冠心病患者血清miR-145、TREML4水平变化及临床意义

蔡晓航

·临床论著·

冠心病患者血清miR-145、TREML4水平变化及临床意义

蔡晓航*

（河南省南阳市第一人民医院心内二科，河南 南阳 473010）

探讨冠心病患者血清miR-145、TREML4水平变化及临床意义。选取2015年1月至2019年1月126例初诊冠心病患者为研究组，50例健康志愿者作为对照组。分别以qRT-PCR法测定血清miR-145水平，Western blot法测定TREML4水平，观察不同Gensini评分患者的血清miR-145、TREML4水平。同时采用Pearson相关性分析血清miR-145、TREML4水平与Gensini 评分相关性。研究组患者的miR-145水平明显低于对照组（P<0.05），而TREML4明显高于对照组（P<0.05）。Gensini评分<20分、20-40分、>40分患者的miR-145水平呈现下降趋势，而TREML4水平呈现上升趋势，且各组间比较，差异均有统计学意义（P<0.05）。Pearson相关性分析显示，血清miR-145与冠心病患者Gensini积分呈负相关（P＜0.05），而TREML4与Gensini积分呈正相关（P＜0.05），而且血清miR-145与TREML4水平呈负相关（P＜0.05）。冠心病患者存在miR145低表达，TREML4高表达，两者联合检测能反应冠心病患者的病情的严重程度。

冠心病；miR-145；TREML4；临床意义

冠心病又称为冠状动脉粥样硬化性心脏病，为临床常见疾病，男性发病率明显高于女性，并趋于年轻化[1]。该病如不及时治疗，易导致不稳定心绞痛和急性心肌梗死的发生，严重时危及患者的生命。因此，寻求早期诊断和监测病情进展的手段尤其重要。

目前，临床上冠心病诊断的金标准是冠状动脉造影，但该法对人易产生创伤，且无法用于早期诊断，也无法反映病情的进展[2]。研究显示，冠心病发病与动脉粥样硬化程度有关，是一种进展性动脉壁增厚的慢性炎性反应过程[3]。随着研究的深入发展，越来越多的证据证明，微小核糖核酸（microRNA，miRNA）与心血管疾病有关，并稳定存在于血清中[4]。

miR-145为miRNAs亚型之一，主要在血管平滑肌细胞中表达，通过影响平滑肌细胞表型转换，进而影响血管平滑肌细胞的增殖和迁移，从而影响动脉粥样硬化的形成和进展，有望成为冠心病诊断的标记物[5]。

TREML4属于髓样细胞触发受体（Triggering receptors expressed on myeloid cells，TREM）家族成员，与衔接分子DAP12相关联，在CD8α+树突细胞和脾巨噬细胞中高度表达。已有研究证明，TREML4参与动脉粥样硬化过程，可能具有作为心血管风险生物标志物的潜力[6]。本研究重点分析冠心病患者血清miR-145、TREML4水平，为临床冠心病的诊断、治疗及预后提供新的思路。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2015年1月至2019年1月在我院接受治疗的126例冠心病患者作为研究对象，均经冠脉造影确诊。其中男性78例，女性48例；年龄45~81岁，平均60.25±6.37岁；急性心肌梗死21例，不稳定型心绞痛 47例，稳定型心绞痛58例。选择同期参加体检的50例健康志愿者作为对照组，其中男32例，女18例；年龄45~82岁，平均60.47±6.52岁。两组成员在性别、年龄等方面比较，无统计学差异（P>0.05）。研究前所有成员均签署知情同意书，并经院伦理委员会的批准。

1.2 纳入和排除标准

纳入标准：①符合WHO的诊断标准；②冠脉血管狭窄≥50%血管≥1支；③均未治疗。

排除标准：①血液系统或免疫系统疾病；②心肝肾等严重疾病患者；③恶性肿瘤。

1.3 Gensini评分及标准

依据冠脉狭窄程度评分，无：0分，0%~25%为1分，26%~50%为2分，51%~75%为4分，76%~90%为8分，91%~99%为16分，100%为32分，各个分支积分相加，既得Gensini积分。

1.4 血清miR-145、TREML4蛋白测定

抽空腹静脉血10 mL置于非抗凝管，3500 rpm离心15 min，分离血清。

1.4.1 qRT-PCR法测定miR-145水平

TRIzol试剂提取总RNA，按照逆转录试剂盒合成cDNA。U6作为内部参考基因，引物序列由上海生物工程公司合成。反应体系包括10μL SYBR预混物Ex Taq™（2×），5 μmol·L-1上游和下游引物各2 μL，2 μL逆转录产物和4 μLddH2O。95℃变性30 s，55℃30 s，72℃30 s，45个循环。采用相对定量2-△△Ct法比较目的基因水平。

