JAM-A和b1-integrin在食管癌中的表达及临床意义#

甘绍印 王忠民 陈志军 朱德奇李宾赵冬 李云霞 臧丹 尚杰

·临床论著·

JAM-A和b1-integrin在食管癌中的表达及临床意义#

甘绍印*1王忠民△1陈志军1朱德奇1李宾1赵冬2李云霞2臧丹3尚杰3

（1. 新乡医学院第一附属医院胸外科一病区，河南 新乡 453000；2. 新乡医学院第一附属医院呼吸内科二病区，河南 新乡 453000；3. 新乡医学院第一附属医院病理科，河南 新乡 453000）

：探讨JAM-A和b1-integrin在食管癌中表达及其临床意义。选取本院自2012年2月至2013年4月确诊的120例食管癌患者，以免疫组化法检测肿瘤组织及癌旁组织中JAM-A和b1-integrin的表达，进一步随访患者术后无疾病生存期，应用Cox模型多因素分析两种蛋白对食管鳞癌的预后意义。JAM-A和b1-integrin蛋白在食管癌组织中高表达，与癌旁组织对比其表达存在显著性差异（P＜0.05），相关性分析显示：JAM-A蛋白与b1-integrin蛋白表达呈正相关（r=0.476，P＜0.05）。Cox模型风险分析显示JAM-A与b1-integrin蛋白高表达可能提示食管鳞癌预后较差（P＜0.05），且JAM-A是其独立危险因素。JAM-A与b1-integrin的高表达可能与食管癌不良预后存在密切关系。

食管鳞癌；JAM-A；b1-integrin

管管癌是一种全世界范围的消化道恶性肿瘤，尤其在我国河南地区、广州潮汕地区及福建等地为高发区[1]，其患病率及致死率一直在恶性肿瘤中居高。目前治疗食管癌的主要方法包括手术治疗、放化疗。研究表明，即使同一分期的食管癌患者，其临床预后仍存在较大的差异[2]。因此，除了临床病理分期外，我们目前仍急需一些其他指标来评估食管癌预后及放化疗方案。

连接粘附分子A（Junctional adhesion molecule A，JAM-A）作为细胞免疫球蛋白家族中一员，是一种不依赖钙离子的细胞粘附分子[3]，在恶性肿瘤发生、侵袭及转移方面具有重要意义。研究表明，JAM-A通过抑制Akt信号通路降低b-catenin表达，从而抑制肿瘤细胞增殖；同时又可通过调节b1-integrin和GTP Rap1活性促进肿瘤细胞转移。本文拟应用免疫组化方法研究JAM-A与b1-integrin在食管鳞癌中的表达，分析上述蛋白与临床病理分期、术后转移复发的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取我院自2012年2月至2013年4月进行食管癌切除术，经术后病理标本确诊为食管癌的120例临床资料，进行回顾性分析。其中食管鳞癌98例，腺癌22例，男性76例（63.3%），女性44例（36.7%），年龄35~79岁（平均年龄59.35岁），同时选取癌旁组织（距离肿瘤边缘3 cm）作为对照组。术后随访进展105例，无进展15例，无疾病生存期（Disease free survival, DFS）为4.8~61.30 m，中位DFS为30.26 m。

1.2 方法

1.2.1 随访方法

以手术当日为起点，采用电话随访2月1次，截止日期为2018年6月25日。

1.2.2 实验方法

将手术切除标本固定，石蜡包埋后常规切片及并染色。采用鼠抗人JAM-A蛋白单克隆抗体试剂盒（购自北京博尔迈生物技术有限公司），及鼠抗人b1-integrin单克隆抗体（上海艾博生物科技有限公司）。免疫组化步骤：常规抗原修复、封闭，二抗孵育，PBS冲洗3次后显色。设置一抗为阴性对照，已知阳性食管癌组织切片为阳性对照。

1.3 结果判定

JAM-A、b1-integrin均表达于细胞膜，以膜染色呈黄色或棕黄色为阳性表达，采用双盲法由2名病理医师共同评价，评分标准为高倍镜下随机选取5个视野，阳性表达细胞数表达≥50%为阳性表达，≤50%为阴性表达。

1.4 统计方法

采用SPSS20.0统计学软件进行数据分析，其中计数资料以百分数（率）表示，计量资料以均数±标准差表示。两种蛋白表达情况的差异采用X检验；相关性分析采用Sperman检验；蛋白与临床病理特征的关系采用X检验，而其与食管癌术后DFS关系采用多因素Cox回归分析，以上检验采用双侧检验，P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 食管癌中JAM-A和b1-integrin表达情况

