人参中腐霉利农药残留量测定研究

宋莹莹，郭畅冰，岳乐乐，李 蕾，谢丽娟，王国明，徐芳菲*

（吉林人参研究院·吉林通化·134001）

腐霉利，英文通用名称为 procymidone，化学名为N-（3，5-二氯苯基）-1，2-二甲基环丙烷-1，2-二甲酰基亚胺，又称速克灵、杀霉利等[1]，它是一种广谱内吸性杀菌剂，具有保护和治疗作用，对低温、高温条件下发生的各种作物的灰霉病菌核病有显著防效，对葡萄孢属和核盘菌属所引起的病害具有特效[2]。

人参是五加科植物人参（Panax ginsengC.A.Mey.）的干燥根，味甘、微苦、微温，归脾、肺、心、肾经[3]，首载于《神农本草经》，具有大补元气，补脾益肺，生津，安神益智的功效。人参是我国驰名中外的名贵药材，被誉为“百草之王”，已有数千年的药用和保健历史，也是我国主要出口药材[4]。由于人参在种植过程中，生长周期长，一般5～6年或更长时间收获，易受病虫害的侵袭。所以，腐霉利在人参防治病虫害方面应用较多，主要用于栽前和其它药剂合用进行土壤消毒和疫霉病、灰霉病的防治，从而导致了其残留问题严重[5]。对于腐霉利残留量的测定，国外有高效液相色谱法、气相色谱法和气相色谱一质谱法。但是，国内目前尚未有相应的国家标准和行业标准，此方面的文献也很鲜见[6]。由于气相色谱-质谱联用法具有高分辨度、高灵敏度、分析速度快、鉴别能力强等特点，可同时完成待测组分的分离、鉴定和定量。因此，本文建立了一种气相色谱—质谱联用法（GC—MS）测定人参中腐霉利的方法，该方法对我国人参产品的市场监管以及农产品安全具有重要意义[7]。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

美国AgiLent 7820A-5977E型GC-MS联用仪（配EI源）；DE-100g型中药粉碎机 （浙江红景天）；SQP型电子天平（赛多利斯）；MX-S型可调式混匀仪（北京大龙）；THZ-92A型气浴恒温振荡器 （上海博迅）；3H16RI型智能高速冷冻离心机；XT-NS 1型全自动氮吹浓缩仪（上海新拓）。

正己烷（AR）；冰醋酸（AR）；乙腈（HPL）；无水硫酸镁（AR）；无水乙酸钠（AR）；N-丙基乙二胺(PSA)；十八烷基硅烷键合硅胶；硅胶（试剂级）；人参样品，市场购买。

腐霉利标准品，100μg/mL，购自农业部环境保护科研监测所。

1.2 实验方法

1.2.1 仪器条件

气相色谱条件：HP-5MS色谱柱 （30m×0.25mm×0.25μm）（美国 AgiLent）；进样口温度：250℃；升温程序：初始柱温为100℃，保持1 min，以10℃ /min的速率升温至280℃，保持11 min；进样方式：不分流进样，1min后开阀；载气：氦气，纯度大于99.995%，载气流速1.0mL/min；进样量：1μL 。

质谱条件：离子源：230℃；接口温度：150℃；扫描方式：选择离子监测方式（SIM）；监测离子（m/z）：255，283，285；定量离子：283；溶剂延迟：8min。

1.2.2 标准溶液的配制

标准储备液：将腐霉利标准品（100μg/mL）置于50mL容量瓶中，加入正己烷定容至刻度，得到2μg/mL的标准储备液。

标准工作溶液：用玻璃移液管移取适量标准储备液，再用正己烷稀释成检测所需的系列标准工作溶液，即为 0.008、0.01、0.025、0.05、0.1、0.2μg/mL。

