DC-CIK生物免疫疗法用于甲状腺癌术后的疗效及对患者IL-16、TNF水平的影响

靳明伟 徐在革

甲状腺癌属于一种甲状腺恶性肿瘤，在临床极为常见，近年来，其发病率日益提升。早期甲状腺癌患者具有良好的预后，但是晚期甲状腺癌患者具有较高的恶性程度、较差的预后[1-2]。本研究对DC-CIK生物免疫疗法对甲状腺癌患者术后IL-16、TNF水平影响及临床疗效进行了研究。

1 资料与方法

1.1 一般资料

随机选取2018年1月至2019年3月我院甲状腺癌患者60例，随机分为2组。化疗组(30例)采用CMF化疗方案辅助治疗，DC-CIK生物免疫疗法组(30例)在CMF化疗方案辅助治疗基础上进行DC-CIK生物免疫治疗。DC-CIK生物免疫疗法组患者中男性9例，女性21例，年龄24～56岁，平均(38.5±6.6)岁；病程3～18个月，平均(8.3±1.6)个月；在病理类型方面，20例为乳头癌，10例为滤泡癌；在TNM分期方面，10例为Ⅰ期，14例为Ⅱ期，6例为Ⅲ期；在肿瘤部位方面，14例为单侧，16例为双侧。CMF化疗方案辅助治疗组患者中男性8例，女性22例，年龄25～56岁，平均(39.3±6.8)岁；病程4～18个月，平均(8.8±1.8)个月；在病理类型方面，19例为乳头癌，11例为滤泡癌；在TNM分期方面，11例为Ⅰ期，12例为Ⅱ期，7例为Ⅲ期；在肿瘤部位方面，13例为单侧，17例为双侧。2组患者的一般资料比较差异均不显著(P>0.05)，见表1。

表1 2组患者的一般资料比较

1.2 纳入和排除标准

纳入标准：①均经CT、病理组织学检查确诊为甲状腺癌；②均接受甲状腺肿瘤切除手术治疗；③均有手术治疗指征。排除标准：①无法耐受手术；②预计生存期在半年以内；③有远处病灶转移。

1.3 方法

1.3.1 CMF化疗方案辅助治疗组 患者接受甲状腺肿瘤切除手术后CMF化疗方案辅助治疗，第1、8天给予患者静脉注射50 mg/m2环磷酰胺，6 h后给予患者静脉注射50 mg/m2甲氨蝶呤+500 mg/m2氟尿嘧啶，每7～10天1次，2～3次为1个疗程，4周为1个周期，共治疗6个周期。

1.3.2 DC-CIK生物免疫疗法组 患者接受甲状腺肿瘤切除手术后CMF化疗方案辅助治疗基础上进行DC-CIK生物免疫治疗。免疫治疗方法：将CD细胞制备出来，即将患者的静脉血抽取出来，采用离心机将单核细胞分离出来，应用Ficoll淋巴细胞分离液洗涤并分离淋巴细胞，应用BIN无血清培养基将细胞分离液制备出来，在恒温箱中放置，进行2 h的孵育。将细胞液移取后将500 U/l白介素4(IL-4)、1 000 U/l GM-CSF加入，继续进行2～3 d的培养，将培养液更换1次，第6天将500 U/ml肿瘤坏死因子α(TNF-α)加入。将淋巴细胞分离出来后，将1 000 U/l重组人干扰素(IFN-γ)、含10% AB型血清PMI-1640培养液加入，进行1 d的孵育后更换培养液为含IL-1、IL-2的RPMI-1640培养液、含1 000 ng/ml的小鼠抗人CD3单克隆抗体，进行2 d的培养后更换培养液为含IL-2的完全培养液，培养到1周后按1∶5比例混合DC、CIK细胞，将DC-CIK细胞悬浮液制备出来，然后向体内回输DC-CIK细胞，浓度为5×10个/l，4次为1个疗程，共治疗3～8个疗程。