120例食管癌组织JAM-A阳性表达74例（61.7%），而癌旁组织阳性表达56例（46.7%），两者差异明显（P＜0.05）。癌组织中b1-integrin阳性表达72例（60%），明显高于癌旁组织阳性表达56例（52.1%）（P＜0.05），见表1和图1。

2.2 食管癌中JAM-A、b1-integrin表达与病理特征的关系

食管癌组织中JAM-A阳性表达在患者性别、年龄、位置等病理特征中无显著差异（P＞0.05），而在浸润程度（T分期）、淋巴结转移（N分期）、临床病理分期（TNM）及肿瘤的分化程度等病理特征中存在显著性差异（P＜0.05）。b1-integrin蛋白的表达与JAM-A存在一致性，其表达与临床特征的关系见表2。

2.3 食管癌中JAM-A、b1-integrin的相关性分析

经Sperman检验，JAM-A蛋白表达同b1-integrin蛋白呈正相关（r=0.0.476，P＜0.05）。

表1 JAM-A和b1-integrin在食管癌及癌旁组织中的表达情况（例，n=120）

图1 JAM-A、b-catenin免疫组化图片（×200）

（注：A. JAM-A阳性示意；B. JAM-A阴性示意图；C.b1-integrin阳性示意图；D.b1-integrin阴性示意图。）

2.4 JAM-A、b1-integrin表达与食管癌预后的关系

应用多因素Cox比例风险模型分析两种蛋白及上述临床病理参数同食管癌预后关系。分析表明，食管癌的浸润深度、淋巴结转移数、细胞分化程度及JAM-A、β1-integrin的表达均与食管的不良预后存在密切关系，而与患者性别、年龄、肿瘤位置无明显相关，见表3。

3 讨论

目前对于食管癌术后预后评价，仍旧以TNM分期及肿瘤标志物为主要参考，需一种能够早期、有效评价食管癌术后预后的方法。JAM在细胞信息传递及细胞紧密连接中有重要意义。JAM-A是连接粘附分子蛋白家族的一员，研究表明，JAM-A对不同肿瘤细胞的增殖、迁移有不同表现，甚至截然相反。例如，Kurose等发现JAM-A的表达水平与子宫内膜癌的侵袭性呈反比[5]。

表2 食管癌组织中JAM-A、b1-integrin表达情况与临床参数的关系

表3 食管癌术后Cox模型多因素分析结果

Gotte等发现乳腺肿瘤细胞的侵袭性与JAM-A的表达水平呈正比例关系[6]。目前关于食管癌中JAM-A的表达水平尚未有明确。本研究结果显示，食管癌中JAM-A表达水平明显高于癌旁组织，进一步的Cox比例风险模型表明，食管癌中JAM-A的的表达水平对其预后存在明显的不良影响。根据Tian等对鼻咽癌预后研究表明，其机制可能是通过Akt信号通路促进上皮细胞间充质化，并可影响一些其他细胞因子表达，从而促进肿瘤细胞的淋巴结转移、肿瘤细胞分化[7]。

b1-整合素（b1-integrin）是跨膜蛋白整合素家族的一员，能够将细胞外力学状态及化学环境变化转导至细胞内，引起细胞骨架改变，导致细胞极性改变或肿瘤细胞迁移。Mandell等研究发现JAM-A突变体中其细胞增殖明显较高，并伴有b1-integrin过表达[8]。进一步研究发现，JAM-A能够通过活化GTP Rap1酶活性来上调b1-integrin表达[9]。因此我们同时检测了食管肿瘤细胞及癌旁组织中b1-integrin表达水平，结果发现癌组织中b1-integrin蛋白表达水平也明显升高，且进一步统计相关性分析二者存在正相关性。在生存分析Cox模型中b1-integrin蛋白同JAM-A一样影响食管癌的预后，因此，食管癌中JAM-A高表达可能通过调高b1-integrin表达存进肿瘤细胞转移。

综上，食管癌组织中JAM-A与b1-integrin蛋白高表达对食管癌的预后有着重要意义，其作用机制可能与上调b1-integrin蛋白表达促进食管癌细胞间充质化相关。

1 左婷婷, 郑荣寿, 曾红梅, 等. 中国食管癌发病状况与趋势分析[J]. 中华肿瘤杂志, 2016, 38(9): 703-708.

