“乐胃饮”加味方对慢性萎缩性胃炎模型鼠胃黏膜病变及相关炎症因子的作用*

徐燕立 朱飞叶 徐 珊

1 浙江大学医学院附属第一医院 浙江 杭州 310003

2 浙江中医药大学 浙江 杭州 310053

慢性萎缩性胃炎（CAG）是以胃黏膜腺体萎缩为主要表现的临床常见消化系统疾病，常伴有胃黏膜的肠上皮化生和异型增生，属于胃癌的癌前疾病。持续存在的慢性炎症对胃癌的形成发挥着重要作用，炎症细胞因子白介素-1β（IL-1β）、白介素-6（IL-6）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）可能是其中的核心炎症介质，这些因子释放后在细胞表面形成一个炎症微环境，使机体正常细胞的抑癌基因或原癌基因由基态转变为激发态，进而导致细胞癌变[1]。我们前期的临床研究表明，以健脾疏肝中药为主的“乐胃饮”加味方治疗CAG取得了很好的效果，不仅能改善症状，还能逆转萎缩、肠化等病理变化[2]。本实验研究通过建立CAG大鼠模型，观察“乐胃饮”加味方在治疗CAG过程中对胃黏膜病变和炎症因子表达的影响，以期探讨出“乐胃饮”加味方对CAG的作用机制。

1 材料与方法

1.1 实验动物：SPF级Wistar大鼠，雄性，4周龄，体重180～200g，上海斯莱克实验动物有限责任公司提供，许可证号：SCXK（沪）2017-0005。

1.2 药物与试剂：“乐胃饮”加味方由薏苡仁、怀山药各30g，炒白术、炒白芍、郁金、香茶菜各15g组成，购于浙江中医药大学第二门诊部。按《中药药理研究方法学》人鼠等效剂量进行剂量换算，成人以体重60kg计算，大鼠体重以200g计算，“乐胃饮”加味方为120g/人·日，则人鼠等效剂量为12.6g/kg·日，按常规制成中药水煎剂，浓缩成生药含量为1.26g/ml的药液，4℃冰箱内保存。1-甲基-3-硝基-1-亚硝基胍（MNNG）购于日本TCI公司；水杨酸钠购于上海西陇生化科技有限公司；ELISA试剂盒（大鼠IL-1β、IL-6和TNF-α）购于北京四正柏生物科技有限公司。

1.3 动物模型制备：1-甲基-3-硝基-1-亚硝基胍（MNNG）用蒸馏水配成浓度为1g/L的存储液，避光冷藏保存，使用时配成浓度为100mg/L，作为大鼠自由饮水，每天更换。同时予2%的水杨酸钠溶液，每周一、周四对大鼠各进行1次灌胃，2ml/只，灌胃前后各予禁食禁水1h。按第5周起单日予禁食，双日予足量喂食的原则，模拟饥饱失常的状态，连续造模。

1.4 分组与给药：56只SPF级的雄性Wistar大鼠，随机分为正常组、模型组、中药预防组、中药分阶段干预A组、中药分阶段干预B组、中药分阶段干预C组、中药分阶段干预D组，每组8只。其中预防组大鼠从造模开始即给予“乐胃饮”加味方干预治疗，分阶段干预A、B、C、D组大鼠分别在造模第8、12、16、24周开始给予“乐胃饮”加味方干预治疗，正常组和模型组大鼠给予等量的生理盐水干预。各组大鼠每日予灌胃1次，干预至32周结束。

1.5 胃黏膜病理组织学检测：大鼠麻醉剖腹后沿胃大弯侧剖开，肉眼初步观察胃黏膜病变，立即用冰生理盐水冲洗后选取部分胃窦组织，用10%的中性甲醛溶液固定，按常规进行脱水，石蜡包埋，组织切片和HE染色，在光学显微镜下观察各组大鼠胃窦的一般组织学表现。

1.6 ELISA法检测血清中细胞因子IL1-β、IL-6、TNF-α的含量：大鼠麻醉后剖腹，予腹主动脉取血，5mL/只，静置离心取上清液，-80℃冰箱保存。在96孔板内分别加入标准品和标本100μl/孔，37℃孵育90min，洗板4次；加入生物素化抗体工作液100μl/孔，37℃孵箱孵育60min，洗板4次，加入酶结合工作液（100μl/孔），37℃孵育30min，洗板4次；加入显色剂100μl/孔，避光37℃孵育10～20min；加入终止液100μl/孔，混匀后测量OD450值。

