未动员的外周血造血干细胞采集效果及影响因素*

陆紫敏，李雪晨，方 琦，王加勇

同济大学附属同济医院输血科，上海 200065

造血干细胞移植或细胞治疗已成为治疗多种血液病及非血液系统疾病的重要方法。近年来，用血细胞分离机采集外周血造血干细胞(PBSC)已逐渐成为造血干细胞移植或治疗的主要方法，能否采集到足够数量具有活性的PBSC是干细胞移植或治疗成功的关键。目前对PBSC采集前多采用重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)进行动员[1-2]，但对PBSC采集前未采用rhG-CSF动员(简称“未动员”)的相关研究国内外报道甚少。本研究对112例未动员的健康供者采集其PBSC进行研究，比较分析男女两组供者采集前血常规指标及采集物指标，并将采集效果与部分影响因素进行相关分析，为进一步提高未动员供员PBSC的采集效果提供相关理论依据。

1 资料与方法

1.1一般资料 选择本院的健康PBSC供者共112例为研究对象，其中男59例，女53例。所有入组供者采集前均未应用rhG-CSF进行动员，所有供者均为自愿捐献，通过体格检查筛除感染性疾病、慢性系统性疾病及其他不适于捐献情况的人员，合格供者均签署知情同意书。所有入组供者采集前均检测白细胞(WBC)计数、体质量指数(BMI)、血细胞比容(Hct)、血小板(PLT)计数、血红蛋白(Hb)、单个核细胞(MNC)计数等血常规指标。

1.2方法

1.2.1采集方法 所有研究对象采集的目标细胞为MNC，多用于嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)疗法，每份PBSC所采集的MNC计数目标阈值为>1×109/L，每袋终产品量为40～60 mL。均使用MCS+血细胞分离机(美国血液技术公司)及PBSC专用一次性管道(美国血液技术公司)进行采集。以血液保存液(ACD，上海输血技术有限公司)为抗凝剂。输入采集者性别、身高、体质量、外周血Hct，按PBSC程序单采，每次循环总血量2 000～6 000 mL，全血与抗凝剂比例为12∶1，采集速度为20～50 mL/min，采集时间90～180 min。所有入组的采集者术前均口服10%葡萄糖酸钙50 mL，以防枸橼酸钠中毒。

1.2.2检测方法 取混匀后的少许PBSC采集物悬液采用XS-800i全自动血细胞分析仪(日本Sysmex公司)进行WBC计数，瑞氏染色显微镜下行MNC分类，采用FC-500流式细胞仪(美国Beckman coulter公司)进行CD34+计数。MNC、WBC、CD34+计数的检测均由专人负责。

1.2.3采集物分析 分析年龄、BMI、采集前血常规指标、采集循环血容量、处理血量及循环次数等因素对男女两组供者所采集获得的MNC计数、CD34+计数的影响；比较分析入组的男女两组供者采集前血常规指标及采集过程、采集物等指标。MNC百分比、WBC计数以及采集血量的乘积即为MNC计数。CD34+百分比、WBC计数以及采集血量的乘积即为CD34+计数。

2 结 果

2.1采集效果 采集的112份PBSC的MNC百分比为42.11%±18.47%，CD34+百分比为0.945%±0.760%，WBC计数为(89.94±28.27)×109/L，MNC计数为(1.57±0.82)×109/L，CD34+计数为(3.40±2.76)×107/L。

2.2不同性别采集前指标、采集物参数比较 男性组年龄，BMI，采集前WBC计数、Hct、Hb，总循环血量高于女性组(P<0.05)，而采集处理血量、采集物中MNC计数低于女性组，差异均有统计学意义(P<0.05)。两组采集前PLT计数、MNC百分比、MNC计数以及采集产品量、采集循环数、采集物中CD34+计数和WBC计数差异无统计学意义(P>0.05)，见表1、2。

表1 两组采集前血常规及相关参数比较

表2 两组PBSC采集过程中、采集物中相关指标比较

2.3影响采集效果的多元回归分析 分别对男女两组供者的年龄、BMI、采集前血常规指标以及采集循环数、循环血量等因素与采集物MNC、CD34+计数的影响因素进行分析。结果显示，在男性组中，采集物中MNC计数的影响因素为采集循环数(P=0.018)，采集物中CD34+计数的影响因素为采集前PLT计数(P=0.048)，见表3、4。女性组年龄、采集前PLT计数、WBC计数、MNC百分比、MNC计数是采集物中MNC计数的影响因素(P<0.05)，采集前Hct、PLT计数及采集处理血量是采集物中CD34+计数的影响因素(P<0.05)，见表5、6。

