动子可参与DNA损伤修复，维持基因组稳定性，与肿瘤发生发展关系密切。肺癌组织中PRR11和SKA2的表达水平明显高于正常组织，且在肺癌MCF-7细胞中不管单独沉默PRR11或SKA2基因还是联合沉默2个基因均能抑制肺癌细胞的增殖活性，联合沉默时抑制作用更明显［16］。WANG 等［4］亦报道“基因对”PRR11-SKA2可能参与糖皮质激素受体相关信号通路调节而影响肺癌的发生发展。此外，SKA2作为PRR11的上游基因，两者存在调控关系。在胰腺癌细胞中敲除SKA2基因表达能降低PRR11的活性，阻滞细胞于S期，延缓细胞周期进程，从而抑制肿瘤细胞生长［17］。在乳腺癌中发现SKA2启动子区可与HIF-1直接结合而调节PRR11表达，使肿瘤细胞适应缺氧环境，促进肿瘤血管新生及成熟，从而促进肿瘤发展侵袭及转移［5］。本研究进一步分析发现，PRR11和SKA2蛋白表达呈正相关，且与患者的FIGO分期、组织分化程度及淋巴结转移相关，提示PRR11和SKA2高表达可影响宫颈癌发展和转移，且可能具有协同作用。在食管癌组织中亦发现PRR11表达与患者分化程度及转移相关［18］；SKA2蛋白表达与乳腺癌患者TNM分期和淋巴结转移相关［19］，均与本研究结果一致。此外，CAI等［10］研究发现PRR11高表达是鼻咽癌患者预后的独立危险因素。BIAN等［20］报道SKA2高表达与胶质瘤患者较差的预后相关。本研究Kaplan-Meier生存分析发现，PRR11、SKA2阳性表达患者的3年总生存率均低于阴性表达者及两者的其他交互表达方式；多因素分析显示PRR11阳性表达和SKA2阳性表达是宫颈癌患者预后的独立危险因素，提示PRR11、SKA2高表达与不良预后有关，可能是潜在的预后判断指标。

本研究发现，PRR11和SKA2在宫颈癌组织中阳性表达率较高且两者表达呈正相关。PRR11和SKA2阳性表达与宫颈癌患者FIGO分期、组织分化程度及淋巴结转移有关，也是影响患者预后的独立危险因素，因此检测其表达水平可能有助于宫颈癌诊断和预后评估，但两者之间具体的作用机制仍需进一步深入研究。