高效液相色谱法测定人血浆中奥氮平的浓度

周本裕 刘文清 徐云庆 蒋春香

奥氮平(olanzapine),是一种临床常用的精神类药品［1］,其药理机制交复杂,能与多巴胺受体、5-羟色胺(5-HT)受体和胆碱能受体结合,并具有拮抗作用［2,3］。口服吸收良好,食物对其吸收速率无影响［4］,口服后5～8 h 可达到血浆峰浓度。主要在肝脏代谢,约75%的本品以代谢物的形式从尿中排出［5］。口服起始剂量、治疗剂量和维持剂量一般为10 mg/d,有效范围为5～20 mg/d［6,7］。本药物可引起泌乳素增加,但与剂量无关。少见不良反应有帕金森综合征、肝转氨酶一过性增高等［8］。由于其不良反应随着药物浓度的增加而增多,因此对于奥氮平的血药浓度检测尤为重要［9］。作者基于以上认识,用高效液相色谱法测定人血浆中奥氮平的浓度,探讨高效液相色谱法测定人血浆中奥氮平浓度方法及效果。

1 材料与方法

1.1 药品与试剂 奥氮平标准品(美国礼来公司)；甲醇、乙腈、乙酸乙酯、磷酸二氢钠、氢氧化钠、磷酸、抗坏血酸均为分析纯(国药集团化学试剂有限公司),水为双重蒸馏水。

1.2 仪器与色谱条件 Agilent 1260 型高效液相色谱仪；G1314B 紫外检测器；色谱柱为InfinityLab Poroshell 120 SB-C8(150 mm×4.6 mm×2.7 μm)；流动相为：V(十二烷基硫酸钠,磷酸二氢钠 pH 2.5)∶V(乙腈)=1 ∶1 的溶液；检测波长为260 nm；流速为1.0 ml/min；柱温35℃；干式氮吹仪Version 1.0；LEETO旋片真空泵；JP-dos 超声波清洗机。

1.3 样品处理 ①抽取临床服用奥氮平患者的静脉血3 ml,用肝素抗凝,以3000 r/min,离心5 min,吸取上层血浆,在每毫升血浆中加入质量分数为0.25%的抗坏血酸10 μl,置于-20℃的冰箱中保存待检测。②取1 ml 待测血浆,加入乙酸乙酯2 ml 及0.5 mol/L 氢氧化钠0.5 ml,振荡5 min,以2500 r/min 的转速离心10 min,吸出上清液,在室温中用氮气吹干,残渣用1 ml 流动相溶解,进样20 μl,以峰面积外标法定量。

2 结果

2.1 色谱行为 图1、图2 分别为在本实验条件下测得的空白血浆及加奥氮平标准品的血浆的高效液相色谱图,结果表明血浆中杂质成分对奥氮平测定没有干挠。

图1 空白血浆

图2 含奥氮平血浆

2.2 线性关系及检测限 配制300 mg/L 的奥氮平流动相标准溶液作为储备液。临用前,吸取一定体积的储备液,用流动相稀释为3 mg/L 和30 mg/L 的标准溶液。分别吸取上述标准溶液适量,配制成0.15 mg/L,0.30 mg/L,0.60 mg/L,1.20 mg/L,3.00 mg/L,6.00 mg/L 的标准系列溶液。分别吸取上述系列浓度的标准溶液100 μl 于1 ml 空白血浆中,制得一系列不同浓度的奥氮平血浆,再加0.25%抗坏血酸10 μl,以下按1.3 ②项操作,进样20 μl 测定。所得曲线参数为：Y=mX+b,m=-3.74938×10-2,b=0.322968。相关性：r=0.99935,本法线性范围为15～600 ng/ml,最低检测限为6 ng/ml。

