SIRT1、Phospho－SIRT1在结肠癌组织中的表达及临床意义＊

龚 磊，吕真冰，喻 晶，任明扬，田云鸿，彭 洪

1.川北医学院第二临床学院（四川省南充市中心医院）胃肠外科（南充637000）；2.川北医学院第二临床学院（四川省南充市中心医院）中西医结合肛肠科（南充637000）

结肠癌作为一种常见的胃肠道恶性肿瘤，其发病率居全球常见恶性肿瘤的第三位，目前临床上治疗结肠癌的首选方法为手术切除并辅以化疗［1］。沉默信息调节因子1（Silent information regulator 1，SIRT1）是烟酰胺腺嘌呤二核异酸辅酶依赖的去乙酰基转移酶，是重要的抗衰老、抗代谢性疾病的蛋白［2］。SIRT1通过去乙酰化在肿瘤发展中起到的作用，磷酸化的SIRT1（Phospho－SIRT1）是其去乙酰化的重要调节方式［3］。本研究检测 SIRT1、Phospho－SIRT1在结肠癌组织中的表达结果，分析两者在结肠癌组织中的表达及临床意义。

资料与方法

1 一般资料 选取2015年6月至2016年6月该院行手术切除的结肠癌存档蜡块和癌旁正常组织（距病变部位＞5cm处，且证实为无癌浸润）蜡块各60例。其中，男性32例，女性28例；年龄37～78岁，平均（58.64±6.09）岁；I期3例，II期19例，Ⅲ期28例，Ⅳ期10例。纳入标准：①经细胞学及组织学病理确诊为结肠癌，可以明确肿瘤大小、部位、浸润程度；②无放化疗治疗史。排除标准：①术前经影像学检查无法确定TNM［4］分期；②已诊断为远处转移者；③伴随其它恶性肿瘤；④合并严重肝肾疾病；⑤患有血液系统疾病或传染病等。两组性别、年龄等一般资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。

2 免疫组化方法［5］选取3μm厚度的切片，经烤片水化后，修复抗原，封闭非特异性结合。试验中使用的一抗分别为：兔抗人 SIRT1、Phospho－SIRT1（pS47）、Ki67和鼠抗人P53单克隆抗体。均滴加DBA进行显色。阴性对照用PBS溶液代替，阳性对照是SIRTl和Phospho－SIRT1阳性标本。

3 随访情况 采用门诊和电话的方式随访3年，第1年，每3个月随访1次，第2～3年每6个月随访1次，末次随访时间为2019年6月。随访主要通过体格检查、血常规、胸片、结肠镜检查确定患者伤口肿瘤的复发、转移情况。

4 统计学方法 选用SPSS 18.0统计学软件，计量资料采用计数资料以率（%）表示，采用χ2检验；单因素分析有统计学意义的则纳入多因素分析，多因素分析采用采用Kaplan－Meier法绘制生存曲线，P＜0.05为差异有统计学意义。

结 果

1 SIRT1、Phospho－SIRT1在结肠癌组织中的表达 SIRT1在癌组织和正常组织中的阳性表达率分别为66.67%（40／60）和25.00%（11／60），Phospho－SIRT1在癌组织和正常组织中的阳性表达率分别为46.67% （28／60）和 15.00% （8／60）。SIRT1、Phospho－SIRT1在结肠癌组织中的阳性表达率均高于癌旁正常组织（P＜0.05），见表1。

表1 SIRT1、Phospho－SIRT1在结肠癌组织中的表达［例（%）］

2 60例患者SIRT1、Phospho－SIRT1表达与结肠癌临床病理参数间的关系 TNM分期I～II期的患者SIRT1、Phospho－SIRT1阳性表达率低于Ⅲ～Ⅳ期患者，差异均有统计学意义（P＜0.05）。P53阳性患者SIRT1阳性表达率小于阴性表达率，差异有统计学意义（P＜0.05）。Ki67阳性患者Phospho－SIRT1阳性表达率大于阴性表达率，差异有统计学意义（P＜0.05）。但不同年龄、性别、淋巴结转移的患者SIRT1、Phospho－SIRT1阳性表达率比较，差异无统计学意义（P＞0.05），见表2。

3 影响结肠癌患预后生存的单因素分析 本研究选取60例结肠癌患者，总生存率为66.67%（40／60），SIRT1阳性组和Phospho－SIRT1阳性组3年生存率分别为55.00%（22／40）、53.57%（15／28）。单因素分析显示，TNM分期I～II期的患者3年生存率为86.36%高于Ⅲ～Ⅳ期患者55.26%，淋巴结有转移的患者3年生存率44.44%低于淋巴结无转移患者76.18%，差异均有统计学意义（P＜0.05）；SIRT1阳性患者3年生存率为55.00%低于阴性患者90.00%，Phospho－SIRT1阳性患者3年生存率为53.57%低于阴性患者78.13%，差异均有统计学意义（P＜0.05），不同年龄、性别的结肠癌患者生存率比较无统计学差 异（P＞0.05）。见表3。