1.4.2 Western blot法检测TREML4蛋白水平

常规方法提取蛋白质，参照说明书行SDS-PAGE凝胶电泳，转膜，5%脱脂奶粉封闭2 h，加入一抗（TREML4，1: 1000，美国Sigma公司）4℃孵育过夜后，孵育二抗（1: 1000，上海碧云天生物技术有限公司），Bio-Rad凝胶成像系统成像拍照，以β-actin为内参分析待测蛋白相对表达值。

1.5 统计学分析

2 结果

2.1 miR-145、TREML4水平比较

研究组miR-145蛋白表达水平明显低于对照组，而TREML4明显高于对照组（P<0.05），见图1A和表2。

表1 miR-145引物序列

表2 miR-145、TREML4水平（±SD）

注：与对照组相比，*P＜0.05。

2.2 不同 Gensini 评分患者血清miR-145、TREML4水平

表3显示，Gensini 评分>40分、20-40分患者的miR-145水平均明显低于<20分患者，而TREML4水平均高于<20分患者（P<0.05）；Gensini 评分>40分患者的miR-145水平明显低于20-40分患者，而TREML4水平高于20-40分患者（P<0.05），见图1B。

图1 TREML4水平蛋白水平

注：A：1. 研究组，2. 对照组；B：1 <20分；2 20-40分；3 >40分

2.3 Gensini 评分相关性分析

Pearson相关性分析显示，血清miR-145与Gensini积分呈负相关（r=-0.674，P＜0.05），而TREML4呈与Gensini积分正相关（r=0.638，P＜0.05），而且血清miR-145与TREML4水平呈负相关（r=-0.709，P＜0.05）。

表3 不同Gensini评分患者血清miR-145、TREML4水平

注：与<20分比较，*P<0.01；与20-40分比较，#P<0.01。

3 讨论

冠心病为临床常见病，其发生与冠状动脉粥样硬化有关。临床上主要采用冠状动脉造影进行确诊，但存在一定的局限性，对患者的创伤较大，检查费用高。因此，寻求一种无创、廉价、方便的检查手段是必要的[7]。有研究显示，动脉粥样硬化的发生和炎症、免疫机制、脂质浸润等因素相关，而miR145能调控血管平滑肌的增殖和迁移，其还能降低血管紧张素转换酶水平，协调血管紧张度，并能通过抑制炎症保护细胞[8]。TREML4来源于髓样细胞触发受体（TREM）家族，其存在类似于免疫球蛋白细胞外结构域，并与衔接分子DAP12相关联。并且已有免疫组织化学技术证明它在冠状动脉斑块巨噬细胞中高表达[6]。目前有关miR145、TREML4在冠心病中鲜有报道。

本文研究发现，研究组患者的miR145明显低于对照组，而TREML4 蛋白的表达水平明显高于对照组。说明miR145在冠心病患者血清中低表达，而TREML4 蛋白高表达，提示miR145和TREML4可能成为评价冠心病严重程度的标记物。miR145低表达主要通过血管平滑肌细胞的增殖和迁移伤害血管，并通过炎症加重冠状动脉硬化，促进冠心病的发生和进展。TREML4的高表达，与其参与介导促炎反应有关，并与感染性刺激炎性细胞因子或其他炎症介质诱导内源反应，促进炎症反应放大过程。但是，国内外不少文献报道miR145在多种肿瘤疾病中表达异常，说明miR145用于冠心病的诊断特异性较低[9]。因此，对冠心病早期的诊断，还需要miR145和TREML4联合检测，才能提高检测的特异性和灵敏度。有学者研究血管平滑肌细胞发现，miR-145可能通过下调LRRFIP1抑制血管平滑肌细胞的增殖和迁移[10]。而Duarte VHR等研究发现，TREML4 mRNA在血液白细胞中的表达和多态性与冠状动脉疾病中动脉粥样硬化病变的延伸相关[11]，这些都为miR145和TREML4成为冠心病早期诊断指标提供依据。