2.3 回收率与精密度 分别配制含奥氮平标准品质量浓度为30 ng/ml,120 ng/ml,300 ng/ml 的血浆各5 份,每份1 ml,加0.25%抗坏血酸10 μl,以下按1.3 ②项操作,进样20 μl 测定。在上述实验条件下分析,测得血浆中奥氮平的平均回收率为96.61%(n=15)。取空白血浆15 ml,平均分为3 份,每份中加入奥氮平标准品,分别配制成30 ng/ml,120 ng/ml,300 ng/ml 的血浆。将每种浓度的血浆分为5 份,每份1 ml,加0.25%抗坏血酸10 μl,按1.3 ②项操作,当日测定,求得日内平均相对偏差为6.70%(n=15)。另配上述3 种浓度的标准血浆各5 ml,加0.25%抗坏血酸50 μl,每日分别取1 ml 测定,连续5 d 测定,求得日间平均相对偏差为7.60%(n=15)。结果表明本法的稳定性、可靠性均达到要求。具体数据见表1,表2,表3。

表1 奥氮平灵敏度实验

表2 奥氮平回收率及批间差实验

表3 奥氮平日间差实验

2.4 灵敏度 目前临床上奥氮平血药质量浓度在20～80 ng/ml 之间。本法的最低检测限为6 ng/ml,可以满足临床监测时灵敏度的需要。

3 讨论

奥氮平适用于精神分裂症和其他有严重阳性症状和(或)阴性症状的精神病的急性期和维持治疗［10］；亦可缓解精神分裂症及相关疾病常见的继发性情感症状。由于属于精神类药物,长期服用奥氮平还是有不少副作用,如：①体重增加［11］：服用奥氮平会导致体重增加,特别是在长期服用的患者身上,长期服用患者体重增加超过正常体重的25%以上的几率为10%。②血糖的影响：长期服用奥氮平,可能会导致糖耐量的异常,导致血糖升高的情况出现［12］。研究表明长期服用奥氮平可导致糖化血红蛋白的升高,但6 个月后,平均血糖增长率会有所减缓［13］。③血脂的影响：临床试验证明,长期服用奥氮平可能会使低密度脂蛋白升高,总胆固醇的量也会有所升高,但如果停服药物后,4～6 个月可逆转［14］。④催乳素影响：长期服用奥氮平可能会导致催乳素的升高,特别是有月经不调症状的患者,但一般程度较轻。⑤除了上述不良反应,还可能出现的不良反应有：嗜睡、体位性低血压、运动障碍,口感、便秘,肝药酶升高、光敏反应等不良反应［15］。

因此,对于糖尿病患者要慎用奥氮平,注意引起酮症酸中毒或昏迷的风险。服药期间,应当注意摔倒的危险,不要进行操作机器、驾驶等可能因瞌睡而发生危险的活动［16］。奥氮平作为精神类药物,也应当注意停药综合征的出现,如果突然停药,可能会引起出汗、失眠、震颤、焦虑、恶心或呕吐等急性症状,如需停药,需在医生指导下逐渐减量为好。吸烟会导致奥氮平的代谢加快,影响药效,因此不建议服用药物期间吸烟［17］。

高效液相色谱法是常用的检测方法,作者用高效液相色谱法测定人血浆中奥氮平的浓度,探讨高效液相色谱法测定人血浆中奥氮平浓度方法及效果。本研究中,作者采用Agilent 1260 型高效液相色谱仪G1314B 紫外检测器,色谱柱为InfinityLab Poroshell 120 SB-C8(150 mm×4.6 mm×2.7 μm),流动相为：V(十二烷基硫酸钠,磷酸二氢钠 pH 2.5)∶V(乙腈)=1∶1 的溶液。检测波长为260 nm,流速1.0 ml/min,柱温35℃。在上述条件下,该方法最低检测限为6 ng/ml,血浆中奥氮平的平均回收率为96.61%,测定结果的日内平均相对偏差为6.70%(n=15),日间平均相对偏差为7.60%(n=15)。由此可见,所建立的高效液相色谱法方法适用于奥氮平临床应用研究中的血药浓度的监测。