丹参饮对非酒精性脂肪肝大鼠血脂、肝脏及心脏PGC-1αmRNA 表达的影响

张衎，黄古叶，李媛

（广西中医药大学第一附属医院，广西 南宁 530000）

0 引言

非酒精性脂肪肝病（NAFLD）是一类组织学改变与酒精肝病相类似，但无过量饮酒史的病理综合征，逐渐成为进展肝硬化、肝癌的重要因素之一，同时也是代谢综合征在肝脏的表现，伴随心血管方面脂质代谢及微循环紊乱，已严重危害人类健康。过氧化物酶体增殖物激活受体γ 激活因子1α（peroxisome proliferators-activatied receptor γ coactivator-1α，PGC-1α） 是近年发现的一种核转录协同激活因子，属于PGC-1 家族，主要表达于骨骼肌、心脏、肝肾等线粒体丰富和能量要求高的组织，研究发现PGC-1α 不仅参与调节适应性产热和线粒体生物合成，而且与诱导细胞凋亡、炎症反应、糖脂代谢及肿瘤代谢也有着密切关系[1]，另外被认为在胰岛素抵抗及NAFLD 的发生过程中起到了关键作用[2]。

丹参饮是活血化瘀、行气止痛的代表方，气滞、痰郁、血瘀是本病的主要病理变化。笔者在临床上应用在中医体质辩证用方基础上合用丹参饮治疗脂肪肝、代谢综合征相关高血压心脏改变收效较好。本研究在中医“整体观”指导下观察丹参饮在改善肝脏脂质代谢同时对心脏脂质代谢的微观影响。

1 主要材料及试剂

1.1 材料。清洁级雄性SD 大鼠30 只购于广西医科大学实验中心。高脂饲料（普通饲料88%+猪油10%+胆固醇2%）由广西中医药大学中心实验室提供、配置；丹参、砂仁、木香饮片由广西中医药大学第一附属医院中药房提供；总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）由广西中医药大学仁爱分院检验科检测；总RNA 提取试剂盒（天根生化科技有限公司）；trizol（日本TakaRa 公司）；逆转录试剂盒（美国Thermo公司） 。

1.2 方法

1.2.1 分组、造模与给药：清洁级雄性SD 大鼠30 只，经适应性喂养1 周后随机均分为空白组、对照组和丹参组，空白组以普通饲料喂养，对照组和丹参组以高脂饲料喂养，第8周开始正常组、对照组给予相同体积生理盐水灌胃，丹参组剂量按3.6g/kg/d 给予丹参饮煎液灌胃。每组大鼠定时灌胃1 次/天，连续用药4 周，用药期间对照组及丹参组继续高脂喂养。于12 周末处死大鼠。大鼠隔夜禁食，次晨腹主动脉采血后处死，取肝右叶组织、心脏组织组织-70℃保存备测。

1.2.2 检测指标：①一般情况：观察大鼠活动量、饮食、二便饮食。②血清中TC、TG 含量测定 大鼠腹主动脉采血5 mL，送广西中医药大学仁爱分院检验科进行检测。③ RT-PCR 法测定PGC-1αmRNA 的表达，细胞总RNA 的提取采用TRIzol 一步法，按说明书操作。PCR 反应条件：预变性50℃2 min，95℃10 min；40 个循环中95℃30s，60 ℃30s。trizol 提取各组大鼠心脏、肝脏总RNA，检测RNA 的浓度和纯度后，后各取mRNA2μL 按照说明书及反应条件进行，同时以β-肌动蛋白（β-actin）为内参，得出C 值。再根据2-ΔΔCT 法计算结果。PGC-1α引 物 上 游5’-AATGCAGCGGTCTTAGCACT-3， 下 游5’-GTGTGAGGAGGGTCATC，片段长度168 bp；β-actin引 物 上 游5’-CACGGAGGCCGGACTCATC-3’， 下 游5’-TAACCTCTATGCCAACAGT-3’，片段长度186 bp。

1.3 统计学分析。采用SPSS 25.0 统计学软件，计数资料用x±s 表示，采用单因素方差分析，组间比较采用q 检验，P＜0.05 有统计学差异。

2 结果

2.1 一般情况观察。空白组大鼠体力充沛、活动量大、二便正常；造模组（对照组及丹参组）大鼠体力稍差，活动量降低、大便稀溏、对外界刺激敏感性降低。灌胃过程中意外死亡3 只。

2.2 对NAFLD 大鼠血清TC、TG 的影响。与正常组比较，对照组大鼠血清TC、TG 的水平明显升高（P＜0.05）。与对照组比较，给予丹参饮干预后，大鼠血清TC、TG 水平明显降低（P＜0.05），见表1。

表1 丹参饮对NAFLD 大鼠血清TC、TG 的影响

表1 丹参饮对NAFLD 大鼠血清TC、TG 的影响

注：与空白组比较，⋆P<0.05；与对照组比较，ΔP<0.05。

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2.3 对NAFLD 大鼠心脏、肝脏组织PGC-1αmRNA 表达的影响。与正常组比较，对照组心脏、肝脏PGC-1αmRNA的表达明显降低（P<0.05）；与对照组比较，给予丹参饮干预后，丹参组大鼠心脏、肝脏PGC-1αmRNA 表达明显上升（P<0.05），见表2。

表2 丹参饮对NAFLD 大鼠心脏组织、肝脏组织PGC-1αmRNA 表达的影响

表2 丹参饮对NAFLD 大鼠心脏组织、肝脏组织PGC-1αmRNA 表达的影响

注：与空白组比较，⋆P<0.05；与对照组比较，ΔP<0.05。

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3 讨论

非酒精性脂肪肝病在中医古代文献中并没有记载，根据其症状及临床特点，可把其归属于祖国医学的“胁痛”、“痞满”、 “积聚”等范畴。该病成因与情志、饮食、痰湿及瘀血有关，郑丁、郭建利等均认为该病基本病机为痰瘀交阻[3-4]，笔者认为痰瘀有形病理因素必有气滞，因而气滞、痰郁、血瘀是本病的主要病理变化。丹参饮出自《时方歌括》，方中由丹参一两，檀香及砂仁各一钱组成。诸药合用共凑活血化瘀，行气止痛之功。倪青[5]等探讨丹参饮对糖尿病性心肌病大鼠的保护作用，丹参组与模型组相较，其血糖、甘油三脂、总胆固醇明显降低，电镜观察心肌细胞亚细胞结构破坏程度较轻，能显著延缓高血糖大鼠的糖尿病心肌病发展进程。周小青[6]等用丹参饮、桃红四物汤等五首活血化瘀复方研究表明对高脂饮食家兔动脉粥样硬化均有调节血脂、改善血液动力学及抑制动脉粥样硬化作用。而本次实验研究发现NAFLD 模型大鼠肝脏组织中PGC-1αmRNA 表达降低，而丹参饮干预后肝脏及心脏组织PGC-1αmRNA 表达上升，同时血清TC、TG 下降。提示PGC-1α 参与调节NAFLD 脂质代谢过程，对心血管的脂质代谢亦有改善作用。

综上所述，丹参饮能够提高肝脏、心脏组织PGC-1α 的表达，改善脂质代谢，与临床上运用中医治未病思想指导，在治疗NAFLD 同时早期干预心血管的脂质代谢及微循环紊乱理念相符，为NAFLD 早期预防心血管病变提供治疗手段，开拓中医肝病方向治未病临床思路。