广西梧州市猪伪狂犬病净化模式的示范推广及初步监测

戴光文，谢丽华*，陈莉，韦邦伟，陈雪英，周丕连，莫奇初，吴颖航，梁真，江精华，马琳，熊毅，李剑静，何杰明，黄超，肖萍，余丽梅，李媚，刘金表，黄瑞杰，何增文

（1.梧州市动物疫病预防控制中心广西梧州 543002；2.梧州市渔业资源养护中心广西梧州 543002；3.藤县动物疫病预防控制中心广西梧州 543300；4.广西壮族自治区动物疫病预防控制中心南宁 450107；5.岑溪市动物疫病预防控制中心广西梧州 543200）

猪伪狂犬病（pseudo rabies，PR）是由疱疹病毒科猪疱疹病毒Ⅰ型伪狂犬病毒引起的以发热、奇痒、脑脊髓炎为主要特征的急性传染病。经典的猪伪狂犬病临床症状因不同日龄而异，主要以怀孕母猪流产、产死胎、弱仔、木乃伊胎和15 日龄内新生仔猪大量异常死亡为临床特征，青年母猪和空怀母猪返情、屡配不孕，公猪睾丸肿胀、性功能下降，其他成年猪一般呈隐性感染。2011 年以来，我国发生新型猪伪狂犬病，新分离的伪狂犬病毒毒株出现基因变异，与Bartha 株比较，其毒力相关基因RR 基因第31～36 位出现6个连续碱基缺失，免疫原gB 基因第224—232 位发生9 个碱基GCCCCGGCC 缺失，造成母猪、哺乳仔猪、保育猪、小中大猪全部表现为显性感染，其中中大猪、母猪都会表现为典型的伪狂犬症状而死亡[1]。猪伪狂犬病是当前猪场的主要疫病，给养猪业造成严重的经济损失。不同风险区域和不同养殖模式的养猪场户猪伪狂犬病感染和发生情况不同，建立一套适应不同类型猪伪狂犬病控制与净化模式并示范推广具有重要意义。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 样品来源使用监督抽样方式采集梧州市养猪场户的猪群样品，包括2018-2020 年重点种猪场猪血清740 份、精液20份、组织60 份及2019 年1 月—2020 年6 月普通种猪场、商品代规模猪场和散养户猪血清916 份。精液5mL/ 份、组织约50g/ 份（脑、淋巴结、扁桃体、脾脏等），新鲜无腐败；血清约2mL/ 份，清亮无溶血。

1.1.2 免疫疫苗猪群免疫使用的猪伪狂犬病gE 基因缺失活疫苗主要厂家有西班牙海博莱、四川华派、青岛易邦、中牧股份等，疫苗毒株主要为Bartha-K61 株、HB-98 株。

1.1.3 主要试剂猪伪狂犬病病毒PCR 试剂盒（北京世纪元亨、广州维伯鑫等）、猪伪狂犬病病毒gB 抗体ELISA 检测试剂盒（北京金诺百泰、武汉科前等）、猪伪狂犬病gE 抗体ELISA 检测试剂盒（西班牙Hip ra、美国IDEXX等）。

1.1.4 仪器设备酶标仪（TECAN）、梯度PCR 仪、微量可调移液器等。

1.2 方法

1.2.1 场点选择获中国动物疫病预防控制中心2015—2017年“猪伪狂犬病净化示范场”的重点种猪场（A 场）1 个；获广西动物卫生监督所“健康种猪场”且2015—2017 年连续监测为猪伪狂犬病阴性的重点种猪场（B 场）1 个；处于猪伪狂犬病风险区域内具有一定防疫基础条件的普通种猪场4 个、商品代规模养猪场23 个、散养户3 个。

1.2.2 净化模式参照地方标准《种猪场主要疫病控制与净化》（DB45/T186—2004）《广西壮族自治区种猪场主要疫病控制与净化操作规程》《广西壮族自治区健康种猪场量化考核验收标准》和《重大动物疫病免疫操作技术规程》（DB45/T1004—2014）《广西重点种猪场疫病控制与净化工作年度考核评分表》《育种评分表》（2015）及2018 年《“广西动物疫病净化创建场”“广西动物疫病净化场”评审办法（试行）》《广西壮族自治区规模化养殖场主要动物疫病净化技术规程（种猪场）》，集成应用免疫防控、监测、诊断、阳性动物筛查和淘汰、生物安全防控等综合技术措施，开展猪伪狂犬病病毒核酸、gB抗体和野毒gE 抗体监测。结合梧州市本地不同风险区域实际，建立适用于不同类型养猪场户的猪伪狂犬病控制与净化方案。

1.2.3 示范推广2017 年前已率先在2 个重点种猪场实施猪伪狂犬病控制与净化工作并取得一定成果，2018—2020 年进行持续监督监测以评估净化维持状态。2017—2020 年将净化经验示范推广至普通种猪场、商品代规模猪场和散养户，各场户结合实际调整方案和具体实施，2019—2020 年以抽样方式进行监督监测以初步评估防控效果。

