乳腺癌钼靶X线恶性钙化征象与ER、PR和HER-2、Ki-67表达的关系

陶秀霞，朱峰岭，汪建文

芜湖市第二人民医院，安徽芜湖241001

乳腺癌是威胁我国女性身心健康最常见的恶性肿瘤。近年来，随着生活节奏加快、生活习惯改变、职业压力增加等，乳腺癌的发病率逐年上升并呈年轻化趋势。早期发现乳腺癌，尤其是无症状的乳腺癌，对提高患者预后具有重要意义。乳腺钼靶X线检查是乳腺癌筛查首选的影像学检查方法。有研究报道，90%以上无症状的乳腺癌患者是通过钼靶X线检查被发现的。恶性钙化征象是乳腺癌钼靶X线检查中的重要特征之一，为进一步诊治提供了重要依据。雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、人表皮生长因子受体2(HER-2)、增殖细胞核抗原Ki-67表达是划分乳腺癌分子亚型的重要依据，对乳腺癌治疗方案选择和预后判断具有指导意义[1～3]。本研究观察了乳腺癌钼靶X线恶性钙化征象与ER、PR、HER-2、Ki-67表达的关系，旨在为乳腺癌术前辅助内分泌治疗和预后判断提供更多有价值的参考信息。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择2016年4月～2018年11月芜湖市第二人民医院收治的女性乳腺癌患者81例。所有患者经术后组织病理检查明确诊断。纳入标准：①符合原发性乳腺癌诊断，单侧发病；②初诊，女性；③术前接受乳腺钼靶X线检查；④接受乳腺癌根治手术治疗。排除标准：①乳腺癌转移者；②合并其他部位恶性肿瘤者；③合并心、肝、肾等重要脏器严重疾病者；④乳腺钼靶X线表现为可疑恶性钙化征象者；⑤临床资料不完整者。根据术前乳腺钼靶X线有无恶性钙化征象，将患者分为有恶性钙化组36例、无恶性钙化组45例。其中，有恶性钙化组年龄30～75(55±12)岁，左乳19例、右乳17例，浸润性癌29例、非浸润性癌7例，乳房内有肿块30例、乳头皮肤出现酒窝征或橘皮征3例、乳头溢液3例；无恶性钙化组年龄38～86(62±14)岁，左乳24例、右乳21例，浸润性癌36例、非浸润性癌9例，乳房内有肿块35例、乳头皮肤出现酒窝征或橘皮征5例、乳头溢液5例。两组一般资料具有可比性。本研究经芜湖市第二人民医院医学伦理委员会批准，患者或其家属知情同意。

1.2 乳腺钼靶X线钙化征象评估 采用GE全数字化乳腺钼靶X线摄影机常规投照双侧乳腺内外斜位、头尾位，必要时加摄侧位或局部点压放大摄影。采用双盲法由两位高年资放射科医师独立阅片，参考美国放射学会制定的乳腺影像报告和数据系统对钙化征象进行分类。乳腺钙化征象按性质分为良性钙化、可疑恶性钙化和恶性钙化。良性钙化：一般钙化灶较大，呈粗糙或边缘清晰的圆形钙化；可疑恶性钙化：通常表现为不定形或模糊钙化和粗糙不均质钙化；恶性钙化：颗粒点状钙化或线样分支状钙化，边缘模糊，大小、形态不一，密度较低[4]。

1.3 ER、PR、HER-2、Ki-67表达检测 采用免疫组化SP法。取手术切除的乳腺癌组织，10%中性甲醛固定24 h，常规脱水、透明，石蜡包埋，3 μm厚连续切片。切片经65 ℃烤片、二甲苯脱蜡、梯度乙醇水化、3% H2O2灭活内源性过氧化酶、加热抗原修复、正常山羊血清封闭后，分别滴加ER、PR、HER-2、Ki-67一抗，4 ℃孵育过夜，次日滴加生物素标记的二抗，室温孵育30 min，DAB显色，苏木精复染，盐酸乙醇分化，梯度乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固，显微镜下观察。以PBS代替一抗作为阴性对照。

采用双盲法由两位病理科医师独立阅片。ER、PR、Ki-67阳性染色定位于细胞核，呈棕褐色颗粒；HER-2阳性染色定位于细胞膜或细胞质，呈棕褐色颗粒。每张切片随机选取5个100倍视野，镜下发现阳性染色细胞即可判定为阳性表达、未发现阳性染色细胞为阴性表达。

1.4 统计学方法 采用SPSS22.0统计软件。计数资料比较采用χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

