血红蛋白电泳联合红细胞平均体积检测在孕妇地中海贫血筛查中的应用价值

王 丹

（中山市博爱医院，广东 中山 528400）

地中海贫血为一组遗传性溶血性贫血，由于珠蛋白基因突变或缺失，珠蛋白链合成障碍，血红蛋白组成成分出现改变，引起慢性溶血性贫血，是染色体不完全显性遗传性疾病。孕妇地中海贫血可能引起胎儿畸形、发育迟缓等[1]，同时对孕妇生命安全具有一定的威胁，因此近年来孕妇地中海贫血筛查诊断成为妇产科及检验科关注的重点问题。地中海贫血基因检测为地中海贫血的诊断“金标准”[2]，然而其技术要求高、价格昂贵，难以在基层医院推广，因此探讨更为准确、成本低、操作简单的血液学检查尤为重要。血红蛋白（Hb）电泳、平均红细胞体积（MCV）检测为地中海贫血筛查的常见方式，然而临床实践证实单项试验存在较大的误差，易漏诊、误诊，鉴于此，近年来联合检验在地中海筛查中逐渐推广使用。为进一步探讨Hb电泳联合MCV检测在孕妇地中海贫血筛查中的应用价值，笔者选取我院诊治的48名疑似地中海贫血孕妇作为对象进行研究，报告如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料

选取自2016年12月至2018年12月在我中心接受地中海贫血筛查的1 000名孕妇为研究对象，均符合以下纳入标准：（1）在我院建档且正常产检者；（2）知晓本次研究且自愿参与。排除标准：（1）其他血液系统疾病，如凝血功能障碍等；（2）孕期大量出血者；（3）重要脏器严重功能障碍；（4）临床资料不完整者。年龄 22～45 岁，平均（32.68±3.33）岁；孕周 12～32 周，平均（22.68±3.03）周；其中初产妇 680例，经产妇 320 例；孕次 1～3次；有地中海贫血家族史21例。孕妇均知晓本次研究且签署知情同意书，研究经医院伦理委员会审核通过。

1.2 方法

孕妇清晨空腹状态下抽取静脉血5 ml，3 000 r/min离心，离心10 min。Hb检测仪器为美国Fragement Analyzer全自动毛细血管电泳系统，正常参考值：HbA2为2.5%～3.5%，且无异常Hb出现；若 HbA2＜2.5%或者 Hb异常（HbH、Hb-Bar's），则认定为α地中海贫血表型阳性；若HbA2＞3.5%或者HbF＞2%，则认定为β地中海贫血表型阳性。MCV检测使用国产迈瑞三分类全自动血细胞分析仪BC-1800进行检测，具体操作严格按照仪器说明书进行。参考值82～94 fL，截断值＜80 fL[3]。孕妇同时接受地中海贫血基因检测：提取外周血DNA，使用深圳益生堂有限公司生产的制剂分析α珠蛋白基因（检测方法为PCR扩增加琼脂糖电泳）与β珠蛋白基因（PCR加反向点杂交）。

1.3 统计学分析

2 结果

2.1 筛查结果

对1 000例孕妇进行地中海贫血筛查，筛查阳性为48例，阳性率为4.80%。其中筛查α地中海贫血38例，阳性率为3.80%；β地中海贫血10例，阳性率为1.00%。

2.2 地中海贫血基因诊断检测结果

对筛查表型阳性的48例孕妇行基因检测，其中地中海贫血39例（81.25%，其中α地中海贫血28例，β地中海贫血11例），缺铁性贫血9例（18.75%）。

2.3 地中海贫血组与缺铁性贫血组Hb电泳及MCV水平比较

地中海贫血组、缺铁性贫血组孕妇的HbA、HbF及HbA2、MCV 水平比较，存在明显差异（P＜0.05），见表 1。

2.4 Hb电泳、MCV检测及联合检测敏感度、特异度和准确度比较

以地中海贫血基因检测结果为“金标准”，则Hb电泳检测真阳性30例，假阳性3例，真阴性6例，假阴性9例；MCV检测真阳性30例，假阳性2例，真阴性7例，假阴性9例；联合检测真阳性37例，假阳性1例，真阴性8例，假阴性2例。联合检测敏感度、特异度及准确度均明显高于Hb电泳及MCV单独检测（P＜0.05），见表 2。

表1 地中海贫血组与缺铁性贫血组Hb电泳及MCV水平比较（±s）

表1 地中海贫血组与缺铁性贫血组Hb电泳及MCV水平比较（±s）

组别地中海贫血组（n=39）缺铁性贫血组（n=9）t P HbA（%）86.78±4.00 96.08±3.29 6.472 0.000 HbF（%）1.29±0.36 0.44±0.15 6.900 0.000 HbA2（%）5.20±0.68 2.39±0.11 12.261 0.000 MCV（fL）75.69±4.00 81.01±3.87 3.617 0.000

