毛云芝菌菌丝体化学成分在运动保健中的作用*

吕慧鹏

（东北石油大学，黑龙江 大庆 163318）

毛云芝菌（Coriolus hirsutus） 又名毛栓菌、毛革盖菌，属非褶菌目 （Polyporales） 多孔菌科（Polyporaceae） 云芝属（Polystictus），多生长于阔叶树枯死枝或腐木伐桩上[1]。毛云芝是一种药用真菌，其菌丝体、菌核或子实体内产生蛋白质、氨基酸、多糖、生物碱、甾醇、萜类等药理活性物质，如中成药“云芝肝泰”等就是以毛云芝为主要原料，其主要功效是除风保肝、清热解毒，多用于辅助治疗急慢性肝炎，民间也有用于消炎抗菌、清热活血的[2-3]，可见毛云芝具有很高的药用保健价值。毛云芝作为药用真菌，在生长发育的代谢活动中能在菌丝体、菌核或子实体内产生蛋白质、氨基酸、多糖、生物碱、甾醇、萜类等多种具有药理活性的物质，通过研究毛云芝菌丝体的有效成分对人体的运动保健功效，进一步挖掘毛云芝的药用价值，探讨毛云芝菌丝体物质对运动保健的作用和影响。

1 试验仪器与试剂

主要试验仪器：TYXN-91智能血液凝集仪，上海通用电机电技术研究所；7230G型可见分光光度计，上海精密科学仪器有限公司；800型低速离心沉淀机，厦门兴万电子仪器有限公司；BS-224型电子天平，德国SARTORIUS公司；GF-4000型上皿电子天平，上海沪粤明科学仪器有限公司；HH-1型电热恒温水浴锅，北京科伟永兴仪器有限公司。

主要试剂：无水乙醇，甲醇，柠檬酸、磷酸、邻苯三酚、盐酸，均为分析纯，天津市红岩化学试剂厂；甲酰胺，天津纵横兴工贸公司化工试剂分公司；Evans Blue（埃文斯蓝），上海懋康生物科技有限公司。

2 试验分组及给药剂量

试验采用18 g～22 g体重的昆明种小鼠40只，雌雄各半，购自江苏艾菱菲生物科技有限公司。按体重随机分成4组，每组10只，即低剂量组、中剂量组、高剂量组和空白对照组（CK）。高剂量组每天每只给小鼠灌胃8 g·100-1g-1体重的样品溶液；中剂量组每天每只给小鼠灌胃4 g·100-1g-1体重的样品溶液；低剂量组每天每只给小鼠灌胃2 g·100-1g-1体重的样品溶液；空白对照组（CK）每天每只给小鼠灌胃等量的蒸馏水。

3 毛云芝菌菌丝体样品溶液制备

毛云芝菌菌丝体制备：毛云芝菌由西北农林科技大学和中国林业科学研究院森林生态环境与保护研究所提供，在马铃薯培养基上培养，发酵生产毛云芝菌菌丝体。收集菌丝体发酵液进行过滤、干燥、过40目筛后得菌丝体粉末，备用。

毛云芝菌菌丝体样品溶液制备[4]。量取毛云芝菌菌丝体粉末12 g，以70%乙醇为溶剂进行有效成分的提取，第1次8倍量提取2 h，第2次6倍量提取1 h，将2次提取所得提取液收集并合并，放入冰箱静置24 h后过滤，收集滤液浓缩至适宜的体积，即得毛云芝菌菌丝体样品溶液。

4 毛云芝菌丝体对小鼠毛细血管通透性的影响

4.1 小鼠毛细血管通透性试验

每天给5组小鼠灌胃样品溶液或等体积蒸馏水1次，连续1周。最后1次灌胃1 h后，将小鼠尾巴拉直绷紧，在尾尖1/3处注射Evans Blue Stain（0.5%） 溶液1 mL·100-1g-1，可见小鼠眼睛皮肤出现蓝色，30 min后剪断颈动脉放血，待小鼠全部血液流尽后解剖取出小鼠脏器，放在过滤纸上将残留的血液吸尽。用分析天平称重后放入20 mL甲酰胺溶液中，置于恒温水浴锅（55±2）℃水浴24 h，得到的试验用小鼠脏器甲酰胺溶液。

4.1.1 埃文斯蓝标准曲线的绘制

精密称取埃文斯蓝溶液1 mg，以甲酰胺为溶剂，溶解定容至50 mL，得到浓度为20 μg·mL-1的溶液作为母液。分别精密量取此母液0.5 mL、1.0 mL、1.5 mL、2.0 mL、2.5 mL、3.0 mL于10 mL容量瓶，用甲酰胺定容至刻度，于620 nm处测定吸光度，制作埃文斯蓝溶液标准曲线，如图1所示。