表2 60例患者SIRT1、Phospho－SIRT1表达与结肠癌临床病理参数间的关系

表3 影响结肠癌患者预后生存的单因素分析

4 影响结肠癌患者预后生存的多因素分析 以结肠癌患者术后3年生存率为应变量，有统计学意义的单因素为自变量进行赋值（TNM分期I～II期＝1、Ⅲ～Ⅳ期＝0；淋巴结转移：无＝1、有＝0；SIRT1：阴性＝1、阳性＝0；Phospho－SIRT1表达：阴性＝1、阳性＝0），Logistic回归分析提示，TNMⅢ～Ⅳ分期、淋巴结有转移、SIRT1和Phospho－SIRT1阳性表达是影响结肠癌患者预后的独立危险因素（P＜0.05），见表4。

5 结肠癌患者在不同危险因素影响下的生存曲线 结肠癌患者在不同TNM分期、淋巴结转移和不同表达的SIRT1、Phospho－SIRT1情况下，术后3年的生存率曲线如图1～4。

表4 影响结肠癌患者预后生存的多因素分析

图1 不同TNM分期的结肠癌患者生存曲线

图2 淋巴结转移的结肠癌患者生存曲线

讨 论

结肠癌是一种常见的恶性肿瘤，其发病率和病死率居高不下，由于饮食习惯的改变，我国确诊的结肠癌患者逐年递增［7］。结肠癌的发病机制和环境、遗传等都有相关性，多个抑癌基因的失活推测可能与高脂肪高热量而少膳食纤维的饮食有关［8］。针对直肠癌的新型抗癌药物不断出现，但对患者的生存预后改变不大，所以，积极开发可以对直肠癌进行早起诊断的靶点是尤为重要的［9］。

SIRT1是烟酰胺腺嘌呤二核异酸辅酶依赖的去乙酰基转移酶，是重要的抗衰老、抗代谢性疾病的蛋白［10］。既往研究指出，乙酰／去乙酰化是人体内一种应用广泛的修饰手段，通过对不同底物的作用参与很多种生物学过程［11］。SIRT1通过去乙酰化在肿瘤发展中起到的作用，磷酸化的SIRT1（Phospho－SIRT1）是其去乙酰化的重要一环，对SIRT1的调节起一定作用［12］。李合等［13］指出，结肠癌癌患者SIRT1水平明显高于健康者。张新元等［14］指出，SIRT1在包括皮肤癌、结肠癌、卵巢癌在内的多种恶性肿瘤中的发生、发展中可能发挥着双重作用。于娜等［15］指出，SIRT1可以通过影响标记蛋白的转移促进癌细胞的迁移。本研究中，SIRT1、Phospho－SIRT1在结肠癌组织中的阳性表达率均高于癌旁正常组织，说明SIRT1和Phospho－SIRT1在肿瘤组织中均呈高表达。与黄立勇等［16］既往研究一致。

野生型P53是已知体内最重要的一种抑癌基因，主要是通过调剂转录过程影响细胞的生长，而突变型P53则是一种促癌基因，在多种恶性肿瘤的组织中可以观察到突变型P53的存在［17］。利用免疫组化法检测到的肿瘤组织的P53属于突变型的促癌基因［18］。Ki67是一种与细胞有丝分裂密切相关的核抗原，反映了肿瘤增殖的状态，现在已经被广泛应用于检测肿瘤增殖的判断［19］。贺亚敏等［20］指出，P53可能成为预测结肠癌高度转移的新分子标志物。石文静等［21］分析组织内Ki67的蛋白表达与结肠癌细胞增殖和凋亡相关。本研究分析SIRT1的表达水平与患者的TNM分期和P53表达相关，认为SIRT1在结肠癌中是一个不利的预后指标。Phospho－SIRT1的表达水平与患者的TNM分期和Ki67相关，Phospho－SIRT1与细胞的增殖有关。本研究结果与既往研究［22］相符。

本研究选取60例结肠癌患者，总生存率为66.67%，单因素和多因素分析显示，TNM分期、淋巴结转移、SIRT1、Phospho－SIRT1是影响结肠癌患者预后的独立危险因素，与董玲玲等［23］研究相似。

综上所述，SIRT1和Phospho－SIRT1在结肠癌组织呈高表达，其中SIRT1的表达水平与患者的TNM分期和P53表达相关，Phospho－SIRT1的表达水平与患者的TNM分期和Ki67相关。分析术后3年结肠癌患者生存率，提示TNM Ⅲ～Ⅳ分期、淋巴结有转移、SIRT1和Phospho－SIRT1阳性表达是影响结肠癌患者预后的独立危险因素。SIRT1和Phospho－SIRT1与肿瘤形成有相关性，可能直接影响了结肠癌患者的预后生存情况。本研究局限于小样本和随访时间，因此要提高结果的客观性还需更进一步的开展较大规模、多中心的研究，并延长术后随访时间；另外本研究选择的磷酸化抗体只针对SIRT1的某一个磷酸化位点，不能代表SIRT1的全部磷酸化状态，有待制做针对多个磷酸化位点的磷酸化抗体。