表3 影响男性采集物中MNC计数的多元线性回归分析

表4 影响男性采集物中CD34+计数的多元线性回归分析

表5 影响女性采集物中MNC计数的多元线性回归分析

续表5 影响女性采集物中MNC计数的多元线性回归分析

表6 影响女性采集物中CD34+计数的多元线性回归分析

3 讨 论

PBSC采集被广泛应用于临床治疗主要是由于采集者无须麻醉，失血和创伤性小，然而影响PBSC采集数量和质量的因素较多，目前对于采用rhG-CSF动员的PBSC采集效果和影响因素研究较多[3]。从理论上讲，采用rhG-CSF进行动员的PBSC采集效果比未动员的PBSC采集效果要好，但动员的费用较高且存在采集者用药期间出现不同程度全身不适症状如发热、肌肉和骨骼酸痛等问题[4]，因此容易遭到采集者拒绝。

本研究纳入的112例健康供者采集前均未采用rhG-CSF进行动员，PBSC采集物中WBC计数、MNC计数、CD34+计数以及MNC、 CD34+百分比水平分别为(89.94±28.27)×109/L、(1.57±0.82)×109/L、(3.40±2.76)×107/L、42.11%±18.47%、0.945%±0.760%，显示未动员的供者其外周血中存在能够安全采集到所要求的MNC目标数量，同时也显示采集到一定数量的CD34+细胞。

如何对供者采集到质量更高、数量更多的MNC及CD34+细胞是PBSC应用于临床治疗成功的关键[5]。本研究对男女两组健康供者进行比较分析，结果显示，男性组年龄，BMI，采集前Hct、Hb、WBC计数，总循环血量均高于女性组，差异有统计学意义(P<0.05)，而男性组采集处理血量、采集物中MNC计数低于女性组，差异有统计学意义(P<0.05)。两组采集前PLT计数、MNC百分比以及采集产品量、采集循环数、采集物中CD34+计数、MNC计数和WBC计数比较，差异无统计学意义(P>0.05)。提示入组的男女性供者年龄、体质量、身高存在一定差异，采集前Hct、Hb、WBC计数等指标也存在差异，均表现为男性高于女性，这可能与男性体表面积大，与之相应的外周血Hct、Hb、WBC计数也较高。本研究还发现，即使男女两组的采集产品量、采集循环数差异无统计学意义(P>0.05)，男性组采集的总循环血量却高于女性组，而采集处理血量、采集物中MNC计数却低于女性组，提示供者因年龄、性别、采集处理血量等不同可致采集效果不一致，这与张淑遐等[6]报道结果不符，其原因可能是与采集前是否采用rhG-CSF动员有关。本研究结果显示，男女两组采集物中CD34+计数差异无统计学意义(P>0.05)，与张曦等[7]报道结果一致。有关年龄、性别不同是否可导致采集物中的MNC计数、循环血量、采集处理血量等变化不一致，还有待进一步大样本研究。

有学者认为，采集物中MNC及CD34+计数是判断PBSC采集效果的重要指标[8]，而采集效果受多种因素影响，有关采集前外周血常规指标、采集处理血量对未动员供者PBSC采集效果影响的研究国内外报道甚少。本研究分别对男女两组采集物中MNC、CD34+计数的影响因素进行分析。结果显示，女性组年龄、采集前PLT计数、WBC计数、MNC百分比、MNC计数是采集物中MNC计数的影响因素(P<0.05)，即年龄、PLT计数、WBC计数、MNC百分比越高，所获得的MNC计数越高，与国内报道结果相似[9]。由此可推测女性的年龄高低，PLT计数、WBC计数、MNC百分比水平能反映骨髓造血情况，这为提前预测PBSC的采集效果，进行采集量的控制提供了一定的参考。本研究还发现，男女两组采集前PLT计数为采集物中CD34+计数的影响因素(P<0.05，β<0)，即采集前PLT计数越高，所获的CD34+计数越低。这结果与张淑遐等[6]报道结果不一致，可能原因如下：(1)与采集前是否采用rhG-CSF动员有关；(2)PLT比重接近干细胞，更容易被采集到干细胞成品中而影响采集效果；(3)PLT计数增加使黏滞性和聚集性增加，直接影响探测器对细胞的识别[10]。本研究还发现，女性组采集前Hct及采集处理血量是采集物中CD34+计数的影响因素(P=0.008、0.049，β=1.187、0.004)，即Hct升高、采集处理血量越多，获得CD34+计数越高。有研究显示，采集物中CD34+计数还与采集产品量、总循环血量等有关[8]。本研究采集产品量、总循环血量均远低于PBSC移植所需要的产品量和循环血量[1]，因此所获采集物中MNC、CD34+计数也远低于移植成功所需要的细胞数[11]。

综上所述，应用血细胞分离机对未动员健康供者进行PBSC采集，不仅安全性、采集成功率较高，且能采集到满足临床CAR-T细胞疗法所需要的MNC阈值，以及一定数量的CD34+细胞。健康供者不同年龄、性别、总循环血量等可致采集效果不一致；采集前血常规中PLT计数有助于预测PBSC采集效果，其成本低、操作简单方便，具有一定的临床意义。