表2 Hb电泳、MCV检测及联合检测敏感度、特异度和准确度比较

2.5 Hb电泳、MCV检测及联合检测阳性、阴性预测值比较

Hb电泳、MCV检测及联合检测阳性预测值比较，无显著差异（P＞0.05）；Hb电泳、MCV检测阴性预测值明显低于联合检测（P＜0.05），见表 3。

表3 Hb电泳、MCV检测及联合检测阳性预测值、阴性预测值

3 讨论

3.1 地中海贫血的研究意义

地中海贫血为遗传性溶血性疾病，统计数据显示，若夫妇均为地中海贫血基因携带者，则子女有50%概率为基因携带者，25%概率为重型地中海贫血患者[4]，患儿出生时无明显症状，然而重型患儿在3～12个月后开始出现慢性进行性贫血，随着年龄增加，可出现颅骨明显改变，肺炎或气管炎，胰腺、肝、脑垂体及心肌严重损害等，多在5岁前死亡[5]，因此遗传咨询、产前诊断尤为重要。通过产前诊断并及时终止妊娠为临床最为有效的预防措施，虽然近年来国家加大婚前、产前筛查，然而根据我国南方地中海贫血高发区统计数据显示，每年重症地中海贫血患儿出生人数还是相对较多，给患儿家庭及社会带来巨大的经济负担[6]，因此进一步推广地中海贫血孕前、产前筛查仍然为计划生育的重中之重。

3.2 Hb电泳与MCV检测在孕妇地中海贫血筛查中的意义

地中海贫血作为小细胞低色素贫血的主要类型之一，患者中幼红细胞利用障碍，MCV水平明显低于正常人，因此在地中海贫血中MCV检测对临床具有较大价值。本次研究中，MCV检测敏感度为76.92%、特异度77.78%、阳性预测值93.75%，然而其阴性预测值仅为43.75%。分析认为，除了地中海贫血可表现为MCV外，缺铁性贫血患者亦可能伴有MCV指标异常，本次研究中缺铁性贫血组孕妇MCV平均为（81.01±3.87）fL证明了这一观点，因此其诊断特异性较低。

近年来，地中海贫血的发病机制逐渐明确，临床公认珠蛋白基因的缺失或点突变为主要原因，α、β、γ、δ链为组成珠蛋白的肽链，均具有相应的基因编码，而基因点突变、缺失等均可引起各肽链合成障碍，因此临床将地中海贫血分为α、β、γ、δ共4种类型，我国地中海贫血以α、β最为常见。α地中海贫血是由于α链合成减少，导致β、γ链相对过剩，形成四聚体如HbH及HbBar's等，这些异常Hb分子量、带点情况与正常Hb不同，因此可通过电泳进行分离。β地中海贫血是由于β珠蛋白基因突变诱导β珠蛋白链合成受阻，在机体代偿性作用下，γ及δ珠蛋白基因转录升高与α珠蛋白链结合导致HbA2及HbF浓度增加，因此临床将HbA2及HbF作为β地中海贫血的特征性标识，而Hb电泳近年来已经成为诊断地中海贫血的主要指标。随着研究深入，人们发现Hb电泳可能会漏诊部分特定类型的地中海贫血，如单纯-SEA/ɑɑ携带者伴有红细胞脆性及MCV水平下降，然而其血红蛋白电泳结果则是正常的[7]，单纯Hb电泳及MCV检测均具有较高的误差。本次研究中，Hb电泳检测敏感度、特异度分别为76.92%、66.67%，阳性预测值为90.91%，由此可见，Hb电泳在地中海贫血检测中敏感度、特异度较低。以往临床为提高地中海贫血的诊断准确性，多采用基因诊断，然而该检测方法操作复杂、技术要求高且价格昂贵，因此难以在基层医院普及且难以作为筛查手段推广。鉴于此，有学者提出通过联合特异度高、敏感度高的指标进行检测，以提高阳性、阴性预测值，使检测结果更加可信，减少地中海贫血的漏诊与误诊。本次研究中，Hb电泳联合MCV检测敏感度、准确度及阳性预测值均在90%以上，证明了其在地中海贫血诊断中的显著价值。然而需注意，其特异度及阴性预测值相对较低，因此必要时仍需通过基因诊断等减少漏诊。

总之，Hb电泳联合MCV检测在孕妇地中海贫血筛查中具有较高准确性，且操作简单、价格低廉，适合在临床推广使用。然而其特异度相对较低，必要时需进一步诊断以降低漏诊率。