2 结果

2.1 各组大鼠的胃黏膜病理组织学表现：如图1所示，正常组大鼠胃黏膜较为完整，腺体排列整齐；模型组大鼠部分胃黏膜层萎缩变薄，腺体变小，排列紊乱、疏松或者脱落，部分腺体腺腔扩张，黏膜肌层增厚，向黏膜固有层伸展，间质内淋巴细胞浸润，可见肠上皮化生。中药预防组、分阶段干预A组和分阶段干预B组大鼠胃黏膜病变程度较模型组明显减轻，分阶段干预C组和分阶段干预D组大鼠胃黏膜病变程度与模型组较为接近。

2.2 各组大鼠血清中IL-1β、IL-6、TNF-α的表达变化：见表1。

图1 第32周各组大鼠胃黏膜病理（×100）

表1 第32周各组大鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α的含量（±s，pg/ml）

表1 第32周各组大鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α的含量（±s，pg/ml）

注：与正常组比较，△P＜0.01；与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。

TNF-α 44.08±7.35 66.08± 7.13△44.75±6.26**47.25±11.65**51.75±14.11*54.75±3.17 56.08±10.25组别正常组模型组中药预防组分阶段干预A组分阶段干预B组分阶段干预C组分阶段干预D组例数8 8 8 8 8 8 8 IL-1β 254.67±60.12 531.33±66.78△244.33±65.90**259.67±78.52**266.33±65.46**294.67±30.47**307.67±37.78**IL-6 661.75±27.52 845.50±86.44△653.75±53.09**664.25±46.96**679.25±18.92**689.00±74.10**723.75±73.34**

3 讨论

中医药治疗CAG具有一定优势，不仅能显著改善症状，还对部分患者的肠上皮化生及异型增生有逆转作用[3]。CAG多因久病常虚实相兼，表现为以脾胃虚弱为本，湿热邪毒、气滞血瘀为标的病机特点。课题组根据长期的临床实践总结归纳出以健脾疏肝中药为主的“乐胃饮”加味方，全方由薏苡仁、怀山药、炒白术、炒白芍、郁金和香茶菜组成。其中薏苡仁为君药，健脾渗湿；怀山药、炒白术为臣药，益气健脾；炒白芍、郁金为佐药，疏肝行气、柔肝止痛；香茶菜为使药，散瘀清热解毒。诸药合用以发挥健脾疏肝的功效。

本实验研究中我们观察到模型组大鼠的胃黏膜层有萎缩变薄，腺体变小，排列紊乱、疏松或者脱落，还可以见到肠上皮化生的表现；而中药预防组、分阶段干预A组和B组大鼠的胃黏膜病变程度与模型组相比均有不同程度的减轻，且中药干预的时间越早，胃黏膜病理得到改善的效果越明显；干预时间较晚的分阶段干预C组和D组大鼠胃黏膜病变程度有缓解，但总体情况与模型组较为接近；说明“乐胃饮”加味方可有效治疗CAG，延缓CAG的进展，其疗效与干预时间早晚相关。

在炎症细胞因子表达方面，模型组大鼠血清中的IL-1β、IL-6和TNF-α表达含量均明显高于正常组大鼠的表达；经过中药干预治疗，预防组、分阶段干预各组大鼠血清中IL-1β和IL-6的表达含量对比模型组大鼠均可见显著降低；预防组、分阶段干预A组和B组大鼠血清中TNF-α的表达含量较模型组大鼠亦可见明显下降；而且中药干预的时间越早，上述细胞因子的表达水平越低；说明“乐胃饮”加味方干预后可有效降低CAG时期细胞因子IL-1β、IL-6和TNF-α的表达，从而发挥抗炎作用。

综上，“乐胃饮”加味方治疗CAG具有保护胃黏膜、改善炎症反应以达到延缓疾病进展的作用，其机制可能与下调炎症细胞因子IL-1β、IL-6和TNF-α的表达水平有关。