南京地区儿童肺炎支原体感染现状分析及检测方法学比较

高 磊,高 岭

1.南京市红十字医院检验科,江苏南京 210001；2.南京医科大学附属儿童医院检验科，江苏南京 210008

肺炎支原体(MP)是社区获得性肺炎的常见病原体[1]。儿童感染MP后的病程长且病情易反复，严重影响患儿的生活质量。肺炎支原体肺炎的临床症状与其他肺炎相比无特异性，导致漏诊、误诊的发生率高，易使患儿错失最佳治疗时机，影响预后，所以儿童MP感染的早期病原学诊断变得尤为重要。本研究对MP抗体早期检测的3种方法(凝集法、酶联免疫法、化学发光法)进行了比较，并分析了南京地区儿童MP感染现状，旨在为临床早期合理治疗提供有力依据。

1 资料与方法

1.1一般资料 回顾性分析2018年1-12月于南京医科大学附属儿童医院就诊的26 230例行MP抗体检测的急性呼吸道感染患儿的临床资料。所有患儿均符合《诸福堂实用儿科学》[2]中急性呼吸道感染的诊断标准；其中男14 745例，女11 485例，年龄1～14岁。根据MP抗体检测方法的不同分为凝集组(7 635例，采用凝集法)、酶免组(7 725例，采用酶联免疫法)和发光组(10 870例，采用化学发光法)。其中636例患儿同时采用了凝集法检测MP抗体及化学发光法检测IgM、IgG抗体，这部分患儿纳入发光组。

1.2方法 采集受试者静脉血2 mL,分离出血清。凝集法：采用富士瑞必欧株式会社生产的MP抗体检测试剂盒，以效价 > 1∶40 为阳性，≤1∶40 为阴性。酶联免疫法：采用深圳亚辉龙生物科技有限公司生产的IgM抗体检测试剂盒(酶联免疫法)，以COI<0.9为抗体阴性，COI在0.9～<1.1时为抗体弱阳性，COI≥1.1为抗体强阳性。化学发光法检测IgM抗体：采用深圳亚辉龙生物科技有限公司生产的IgM抗体检测试剂盒(化学发光法)，以COI<0.9为抗体阴性，COI在0.9～<1.1时为抗体弱阳性，COI≥1.1为抗体强阳性。化学发光法检测IgG抗体：采用深圳亚辉龙生物科技有限公司生产的IgG抗体检测试剂盒(化学发光法)，<24 AU/mL为抗体阴性，24～<36 AU/mL为抗体弱阳性，≥36 AU/mL为抗体强阳性。所有操作均严格遵循操作说明书进行。凝集法与化学发光法检测结果的阳性符合率：凝集法检测结果为阳性的例数中，化学发光法检测结果也为阳性的例数所占比例；阴性符合率：凝集法检测结果为阴性的例数中，化学发光法检测结果也为阴性的例数所占比例；总符合率=两种方法检测结果一致的例数/总检测例数×100%。

1.3统计学处理 采用SPSS24.0统计软件进行数据分析。计数资料以例数或百分率表示，组间比较采用χ2检验。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.13组MP抗体阳性率比较 3组MP抗体检测的总阳性率为46.32%(12 151/26 230)；凝集组、酶免组、发光组的阳性率分别为53.63%、45.10%、42.06%，差异有统计学意义(P<0.05)。凝集组MP抗体阳性4 095例，阴性3 540例，阳性结果中，滴度>1∶160(684例)、1∶160(506例)所占比例分别为8.96%、6.63%，滴度1∶80(1 232例)、1∶40(1 673例)所占比例分别为16.13%、21.91%；酶免组MP抗体阳性结果中，强阳性占31.13%；发光组MP抗体阳性结果中，强阳性占35.14%。见表1。

2.2不同年龄、性别患儿MP抗体阳性率比较 14 745例男性患儿中，MP抗体阳性率为41.50%(6 119/14 745)，低于11 485例女性患儿的MP抗体阳性率(52.52%)。在26 230例检测MP抗体的患儿中，≥6岁的患儿MP抗体阳性率(55.21%)最高；0～<2岁患儿MP抗体阳性率(37.47%)最低，明显低于其他各年龄组(P<0.05)。凝集组中，年龄≥6岁患儿MP抗体阳性率(67.60%)最高，与其他各年龄组比较，差异均有统计学意义(P<0.05)；酶免组中，年龄≥6岁患儿MP抗体阳性率(59.30%)最高，与其他各年龄组比较，差异均有统计学意义(P<0.05)；发光组中，0～<2岁患儿MP抗体阳性率(45.65%)最高，与其他各年龄组比较，差异均有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表1 酶免组与发光组MP抗体阳性率比较[n(%)]

表2 3组不同年龄段患儿MP抗体阳性率比较[n/n(%)]

注：与0～<2岁组比较，*P<0.05；与2～<4岁组比较，#P<0.05；与4～<6岁组比较，△P<0.05。

2.32018年不同月份MP抗体阳性率比较 2018年1月的MP抗体阳性率最高，为51.44%；10月阳性率最低，为38.10%；抗体阳性例数最高出现在12月，为1 441例。见图1。