1.2.3 样品前处理

称取已粉碎的人参样品（过三号筛），约3g，精密称定，置50 mL聚苯乙烯具塞离心管中，加入1%冰醋酸溶液15mL，涡旋使药粉充分浸润，放置30分钟，精密加入乙腈15mL，涡旋使混匀，置振荡器上剧烈振荡(500次/min)5分钟，加入无水硫酸镁与无水乙酸钠的混合粉末(4∶1)7.5g，立即摇散，再置振荡器上剧烈振荡(500次/min)3分钟，于冰浴中冷却10分钟，离心(4000转/min)5分钟，取上清液9mL，置已预先装有净化材料的离心管 [无水硫酸镁900mg，N-丙基乙二胺(PSA)300mg，十八烷基硅烷键合硅胶300mg，硅胶300mg]中，涡旋使充分混匀，再置振荡器上剧烈振荡(500次/min)5分钟使净化完全，离心(4000转/min)5分钟，精密吸取上清液5mL，置氮吹仪上于40℃水浴浓缩至约0.4mL，加乙腈定容至1mL，涡旋混匀，用微孔滤膜 (0.22μm)滤过，取续滤液，即得，供GC—MS检测。

2 结果

2.1 标准曲线的绘制

气相色谱-质谱选择离子监测 (SIM)模式具有灵敏度高、选择性好和抗干扰能力强的特点[8]，在本实验选定的色谱条件下，腐霉利标准品的选择离子(SIM)谱图和质谱图见图l、图2。

分别取 0.008、0.01、0.025、0.05、0.1、0.2μg/mL 腐霉利标准溶液进样分析，以腐霉利的含量（x）和组分色谱峰面积（y）作标准曲线，得到线性回归方程为：y=6.511e5x+7.569e2，相关系数r为0.99997。

图2 腐霉利标品的质谱图

2.2 检出限

本方法的检出限通过使用不同浓度的腐霉利（速克灵）标准溶液，注入安捷伦7820A/5977E气相色谱-质谱仪上，调用信噪比检测报告，选择标准物质特征峰附近较平稳的一段基线作为噪音水平，以3倍信噪比(S/N=3)作为腐霉利的检出限，得出腐霉利的方法检出限为0.005μg/mL。

2.3 方法的精密度实验

精密吸取浓度为0.05μg/mL的腐霉利标准溶液1μL，待基线稳定后，重复进样6次，记录各谱图中的峰面积，相对标准偏差为3.96%，结果见表1。表明方法具有较好的精密度。

表1 精密度测定数据

2.4 方法的准确度实验

2.4.1 样品中腐霉利的含量

精密称取人参样品平行3份，按1.2.3方法步骤处理后，分别进样，计算试样平均含量，结果见表2。

表2 样品中腐霉利的含量

2.4.2 方法的加标回收率

精密称取同一人参样品6份，每份1.5g，分别向其中加入浓度为0.02μg/mL的腐霉利标准溶液各1mL，后按1.2.3步骤操作，在1.2.1仪器条件下测定，计算腐霉利的平均回收率为87.64%，结果见表3。表明该方法具有良好的回收率。

表3 方法回收率数据

2.5 实际样品测定

利用所建立的方法，精密称取从市场采集的6份人参样品进行分析，按1.2.3步骤操作，分别进样，结果见表4，其中1份样品中检出腐霉利，图谱见图3。

表4 样品中腐霉利含量

图3 人参样品的提取离子色谱图

3 结论

《中国药典》2015版四部通则2341农药多残留量测定法—第四法中的气相色谱-串联质谱法，是包含腐霉利在内的76种农药残留量的测定方法，该方法使用的GC—MS是气相色谱串联三重四级杆并配有EI源的质谱。而本实验是针对人参中腐霉利残留量的测定研究，因此，本实验检测人参中腐霉利残留量的操作方法是参照了《中国药典》2015版四部通则2341农药多残留量测定法—第四法，而采用的GC—MS是气相色谱串联单重四级杆并配有EI源的质谱，且色谱条件与质谱条件有所改变。经过实际样品实验的验证，用本实验的方法与仪器测定人参中的腐霉利残留，其回收率均在70%～125%之间，相对标准偏差小于15%，方法灵敏度和准确度均能达到残留检测的要求，且腐霉利的出峰时间也提前了。因此，该方法可适用于人参中腐霉利残留量的检测，不仅节省了时间也降低了对仪器配置的要求。