PTPN22基因多态性与江苏淮安地区汉族人群系统性红斑狼疮易感性的相关性

邢飞, 周瑾△, 姜玉新, 金跃

1徐州医科大学附属淮安医院检验科(江苏淮安 223000)； 2皖南医学院生理教研室(安徽芜湖 241002)

系统性红斑狼疮(SLE)是一种系统性自身免疫性疾病，临床受累可影响人体多个器官或系统，尤其是骨骼肌、肾脏、心脏、皮肤和中枢神经系统(CNS)[1-2]。SLE好发于女性，男女比例为1∶10[3]。SLE具有复杂而强大的遗传基础，分子遗传学在研究人类和动物时确定了SLE发病机制的重要基因。与患病密切相关的基因是人类白细胞抗原(HLA)等位基因，如DR3、DR4，其次是非HLA样蛋白酪氨酸磷酸酶非受体22型(PTPN22)信号转导，转录激活因子4(STAT4)和干扰素调节因子5。在非HLA基因中，PTPN22被认为是自身免疫性疾病中最有效的基因[4-5]。近些年国外研究提示该基因多态性与1型糖尿病、类风湿关节炎和SLE等自身免疫疾病发生有关，且存在种族差异[6-7]。本研究主要探讨蛋白酪氨酸磷酸酶非受体型22(PTPN22)基因rs1310182、rs2488457、 rs33996649位点多态性是否与江苏淮安地区汉族人群SLE遗传易感性有关。

1 资料与方法

1.1 一般资料 231例SLE患者均来自2018年1月至2019年6月徐州医科大学附属淮安医院门诊和住院患者，为淮安市常住(≥10年)人口，年龄13～75岁，平均(41.91±13.74)岁。所有患者均符合美国风湿病学院 1997年修订的 SLE 诊断标准；正常对照组 202例，均为我院体检中心各项指标正常的人群，年龄13～73岁，平均(35.48±11.27)岁。一般特征见表1。以上所有研究对象均签有知情同意书。

1.2 研究方法

1.2.1 样本采集及DNA提取 采集受检者外周静脉血2 mL，用人类基因组提取试剂盒(生工生物工程(上海)股份有限公司)提取基因组DNA，限制性内切酶、引物(根据NCBI数据库设计引物)见表2，以上均由上海生工股份有限公司负责合成。

表1 两组人口统计学特征 例

表2 PTPN22基因引物序列

1.2.2 PCR扩增 反应体系50 μL；模版3 μL，引物1 μL，dNTP 1 μL，10×Buffer 5 μL，Tap酶0.5 μL，双蒸水34.5 μL，MgCI24 μL；反应条件：95℃预变性5 min，95℃变性40 s，56℃退火30 s，72℃延伸40 s，35个循环，最后 72℃ 延伸 5 min。取5 μL PCR产物进行2%琼脂糖凝胶电泳，电压100 V，电泳25 min，在SyngeneG：BOX荧光凝胶成像系统下分析。

2 结果

2.1 Hardy-Weinberg平衡检测 病例组和对照组进行Hardy-Weinberg平衡检测显示样本均符合Hardy-Weinberg遗传规律(表3)，说明本研究样本可进行后续分析。

2.2 基因型频率和等位基因频率比较 对rs1310182、rs2488457、 rs33996649位点基因型、等位基因频率进行比较显示， rs1310182基因位点CT、TT型及CT+TT差异无统计学意义(P>0.05)，OR值(95%CI)分别为0.757(0.462～1.240)、1.192(0.690～2.059)及0.894(0.260～1.425)。等位基因T亦无统计学意义，OR值(95%CI)为1.124(0.860～1.470)；对rs2488457位点基因型、等位基因频率进行比较，CC、GC+CC型差异有统计学意义(P<0.05)，OR值(95%CI)为2.921(1.534～5.562)、2.145(1.160～3.967)，等位基因C亦有统计学意义，OR值(95%CI)为1.859(1.389～2.487)；rs33996649基因位点GA、AA型及GA+AA差异无统计学意义(P>0.05)，OR值(95%CI)分别0.837(0.417～1.682)、0.511(0.253～1.031)、0.861(0.338～1.292)，而等位基因A有统计学意义，OR值(95%CI)为0.692(0.519～0.922)。见表4～5。

