艾灸神阙穴调节高脂血症小鼠相关炎性因子的效应研究*

李 梅 陈 雷 王耀帅

1 宁波市中医院 浙江 宁波 315000

2 南京中医药大学 江苏 南京 210023

灸法是使用灸材在人体腧穴进行烘烤，借助灸火的温通力量达到防治疾病目的的一种外治疗法。温通作用是艾灸作用的机制之一，而“抗炎”是艾灸温通作用的基础。有一部分学者认为，炎症反应过程特别是慢性炎症反应过程的分子机制贯穿于很多疾病的发生发展过程中，并且认为炎性反应可能是诸多疾病的重要共同通路[1]。因此防治慢性炎症性疾病的关键点和共同环节就是“控炎”。由此，我们选择高脂血症这个炎症的载体来观察艾灸调脂控炎的效应，以期探讨艾灸可以通过调脂控炎的效应治疗高脂血症，进而防治动脉粥样硬化性相关慢性疾病[2]。

1 材料与方法

1.1 分组与造模：选用雄性C57BL/6J小鼠，体重20±2g，购自常州卡文斯实验动物有限公司（许可证号：SCXK（苏）2011-0003），饲养于南京中医药大学实验动物中心（清洁级），适应性喂养1周后分组，随机分为正常组、模型组、艾灸组、药物组，共4组，每组10只。参考高脂血症造模方法[3-4]，结合预实验的结果进行改进，采用高脂饲料（北京华阜康生物科技股份有限公司[许可证号：SCXK（京）2014-0008）]自由饮食6周，造成高脂血症小鼠模型。造模期间，正常组每日以普通饲料喂养。

1.2 试剂及器材：总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）检测试剂盒（南京建成生物工程研究所），白介素-6（IL-6）、白介素-10（IL-10）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）检测试剂盒（南京阿普斯黛尔生物技术有限公司），直径0.7cm艾条（南京艾颜堂艾绒有限责任公司），洛伐他汀胶囊（批号：H10980272，扬子江药业集团有限公司），Allegra X-22系列多功能台式高速离心机（北京东迅天地医疗仪器有限公司），WZ-23000RX无纸记录仪（杭州凌硕检测仪器有限公司），ELx800酶标仪（美国Bio Tek公司），BCD-174型低温冰箱（德国西门子公司），VXE380型超低温冰箱（Thermo公司Czech捷克），QE-400A型电子称（南京联宇计量设备公司）。其他：无菌操作台、移液器、烧杯、小剪刀、眼科镊、注射器、EP管、冰袋等。

1.2 实验方法：分述如下。

1.2.1 干预方法：①正常组：继续使用普通饲料喂养，与艾灸组一样方法进行抓取和固定，但不予艾灸处理。②模型组：继续予以高脂饲料喂养，与艾灸组一样方法进行抓取和固定，但不予艾灸处理。③艾灸组：继续予以高脂饲料喂养。小鼠被仰卧位固定于小鼠固定器上，充分暴露小鼠神阙穴皮肤，剪除神阙穴区鼠毛，使用碘伏棉球消毒，待其安静不挣扎后，使用直径为0.7cm的清艾条，予每天1次持续10分钟的艾灸治疗，总共治疗2周。艾灸治疗时，将艾条垂直悬于神阙穴上方10±2mm处，为保持艾条一直处于红火状态，每分钟弹灰1次。人工控制无纸记录仪温度探头紧贴于施灸皮肤，监测并记录实施艾灸时的温度；同时也可根据无纸记录仪显示的温度及时调整艾条距皮肤的距离。通过调节艾条与施灸皮肤的距离和及时弹灰保持红火状态，将施灸温度控制在45±2℃[5-6]。④药物组：继续予以高脂饲料喂养。使用电子称称取药物组小鼠体重，每日予以洛伐他汀（10mg/kg）混悬液灌胃1次，共治疗2周。治疗期间同艾灸组一样方法进行抓取和固定，但不予艾灸处理。

1.2.2 血清制备：治疗结束后，禁食不禁水12小时后单侧眼球摘除收集血液将其置于离心管中静置1小时。常规条件下（离心参数：3000转/分钟）离心一刻钟后取上层血清，将上层血清置于EP管中，保存于-20℃的冰箱中待测。

1.2.3 指标检测：使用TC、TG试剂盒，釆用酶标仪比色法检测各组小鼠血清TC、TG的含量。使用IL-6、IL-10、TNF-α检测试剂盒釆用双抗体夹心法检测相关的血清炎性指标的水平。