1.4 疗效评定标准

依据世界卫生组织(WHO)肿瘤化疗疗效评价标准，分为完全缓解、部分缓解、疾病稳定、疾病进展，总缓解=完全缓解+部分缓解[3]。

1.5 观察指标

治疗前后分别将2组患者的5 ml清晨空腹静脉血抽取出来，将肝素钠加入其中抗凝，进行10 min的离心，将速率设定为3 000 r/min，将悬浮液留取出来。将淋巴细胞分离液加入，运用密度梯度离心法分离单核细胞，采用RPM-1640调整细胞浓度为2×106/ml，将鼠抗人CD4单抗、鼠抗人CD25单抗分别加入，在4 ℃的温度下进行20 min的避光放置。室温下用固定液进行15 min处理，离心将沉淀物留取下来，用磷酸盐缓冲液(PBS)进行2次洗涤，进行细胞浆染色，然后采用流式细胞仪(Beckm Epics，美国贝克曼公司)测定其CD4+Th17、Th17/Treg、CD4+CD25+Treg等免疫功能指标。同时，将2组患者的5 ml空腹静脉血抽取出来，进行20 min的离心，速率为3 000 r/min，将血浆留取出来，在-20 ℃温度下放置保存待测。应用上海书吉生物科技有限公司生产的VEGF试剂盒、上海一研生物科技有限公司生产的TNF-α试剂盒、上海酶联生物技术有限公司生产的IL-1试剂盒、上海开放生物科技有限公司生产的IL-6试剂盒，运用酶联免疫吸附法(ELISA)对其血清血管内皮生长因子(VEGF)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-1、IL-6水平进行测定。

1.6 统计学分析

2 结果

2.1 2组患者的临床疗效比较

DC-CIK生物免疫疗法组患者的总缓解率为86.7%(26/30)，显著高于CMF化疗方案辅助治疗组的60.0%(18/30)，差异有统计学意义(χ2=13.34，P<0.05)。见表2。

表2 2组患者的临床疗效比较(例，%)

2.2 2组患者治疗前后的T细胞水平变化情况比较

2组患者治疗后的CD4+Th17均显著低于治疗前(P<0.05)，Th17/Treg、CD4+CD25+Treg均显著高于治疗前(P<0.05)。治疗前2组患者的CD4+Th17、Th17/Treg、CD4+CD25+Treg之间的差异均不显著(P>0.05)，治疗后DC-CIK生物免疫疗法组患者的CD4+Th17均显著低于CMF化疗方案辅助治疗组(P<0.05)，Th17/Treg、CD4+CD25+Treg均显著高于CMF化疗方案辅助治疗组(P<0.05)。见表3。

表3 2组患者治疗前后的T细胞水平变化情况比较

2.3 2组患者治疗前后的血清VEGF、TNF-α、IL-1、IL-6水平变化情况比较

2组患者治疗后的血清VEGF、TNF-α、IL-1、IL-6水平均显著低于治疗前(P<0.05)。治疗前2组患者的血清VEGF、TNF-α、IL-1、IL-6水平之间的差异均不显著(P>0.05)，治疗后DC-CIK生物免疫疗法组患者的血清VEGF、TNF-α、IL-1、IL-6水平均显著低于CMF化疗方案辅助治疗组(P<0.05)。见表4。

表4 2组患者治疗前后的血清VEGF、TNF-α、IL-1、IL-6水平变化情况比较

3 讨论

相关医学研究表明[4-7]，甲状腺癌发病的诱发因素主要为机体免疫功能降低，特别是细胞免疫功能降低。VEGF属于血管内皮细胞特异性肝素结合生长因子，甲状腺癌细胞转移、侵袭均和其水平关系密切。在早期甲状腺癌的治疗中，外科手术是临床采用的最有效治疗方法，但是围手术期创伤会对机体免疫功能造成破坏，使机体释放炎症因子，促进机体炎症反应的加重，进而对患者预后造成不良影响。近年来，在肿瘤的治疗中，树突状细胞-细胞因子诱导杀伤细胞(DC-CIK)生物免疫疗法在飞速发展的细胞生物学、免疫分子学等作用下已经成为临床通常采用的辅助手段[8-11]。相关医学研究表明[12-15]，DC-CIK生物免疫疗法能够对甲状腺癌患者术后免疫功能进行有效改善，促进患者炎症因子的降低、治疗效果的提升。本研究结果表明，DC-CIK生物免疫疗法组患者的总缓解率显著高于CMF化疗方案辅助治疗组，CD4+Th17均显著低于CMF化疗方案辅助治疗组，Th17/Treg、CD4+CD25+Treg均显著高于CMF化疗方案辅助治疗组，血清VEGF、TNF-α、IL-1、IL-6水平均显著低于CMF化疗方案辅助治疗组，和上述相关医学研究结果一致。

总之，DC-CIK生物免疫疗法能够有效降低甲状腺癌患者术后IL-16、TNF水平，提升临床疗效，值得推广。