有恶性钙化组ER、PR阳性表达率均低于无恶性钙化组(χ2分别为0.014、0.020，P均<0.05)，而HER-2、Ki-67阳性表达率均高于无恶性钙化组(χ2分别为0.023、0.006，P均<0.05)。两组ER、PR、HER-2、Ki-67表达情况见表1。

表1 两组ER、PR、HER-2、Ki-67表达情况[例(%)]

3 讨论

乳腺癌是起源于乳腺导管上皮的恶性肿瘤，其病因和发病机制尚不完全清楚[5，6]。乳腺癌早期往往不具备典型的症状和体征，不易被发现或引起重视，很多患者就诊时已发展至中晚期，错过了最佳治疗时机，预后较差。乳腺钼靶X线检查是目前诊断乳腺癌最有效、最可靠的手段。乳腺癌钼靶X线的重要特征是恶性钙化征象。恶性钙化征象是诊断乳腺癌的有力证据，尤其是对无症状的乳腺癌患者更具价值。有研究报道，有恶性钙化征象的乳腺癌恶性程度更高，侵袭性更强，患者预后更差。因此，阐明乳腺癌钼靶X线恶性钙化征象与患者临床病理特征的关系，可能有助于乳腺癌治疗选择和预后判断。

ER、PR、HER-2、Ki-67表达是划分乳腺癌分子分型的重要依据，对乳腺癌治疗方案选择和预后判断具有指导意义[1～3]。ER、PR是乳腺癌的生物学标志物，是目前国内外临床针对乳腺癌内分泌治疗和预后评估的重要指标。ER是一种具有与雌激素特异性结合形成激素-受体复合物，从而使激素产生效应的蛋白质分子。PR是ER作用于染色体后新合成的一种蛋白质，可调节乳腺上皮细胞生长。PR的合成受到ER的调控，故PR阳性者ER大多亦阳性。正常乳腺上皮细胞内存在ER、PR，当细胞发生癌变时，ER和PR可能保留也可能丢失。如果细胞内仍保留ER和(或)PR，表明乳腺癌细胞高分化，其增殖仍受内分泌调控，称为激素依赖性乳腺癌；反之，表明乳腺癌细胞低分化，其增殖不受内分泌调控，称为非激素依赖性乳腺癌。激素依赖性乳腺癌往往生长缓慢，对内分泌治疗反应性高，患者预后较好；非激素依赖性乳腺癌对内分泌治疗效果不佳，预后较差。但乳腺癌患者预后还受其他因素影响，如病理类型、TNM分期、有无转移等，不能仅依靠ER和(或)PR阳性来判断患者预后[7]。HER-2是表皮生长因子受体家族成员之一，是乳腺癌常用的基因标志物。在乳腺癌组织中HER-2过表达，其过表达与肿瘤侵袭、转移和患者预后密切相关。大约20%的原发性乳腺癌患者存在HER-2基因扩增或蛋白过表达现象。有研究表明，HER-2表达与TNM分期、肿瘤大小和淋巴结转移呈正相关关系，与ER、PR表达及组织分化程度呈负相关关系[8]，提示HER-2可作为判断乳腺癌发生、发展的分子标志物。Ki-67是一种与细胞增殖相关的核抗原，在细胞增殖期表达，能够特异性反映肿瘤细胞的增殖活性。有研究认为，乳腺癌组织Ki-67表达越高，肿瘤恶性程度越高[9]。有研究发现，Ki-67表达与乳腺癌早期复发有关，乳腺癌复发越早，Ki-67表达越高；乳腺癌Ki-67阳性表达≥14%者复发和死亡的风险高于乳腺癌Ki-67阳性表达<14%者[10]。因此，Ki-67表达变化与乳腺癌的发生、发展有关，并可作为指导乳腺癌新辅助化疗并预测化疗敏感性的分子生物学指标[11]。但目前ER、PR、HER-2、Ki-67表达与乳腺癌钼靶X线恶性钙化征象的关系报道较少。

既往研究认为，钼靶X线恶性钙化征象的乳腺癌患者病理特征多表现为HER-2阳性表达和ER、PR阴性表达[12]；起源于乳腺导管上皮的乳腺癌恶性钙化率较高，HER-2在肿块合并簇状钙化乳腺癌患者中表达最高，且与肿块影像学表现有关[13，14]。本研究结果发现，有恶性钙化组ER、PR阳性表达率均低于无恶性钙化组，而HER-2、Ki-67阳性表达率均高于无恶性钙化组，提示钼靶X线恶性钙化征象可在一定程度上反映乳腺癌ER、PR、HER-2、Ki-67表达情况。

综上所述，钼靶X线恶性钙化征象可在一定程度上反映乳腺癌ER、PR、HER-2、Ki-67表达情况，这为乳腺癌术前辅助内分泌治疗和预后判断提供了更多有价值的参考信息。