1.3 统计学方法：本研究采用SPSS 19.0进行结果统计和分析。用完全随机设计的单因素方差分析统计符合正态分布且方差齐的计量数据，再以LSD检验进行组间比较；采用Welch检验符合正态分布但方差不齐的计量数据，并以Tamhane s T2检验进行组间比较，结果均以±s的形式表示。所有检验均是双侧检验，以P＜0.05或P＜0.01为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组小鼠TC、TG变化对比：见表1。

表1 艾灸神阙穴对高脂血症小鼠血清TC、TG水平的影响（±s，mmol/L）

表1 艾灸神阙穴对高脂血症小鼠血清TC、TG水平的影响（±s，mmol/L）

注：与正常组比较，##P＜0.01；与模型组比较，*P＜0.01。

组别正常组模型组艾灸组药物组TG 0.88±0.09 1.68±0.31##0.92±0.37*0.95±0.32*只10 10 10 10 TC 3.87±0.73 7.71±1.41##3.97±1.33*4.51±1.27*

2.2 各组小鼠IL-6、IL-10、TNF-α变化的比较：见表2。

表2 艾灸神阙穴对高脂血症小鼠血清IL-6、IL-10和TNF-α水平的影响（±s，pg/ml）

表2 艾灸神阙穴对高脂血症小鼠血清IL-6、IL-10和TNF-α水平的影响（±s，pg/ml）

注：与正常组比较，##P＜0.01，#P＜0.05；与模型组比较，*P＜0.05。

T N F-α 9 7.1 8±2 1.8 9 1 3 6.0 9±3 3.3 5##1 0 0.6 5±4 8.5 1*9 5.0 2±4 6.0 8*正常组模型组艾灸组药物组1 2 3.6 9±4 9.7 1 2 0 0.6 4±5 3.9 6##1 2 8.4 3±7 1.3 7*1 3 1.5 0±6 5.9 8*7 4.4 2±1 1.0 6 9 4.1 1±1 6.6 9#1 3 2.4 2±3 4.6 4*1 3 1.5 7±3 0.0 5*组别I L-6 I L-1 0

3 讨论

笔者研究结果表明，艾灸可以有效调控血脂，并且可以改善机体的异常炎性反应，控制炎症可能是艾灸调节血脂的重要途径。同时，我们注意到，在我们的实验研究中，虽然艾灸调节血脂与控制炎症的作用与洛伐他汀药物相当，但是艾灸在调脂控炎方面的独特优势仍值得进一步研究。艾灸的优势，一方面是艾灸控炎作用的整体性和双向性，另一方面是对于慢性炎症性疾病“治未病”的防治作用。

炎症反应具有四个基本的反应通路[7]，艾灸控制炎症的作用具有整体性，表现在艾灸可以干预炎性反应的起始、中间、终末等各个环节。目前动脉粥样硬化被医学界的多数学者认为是一种慢性炎症性疾病，炎症反应纵贯全过程[8]。其常见的致病因素是血脂的异常，本研究结果已表明艾灸对血脂具有良好的调节作用。在炎症介质方面选择IL-6、IL-10、TNF-α进行观察，发现艾灸在阻断此环节中发挥良好作用。另外艾灸控炎作用体现了艾灸良性的双向调节作用。艾灸对炎症因子（IL-6，TNF-α）起抑制作用，同时对抑炎因子（IL-10）起促进作用。这种调节体现了艾灸的双向调节能力。本研究充分说明，艾灸通过降低血脂水平、抑制炎症因子、促进抗炎因子进而发挥调脂控炎的效果。结合本实验的研究结果和医学界同类研究结果[9-10]，笔者认为艾灸调节血脂的功能与控制炎症反应密切相关，多环节多通路调脂控炎的整体作用是艾灸的重要优势。艾灸的整体性调整作用是基于人体生理范围内的双向性调整，因此艾灸可以达到有病治病、无病保健的目的。高脂血症是血管损伤的高危因素，可以引起“高脂血症-血管损伤-动脉粥样硬化-心脑血管疾病”的联动反应[11]，西药在防治动脉粥样硬化等慢性炎症性疾病方面有诸多不足之处[12]。艾灸在很大程度上避免了服药的副作用，且疗效好、操作方便、患者易于接受。《黄帝内经》中有记载“是故圣人不治已病治未病”，所以，基于艾灸对慢性炎症性疾病的调控，从“治未病”的角度进一步深入研究艾灸对高脂血症的治疗来预防心脑血管疾病。