1.2.4 样品检测及标准依据由具备兽医实验室考核合格资质的广西壮族自治区动物疫病预防控制中心、梧州市动物疫病预防控制中心进行样品检测，猪伪狂犬病病毒核酸采用聚合酶链式反应方法，猪伪狂犬病gB抗体和g E抗体采用ELISA 方法，按照试剂说明书进行。标准涉及GB/T18641 伪狂犬病诊断技术、NY/T678—2003 猪伪狂犬病酶试验方法，按现行有效更新检测依据。

2 结果

2.1 重点种猪场猪伪狂犬病监测情况

共检测猪伪狂犬病PR-gB抗体血清740 份，总体免疫合格率为94.19%，除重点种猪场B 场2019 年合格率为83.46%外，A、B场其他年份的合格率均为100%。检测PR-gE 抗体血清700 份，均为阴性；检测PR 病毒核酸80 份，均为阴性，详见表1。

表1 重点种猪场2018—2020年监督检测情况（单位：份、% ）

2.2 普通种猪场、规模猪场、散养户猪伪狂犬病监测情况

共检测猪伪狂犬病PR-gB 抗体血清715 份，总体免疫合格率为91.61%，普通种猪场、规模猪场、散养户合格率分别为98.62%、88.63%、100%。检测PR-gE 抗体血清206 份，均为阴性（详见附表2）。

表2 普通种猪场、规模猪场、散养户2019—2020年抽样检测情况（单位：个、份、% ）

3 讨论

猪伪狂犬病作为广西养猪业的重要猪病，研究人员对该病在广西的流行状况做了大量调查。付薇等[2]对2008 年25 个已使用猪伪狂犬病病毒基因缺失苗猪场的1,455 份送检血清进行gE 抗体检测，阳性率仅为0.76%；但2012—2014 年，钟舒红等[3]报道广西部分地区181 个猪场中15.47%的猪场为野毒阳性场，在7,739 份猪血清样本中有7.55%的阳性样本，其中梧州市检测24 个场、576份血清，场阳性率为16.67%、样品阳性率为5.03%；何奇松等[4]对2013 年广西18 个不同规模种猪场送检的2,793 份血清样品进行伪狂犬病gE 抗体检测，阳性率为4.94%；谭春萍等[5]对2014—2015 年广西900 头母猪gE 抗体检测，阳性率平均为17.78%，其中毗邻梧州市的三个地区母猪血清抗体阳性率在15.56%～18.89%；戴光文等[6]对2015—2016 年梧州市7 个商品代饲养场70 份病死猪组织样品PRV 核酸检测，场阳性率和样品阳性率均为14.3%；赵硕等[7]对2013—2018 年广西疑似PR 发病猪靶组织714份样品进行猪伪狂犬病病毒PCR 检测，阳性率为24.5%，流行株以变异毒株为主。调查结果显示，自国内于2011 年出现新型猪伪狂犬病病毒毒株后，广西部分猪场猪伪狂犬病流行比较严重，梧州市部分猪场也受到猪伪狂犬病侵扰和威胁。因此，对该病实施控制与净化并示范推广是非常有必要的。

广西种猪场疫病净化工作于2003 年明确方向，猪伪狂犬病作为6 大种类疫病之一被列入净化病种[8]，梧州市猪伪狂犬病净化工作从重点种猪场建场时就开始实施。监测猪群PR-gB 抗体、PR-gE 抗体、病毒核酸是净化评估的重要手段，其中PR-gB 抗体水平与免疫效果密切相关，PR-gE 抗体可评估群体野毒感染状况，PR 病毒核酸检测可对猪伪狂犬病确诊。本研究由点到面，以重点种猪场为基本单元的猪伪狂犬病净化成果示范推广到以不同类型养猪场户的区域净化，结合各猪场实际情况，采用猪伪狂犬病基因缺失疫苗免疫，抑制伪狂犬病野毒的复制，减少病毒传播和潜伏感染机会。通过2018—2020 年持续监测，重点种猪场及示范的普通种猪场、商品代规模猪场、散养户gB 抗体合格率分别达到94.19%、98.62%、88.63%、100%，所有场户抽检的样品gE 抗体、病毒核酸均为阴性，结果表明梧州市猪伪狂犬病的控制与净化取得了一定初步成果，以广西与时俱进的净化方案为基础并结合梧州市本地实际情况集成应用的净化措施是有效的。鉴于当前猪伪狂犬病病毒不断变异，对猪场威胁始终存在的实际情况，将持续实施净化措施，进一步加大官方采样量和监管监测力度，按照无规定动物疫病创建场的要求进行严格评估，确保净化工作取得实效。