本研究中，Gensini 评分<20分、20-40分、>40分患者的miR145逐渐降低，而患者的TREML4水平呈现上升趋势，提示伴随冠心病患者病情的加重程度，miR145反应越低，TREML4越高，说明miR145和TREML4两者能反应冠心病的严重程度。Pearson相关性分析显示，血清miR-145与冠心病患者Gensini积分呈负相关，而TREML4呈与Gensini积分正相关，而且血清miR-145与TREML4水平呈负相关。同时也提示miR145和TREML4能反应冠心病患者的严重程度，并随着病情发生变化。同时也提示临床上可以通过联合检测miR145和TREML4水平，反应冠心病患者的早期病情，为临床早期治疗提供依据。

总之，冠心病患者miR145低表达，TREML4高表达，两者联合检测能反应冠心病患者的病情的严重程度。但本研究也存在一定的缺点，选取的样本量过少，因此，在后续的研究中，需要不断的增加样本量，以获取准确、可靠的信息。

1 杨璇妹, 陈晓虎, 史海波. 运用“双心同治”理论治疗冠心病[J]. 中国中医急症, 2018, 27(1): 97-100.

2 焦芸静. 心电图与心脏彩超对冠心病的临床诊断价值分析[J]. 河南医学研究, 2018, 27(1): 93-94.

3 王鹏, 严妍, 于文君, 等. 阿托伐他汀与瑞舒伐他汀对冠心病患者的疗效与安全性对比观察[J]. 中国医院药学杂志, 2018, 38(2): 169-172.

4 Wang GK, Zhu JQ, Zhang JT, et al. Circulating microRNA: a novel potential biomarker for early diagnosis of acute myocardial infarction in humans[J]. Eur Heart J, 2010, 31(6): 659-666.

5 仲威. miR-145在动脉粥样硬化发展中的作用[J]. 中国动脉硬化杂志, 2015, 23(5): 522-526.

6 Sen SK, Boelte KC, Barb JJ, et al. Integrative DNA, RNA, and protein evidence connects TREML4 to coronary artery calcification[J]. Am J Hum Genet, 2014, 95(1): 66-76.

7 梁健, 苏欣, 刘红阳, 等. β-受体阻滞剂在新疆地区维吾尔族和汉族冠心病患者中的使用情况及静息心率达标情况研究[J]. 中国全科医学, 2019, 22(02): 44-48.

8 李文婷, 邹伟, 曹琳, 等. miR-145靶向抑制MMP-9表达对大鼠脑动脉血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响[J]. 山东医药, 2017, 57(26): 31-34.

9 徐杨, 赵丽君, 王春. miR-145过表达对宫颈癌细胞辐射敏感性的影响[J]. 中国病理生理杂志, 2018, 34(4): 630-636.

10 黄寰, 陆志锋, 陈晞明, 等. miR-145通过下调LRRFIP1抑制血管平滑肌细胞增殖及迁移机制[J]. 河北医学, 2017, (5): 793-796.

11 Duarte VHR, Miranda CTOF, Cruz MS，et al. TREML4 mRNA expression and polymorphisms in blood leukocytes are associated with atherosclerotic lesion extension in coronary artery disease[J]. Sci Rep, 2019, 9(1): 7229-7234.

Clinical significance of changes of serum miR-145 and TREML4 in patients with coronary heart disease

Cai Xiao-hang*

(Department of Cardiology, The First People's Hospital of Nanyang, Nanyang 437010, Henan)

To investigate the changes of serum miR-145 and TREML4 levels in patients with coronary heart disease and its clinical significance.126 patients with newly diagnosed coronary heart disease were selected as the study group And 50 healthy volunteers served as the control group. Serum miR-145 level was determined by qRT-PCR and TREML4 level was determined by Western blot. According to difference of Gensini scores, serum miR-145 and TREML4 levels were analyzed. Pearson correlation analysis was used to analyze the correlation between serum miR-145 and TREML4 levels with Gensini score.The level of miR-145 in the study group was significantly lower than that in the control group (P<0.05), while TREML4 was significantly higher than the control group (P<0.05). The levels of miR-145 in patients with Gensini scores <20, 20-40, and >40 showed a downward trend, while the level of TREML4 showed an upward tendency. Pearson correlation analysis results showed that serum miR-145 was negatively correlated with the Gensini score in patients with coronary heart disease (P<0.05), while TREML4 was positively correlated with the Gensini score (P<0.05). The serum miR-145 was negatively correlated with TREML4 level (P<0.05).Patients with coronary heart disease have low expression of miR145 and high expression of TREML4. The combined detection can reflect the severity of the condition of patients with coronary heart disease.

Coronary heart disease; miR-145; TREML4; Clinical significance

蔡晓航，女，主治医师，主要从事心血管病研究，Email：cxhangny@163. com。

（2019-7-26）