表3 Hardy-Weinberg平衡检测结果 例

表4 PTPN22各基因位点不同基因型对SLE相对危险度 例

表5 PTPN22各基因位点等位基因频率分布 例

3 讨论

PTPN22位于1号染色体短臂(lp13.3-13.1)，包含16个外显子和15个内含子，编码淋巴特异性蛋白酪氨酸磷酸酶(LYP)，属于酪氨酸磷酸酶家族(PTPs)。LYP是造血细胞特异性蛋白酪氨酸酶，主要表达在成熟或未成熟的T、B淋巴细胞，抑制上述细胞对抗原的免疫应答[8]，最近，研究表明[9]LYP蛋白是几种自身免疫性疾病的重要遗传基因座，包括SLE。该蛋白通过与多种衔接分子结合而影响T细胞活化，包括c-src酪氨酸激酶(Csk)、Grb2和c-Cbl[10]。该基因已被鉴定为各种自身免疫性疾病易感基因，如格雷夫斯病、类风湿病关节炎、1型糖尿病和系统性红斑狼疮(SLE)[6-7,11]。

在国外，Taniyama等[12]于2010年对日本人群进行了一项研究，证明rs1310182与T1D患者呈正相关。那些不含rs1310182风险等位基因的人受到保护。而对于PTPN22基因多态性与系统性红斑狼疮的关系，近年来，国内外主要是针对1858C/T位点研究较多，Kyogoku等[7]发现PTPN22SNP与SLE之间呈剂量依赖效应，在北美SLE患者中纯合子T/T的相对危险度是杂合子T/C的2倍[OR=4.37，95%CI(1.98～9.65)]，后者危险度较之纯合子C/C也有所增高[OR=1.37，95%CI(1.07～1.75)]。有学者[13]分别对家族性及散发的SLE患者研究发现，PTPN22 单核苷酸多态性在家族性SLE中比散发的SLE者更有意义，故可作为遗传标志在SLE中发挥重要作用，这说明PTPN22基因可作为自身免疫性疾病的一个易感基因。Bahrami等[14]认为PTPN22 rs1310182 A等位基因和rs1310182 AA基因型与儿童SLE可能有关。Ferreira等[15]研究发现SLE患者PTPN22等位基因(rs2476601C>T)对Treg频率的影响。Al-Awadhi等[16]研究报道PTPN22基因功能变体R620W的频率与其他世界人群相比最高的。与健康对照相比，这种变异在SLE患者中的患病率较高，表明其在赋予SLE易感性。de Lima等[17]研究发现PTPN221858 C>T多态性的T等位基因和T/T基因型赋予SLE易感性，特别是在白种人和拉丁裔人群中，提示PTPN221858 C>T是SLE易感性的潜在遗传标记。在国内程艳丽等[18]研究发现PTPN22基因的2个位点-1858C/T和-1123G/C与湖北地区汉族人群 SLE的发病无相关性。本研究发现，PTPN22基因位点rs2488457(-1123G/C)基因型CC/GC+GG、等位基因C均与对照组差异有统计学意义(P<0.05)。这点与冯雪等[19]研究结果一致，说明位点rs2488457与淮安汉族人群SLE发病可能相关。同时我们研究还证实rs33996649位点基因型多态性与汉族人群SLE发生并无相关性，而其A等位基因与淮安地区汉族人群SLE发生可能有关。而在国外，López-Cano等[20]研究发现其位点多态性与墨西哥人SLE发生有相关性。López-Mejías等[21]研究PTPN22基因多态性与过敏性紫癜相关性可能时发现其rs33996649位点并与此疾病无关联。而国内Wang等[22]研究发现PTPN22基因rs33996649的A等位基因与增加甲状旁腺功能亢进风险有关。肖海等[23]研究发现PTPN22基rs33996649多态性与河南汉族肺结核发生无关；rs2488457的G/G基因型与河南汉族肺结核易感性有一定关系。李倩等[24]证实了在云南人群中PADI4基因的rs2240340多态性与类风湿关节炎的易感性存在相关性。Shi等[25]在荟萃分析中发现PTPN22基因的1858C/T多态性与系统性红斑狼疮易感性相关，但要确定因果关系，需要从中国人口中抽取大量样本进行前瞻性研究。

本试验通过对PTPN22基因位点rs1310182、rs2488457、 rs33996649多态性研究发现，PTPN22基因位点rs2488457(-1123G/C)基因型CC/GC+GG、等位基因C均与对照组差异有统计学意义(P<0.05)。说明位点rs2488457与淮安汉族人群SLE发病可能相关。rs33996649位点A等位基因与淮安地区汉族人群SLE发生可能有关。而rs1310182位点和等位基因多态性，rs33996649位点基因型多态性与淮安汉族人群SLE发生并无相关性。

本研究同样存在一定不足：(1)选取标本量有限可能存在一定误差；(2)目前研究基因多态性方法学较多不能尽可能全部选用。

综上所述，不同地区，不同种族其单核苷酸多态性与同一疾病相关性存在差异，分析原因可能有：(1)地域的差异；(2)种族的不同；(3)遗传因素的不同等。今后可能选取更大样本量，多种族，多人群开展研究，更加详细的阐明基因多态性与SLE发生、发展过程。