图1 2018年不同月份MP抗体阳性率比较

2.4凝集法与化学发光法检测MP抗体分型结果比较 636例患儿同时采用凝集法检测MP抗体，化学发光法检测IgM、IgG抗体。凝集法检测结果为MP抗体阴性的112例患儿中，化学发光法检测出单独IgM阳性、单独IgG阳性分别为22例和8例；在凝集法检测抗体滴度为1∶40、1∶80的结果中，化学发光法检测出的IgM、IgG抗体双阴性例数分别为 42例、9例。凝集法检测MP抗体滴度为1∶160、>1∶160的结果中，化学发光法检测为IgM、IgG双阳性结果占80.00%(248/310)，IgG单独阳性结果占12.90%(40/310)。两种方法检测结果的阳性符合率为90.27%(473/524)，阴性符合率为73.21%(82/112)，总符合率为87.26%(555/636)。见表3。

表3 凝集法与化学发光法检测MP抗体分型结果比较(n)

3 讨 论

MP是儿童急性呼吸道感染的重要病原体，主要经飞沫和直接接触传播，潜伏期l～3周，潜伏期内至症状缓解数周后均具有传染性[3]。诊断MP感染除临床症状外，实验室检查是确诊的重要依据，血清学检测MP抗体具有快速、敏感、特异性高等特点，是我国目前诊断MP感染的主要方法。

本研究中26 230例南京地区儿童MP抗体总阳性率为46.32%，与王晓卫等[4]研究的2008-2010年南京地区MP抗体阳性率(41.35%)相比有所上升，这可能与本研究检测例数大幅增加相关。此外，由于样本量及检测方法的限制，本研究仅为免疫学的检测结果而并非病原学确诊指标。3种方法中，凝集法检测的阳性率明显高于酶联免疫法及化学发光法，考虑与凝集法检测的抗体是总抗体(包括IgM、IgG、IgA抗体)，而酶联免疫法、化学发光法检测的抗体仅为IgM抗体有关；化学发光法检测的弱阳性率明显低于酶联免疫法，这是因为化学发光检测技术用于MP抗体检测时，抗原包被在磁微粒表面，抗原表位得到充分地暴露，能更加有效区分阴阳性，从而增加项目检测的特异性，大大减小了可疑区间。

MP感染可发生于婴幼儿甚至新生儿，但感染的高峰人群为学龄前和学龄期儿童[5]。本研究显示，6岁及以上患儿MP抗体阳性率最高，为55.21%，0～<2岁患儿抗体阳性率最低，为37.47%，这可能与婴幼儿免疫系统尚未发育完全，导致感染时体内产生的特异性抗体效价较低，检测不出相关；也有可能是由于婴幼儿尚未入学，感染机会较少。男性患儿MP抗体阳性率明显低于女性患儿，这可能与男性患儿检测基数大有关，但目前由性别引起的MP抗体检测阳性率差异的相关机制尚不明确，有待进一步研究。

不同国家和地区、不同年份和季节、不同年龄和性别、不同检测方法和试剂，乃至不同判定标准等均可影响MP检测的阳性率。南京地区1月MP抗体的阳性率最高，12月MP抗体阳性例数最高，因此判断南京地区儿童MP抗体阳性率的高峰出现在冬季；8月MP抗体阳性率出现第2个高峰，这与2015年版专家共识[6]提出的南方地区夏、秋季节为MP感染的高发季节不同，考虑可能与南京地处南北交界地带，气候及温度与其他南方地区有一定的差异相关；另外MP感染率、发病率、患病率及MP阳性检出率等是不同的流行病学概念[5]，这可能也是导致各类研究结果存在差异的原因之一。

大量研究表明，MP感染后IgM抗体水平在2～3周达高峰，2～4个月逐渐消失，但部分甚至可以在第3个月时仍处于较高水平[7-8]。根据抗体亚型产生的时间规律及半衰期差异，抗体亚型的检测结果可提示疾病进程。一般情况下，血清中IgM抗体阳性提示早期感染；只有IgG抗体阳性时提示既往感染；IgM、IgG抗体同时存在提示现症感染[9]。凝集法与化学发光法检测结果的总符合率为87.26%，凝集法检测MP抗体滴度为 >1∶160、1∶160时，化学发光法测得IgG单独阳性率为12.90%(40/310)，这表明当以单次MP抗体滴度≥1∶160作为诊断MP近期感染或急性感染的参考时，仍存在12.90%的假阳性结果。在通过血清学抗体判断现症感染时，需要同时检测IgM、IgG抗体以增加检测结果的准确性。

综上所述，本研究通过对南京地区儿童MP抗体阳性率及感染特征的研究，为临床提供了重要的流行病学资料，为临床经验用药、早期诊断和治疗提供了一定的数据支持。凝集法、酶联免疫法、化学发光法3种方法检测MP抗体的比较也为临床以及实验室检测方法的选择提供了参考。