由图 1 可知，在 1.0 μg·mL-1～6.0 μg·mL-1浓度范围内，埃文斯蓝溶液的浓度与吸光度呈良好的线性关系，得线性回归方程y=0.115 9x+0.059 2，其相关系数R2=0.999 7（n=6）。

4.1.2 血管通透性的测定

将试验用小鼠脏器甲酰胺溶液放入离心机，在2 000 r·min-1离心15 min后取上清液，用分光光度计在波长610 nm处测吸光度。并根据图1的埃文斯蓝标准曲线计算溶液内埃文斯蓝浓度，最后以每100 mg小鼠脑组织中所含染色物质的微克数表示，用于测定小鼠的血管通透性。各组埃文斯蓝含量测定结果如表1所示。

从表1可以看出，高、中、低剂量的埃文斯蓝通透量均有所提高，与对照组相比，高剂量组P＜0.01、中剂量组P＜0.01、低剂量组P＞0.05。因此，与对照组相比，低剂量组不显著，而中剂量组与高剂量组具有统计学上的显著性，对小鼠毛细血管通透性增加均有显著性影响。

4.2 对小鼠血小板聚集功能的影响

4.2.1 试验分组及给药剂量

取小鼠40只，按体重随机分为4组，每组10只，即对照组、高剂量组、中剂量组和低剂量组。连续灌胃7 d。最后1次灌胃前将小鼠禁食12 h，最后1次灌胃后1 h进行血小板聚集试验[5]。给小鼠肌肉注射浓度为20%的乙酯1 mg·kg-1进行麻醉，麻醉后进行腹腔取血9 mL，立即加入3.28%的枸橼酸钠按抗凝剂1 mL混合均匀，上离心机1 000 r·min-1离心10 min后，取上层悬浊液进行测量。将血小板聚集仪预热，调节聚集仪恒温按钮,使恒温在37℃。取各组待测血样进行测定。

4.2.2 试验结果

试验结果如表2所示。

表2 各组聚集时间Tab.2 Aggregation time of each group

由表2可以看出，与对照组相比，各剂量组血小板的凝聚时间均有所延长：高、中、低三个剂量组将血小板聚集时间分别延长了19.50 s、24.18 s和26.60 s，平均延长了23.30 s。与对照组相比，低、中、高剂量组均P＜0.01，因此，与对照组相比，高中低剂量组对大鼠血小板聚集时间的影响均有统计学上的显著性差异。

5 体外抗氧化性能的测定

为了研究毛云芝菌菌丝体对运动损伤的作用，采用体外抗氧化性能试验，测定超氧阴离子的清除率，用于检测毛云芝菌菌丝体的抗氧化功效[6]。具体试验如下。

首先，用毛云芝菌菌丝体样品粉末配制4 mg·mL-1、8 mg·mL-1、12 mg·mL-1、16 mg·mL-1、20 mg·mL-1、24 mg·mL-1、28 mg·mL-1浓度的样品溶液，取1.0 mL各浓度的毛云芝菌菌丝体样品溶液加入0.01 mol磷酸缓冲溶液4.5 mL，调pH至 8，在25℃水浴锅中水浴30 min后，再加入45 mmol·L-1的邻苯三酚溶液0.1 mL，25℃水浴5 min，最后加10 mmol·L-1盐酸2滴终止反应，在420 nm处测定吸光度值。空白组不加邻苯三酚，对照组为邻苯三酚自氧化组，即不加样品测吸光度。清除率（E，%）计算公式为：

式中：A为样品吸光度；A0为空白吸光度；A1为对照吸光度。

超氧阴离子的清除试验结果如图2所示。

由图2可知，随着毛云芝菌菌丝体样品溶液浓度的增加，对超氧阴离子的清除效果越来越明显，当浓度达到28 mg·mL-1时达到最高清除率21.24%。说明毛云芝菌菌丝体样品溶液浓度在试验范围内与超氧阴离子自由基的清除效果成正比。

7 结论

对小鼠毛细血管通透性和血小板聚集功能的试验结果表明，毛云芝菌菌丝体的有效成分对小鼠毛细血管通透性有明显的提高，能够疏通血管、改善脏器血液的微循环，增加运动血液供给。而体外抗氧化性能试验也证明，毛云芝菌菌丝体的有效成分对超氧阴离子自由基有很好的清除效果，增强了机体的运动抗氧化能力，可以减轻运动疲劳，加快体能恢复，具有很好的运动保健作用。