2 杨琼. Ⅲ期食管癌根治术后的疗效及复发模式[D]. 2015.

3 Tuncay H, Brinkmann BF, Steinbacher T, et al. JAM-A regulates cortical dynein localization through Cdc42 to control planar spindle orientation during mitosis[J]. Nat Commun, 2015, 6: 8128.

4 Goetsch L, Haeuw JF, Beau-Larvor C, et al. A novel role for junctional adhesion molecule-A in tumor proliferation: Modulation by an anti-JAM-A monoclonal antibody[J]. Int J Cancer, 2013, 132(6): 1463-1474.

5 Kurose M, Kakuki T, Takano K, et al. Junctional adhesion molecule-A in head and neck squamous cell carcinoma [J]. Adv Otorhinolaryngol, 2016, 77(10): 92-97.

6 Gotte M, Mohro C, Koo CY, et al. miR-145-dependent targeting of junctional adhesion molecule A and modulation of fascin expression are asssociated with reduced breast cancer cell motility and invasiveness [J]. Oncogene, 2010, 29(50): 6569-6580.

7 Tian Y, Tian Y, Zhang W, et al. Junctional adhesion molecule-A, an epithelial-mesenchymal transition inducer, corrolates with metastasis and poor prognosis in human nasopharyngeal cancer [J]. Carcinogenesis, 2015, 36(1): 41-48.

8 Mandell KJ, Brian AB, Nusrat A. Junctional adhesion molecule 1 regulates epithelial cell morphology through effects onb1-integrin and Rap 1 activity[J]. Biol Chem, 2005, 280(12): 11665-11674.

9 Streuli CH, Akhtar N. Signal cooperation between integrins and other receptor systems[J]. Biochem, 2009, 418(3): 491-506.

Expression and significance of JAM-A,b1-integrin in esophageal squamous cell carcinoma#

Gan Shao-yin*1, Wang Zhong-min△1, Chen Zhi-jun1, Cao Ke-xin1, Li Bin1, Zhao Dong2, Li Yun-xia2, Zang Dan3, Shang Jie3

(1. Department of Thoracic Surgery, The First Affiliated Hospital of Xinxiang Medical College, Xinxiang 453000, Henan; 2. Department of Respiratory Medicine, The First Affiliated Hospital of Xinxiang Medical College, Xinxiang 453000, Henan; 3. Department of Pathology, The First Affiliated Hospital of Xinxiang Medical College, Xinxiang 453000, Henan)

To investigate the expression and clinical significance of JAM-A andb1-integrin in esophageal squamous cell carcinoma (ESCC).A total of 120 patients with ESCC diagnosed from February 2012 to April 2013 were enrolled in this study. The expression of JAM-A andb1-integrin in tumor tissues and adjacent tissues was detected by immunohistochemistry. The prognostic significance of the two proteins for ESCC was analyzed by the Cox model.The expression of JAM-A andb1-integrin proteins were significantly higher in tumor tissues than that in adjacent tissues (P<0.05). The expression of JAM-A protein was positively correlated with the expression ofb1-integrin protein (r=0.476, P< 0.05). Risk analysis of Cox model showed that high expression of JAM-A andb1-integrin protein may indicate poor prognosis of ESCC (P<0.05). JAM-A was an independent risk factor of ESCC.The high expression of JAM-A andb1-integrin may be closely related to the poor prognosis of ESCC.

Esophageal squamous cell carcinoma; JAM-A;b1-integrin

The promise and challenge of therapeutic genome editing

Doudna JA

Genome editing, which involves the precise manipulation of cellular DNA sequences to alter cell fates and organism traits, has the potential to both improve our understanding of human genetics and cure genetic disease. Here I discuss the scientific, technical and ethical aspects of using CRISPR (clustered regularly interspaced short palindromic repeats) technology for therapeutic applications in humans, focusing on specific examples that highlight both opportunities and challenges. Genome editing is-or will soon be-in the clinic for several diseases, with more applications under development. The rapid pace of the field demands active efforts to ensure that this breakthrough technology is used responsibly to treat, cure and prevent genetic disease.

(From Nature, 2020, 578(7794): 229-236.)

（2019-8-20）

河南省医学科技攻关计划联合共建项目（编号：2018020366）

甘绍印，男，主治医师，主要从事食管癌及肺癌基础研究，Email：635416612@qq. com；

王忠民, ，男，主任医师，主要从事胸心外科临床及基础研究，Email：shenyuane94@163. com。