血液筛查实验室核酸检测试剂利用率探讨

张卓新

焦作市中心血站，河南焦作 545000

核酸检测（NAT）技术对献血者血液标本进行筛查，是提高血液安全性的重要举措。NAT 是使用物理、化学和生物学的方法，通过靶核酸扩增的方法，将极微量的核酸转变成直观的光电或可视信号，从而判断是否存在病原体[1]。该方法敏感度极高，可检测出极微量的核酸，大大缩短了“窗口期”，是血清学检验的一项必不可少的补充性检测方法。但由于核酸检测试剂较为昂贵，提高了血液检测的成本，为血站正常运营增加了较大压力，因此，只有科学合理地运用才能降低试剂的损耗，提高试剂利用率，降低检测成本[2]。如何对实验室进行质量监控，减少试剂的损耗，也是目前亟待解决的问题。

该站作为河南省无偿献血者核酸集中化检测单位之一，承担了济源血站无偿献血者核酸标本的检测，目前配置了浩源和华益美两个厂家的核酸检测系统，现就二者的试剂使用情况进行分析，对2018 年1 月—2019 年7 月焦作和济源地区共104 981 份无偿献血者血液核酸标本进行研究，报道如下。

1 材料与方法

1.1 标本来源

该站检测焦作和济源地区无偿献血者血液核酸标本共104 981 份，除了室间质评标本、部分单采血小板、环境监测、追踪等标本进行单检检测，其余标本均采用8 混样检测，其中用浩源系统检测65 739 份，用华益美系统检测39 242 份。核酸标本采用无菌带分离胶抗凝（EDTA-K2）核酸检测专用真空试管，留取5 mL 全血标本供核酸检测。

1.2 试剂

HBV-DNA、HCV RNA、HIV-1RNA 核酸检测试剂盒（PCR 荧光法）（上海浩源生物科技有限公司）、HBV-DNA、HCV-RNA、HIV-（1+2 型）RNA 核酸检测试剂盒（苏州华益美生物科技有限公司），两家核酸试剂均有生产厂家提供的出厂质量检验报告合格证明试剂，均在有效期内使用。所有检测操作严格参照仪器以及试剂盒说明书进行。

1.3 主要仪器

ChiTaS BSS1200 全自动核酸纯化仪，Ampli STAR STD 全自动核酸提取纯化仪，ABI7500 实时荧光定量PCR 系统，TDL5B 台式大容量低温离心机，生物安全柜BSC-1500ⅡB2-X，生物安全柜HR40-ⅡA2，全自动加盖机APS-C，全自动开盖机KG-12L 等。

1.4 方法

统计 2018 年 1 月—2019 年7 月份浩源与华益美核酸试剂各自检测人份数、试剂使用量，将各自的实际检测人份数与理论检测人份数对比，可得出试剂利用率，分析两套核酸检测试剂的使用情况。

1.5 统计方法

采用SPSS 18.0 统计学软件分析数据，计量资料用（±s）表示，采用 t 检验；计数资料用百分比（%）表示，采用 χ2检验，P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 2018 年1 月—2019 年7 月浩源及华益美核酸试剂检测人份数、试剂使用量、试剂利用率

两家试剂的利用率大致相近，差异无统计学意义（P＞0.05），见表1。

表1 2018 年1 月—2019 年7 月浩源及华益美核酸试剂检测情况

2.2 2018 年1 月—2019 年7 月室间质评、单采血小板、环境监测、追踪的单检用量及占总用量百分比

室间质评、单采血小板、环境监测、追踪等标本直接单检，所占试剂用量百分比较低，见表2。

表2 2018 年1 月—2019 年7 月两家试剂用量及占总用量百分比

3 讨论

传统血液筛查方法有一定弊端，因传统ELISA 方法不仅具有较长窗口期，同时灵敏度较低，且很大一部分是单试剂不合格，尤其是在HbsAg 与抗-HIV2 项不合格结果中，造成了血液安全性低与报废率增加的不良结果[3]。欧美等发达国家与地区已经将核酸检测当作常规的血液筛查，因其灵敏度和特异度均较高，血传播疾病的传播率大大降低。国内有关文献也报道，通过NAT 检测能缩短窗口期，进而降低HBV、HIV 以及HCV 传播风险，提升血液安全性[4]。而自动化NAT 系统其试剂价格较高，如何在确保检测质量的前提下降低检测成本，提高试剂的利用率，是目前相关研究人员较为关注的问题。我国依据有关规定逐渐开展了核酸检测，但受资金和人员等因素影响，暂未纳入常规筛查方法，只有部分国内血站开始试点核酸筛查法，以进一步降低输血风险。只有科学利用试剂，节约成本，提升检测的利用率，才能确保核酸检测更好地开展[5-6]。另外，由于NAT 检测对试剂的存放条件和时间均有较高的要求，因此掌握试剂未能完全使用的原因，并提出相对的对策，在提高试剂利用率方面具有重要意义。

由表1 可以看出，两家试剂的试剂利用率大致相近（P＞0.05），表2 显示，室间质评、单采血小板、环境监测、追踪等标本直接单检，所占试剂用量百分比较低，除这些单检造成的试剂用量之外，影响两家试剂利用率的共同原因，分析主要有以下几个方面：①实验过程中，实验人员的操作不够严谨，如摆放耗材时观察不细致，或耗材碰触到污染区域，造成耗材的污染；手和胳膊从已开封的试剂上方经过，易污染试剂，导致混检阳性率增高，拆分频次及数量增加，试剂利用率下降。②实验结束后的消毒灭菌工作不够细致，消毒剂的配制偏少，对仪器表面、实验室台面、地面的擦拭消毒不够彻底，75%酒精喷淋不够密集，对空气中的气溶胶沉降效果差，造成气溶胶的扩散、残留、集聚，导致随后的实验混检阳性率增高，从而造成试剂的浪费[7-8]。③设备仪器出现故障，造成试剂损耗量增加。

就浩源试剂单独来讲，影响试剂利用率的还有一个特殊的因素，就是浩源试剂已预分装好，一盒试剂6 条，48 个测试，1 条8 个 POOL，实际工作中，很难做到每次标本检测量恰好整条，为了保证血液标本的检测报告及时发布，不可避免地会浪费几个POOL 的试剂，导致试剂利用率下降。

华益美试剂是根据标本检测量临用前配制的，从理论上来讲试剂有效使用率应该会高，但实际工作中发现试剂有效使用率并不是十分理想，分析原因可能为：①为了节约试剂，实验后剩余的试剂是要回收的，试剂存在被污染的风险；②华益美检测设备的加样、磁珠的搅拌混匀、核酸模板提取以及反应液的添加都在同一区域中，节省了空间，但会导致局部气溶胶浓度升高，气溶胶污染的风险较高；③设备本身不带紫外消毒灯，实验结束后的杀菌消毒效果可能不是非常理想，难以对设备的各种缝隙进行有效的清洁消毒；④华益美核酸检测系统是该站第二个核酸实验室，空间相对狭小，空调出风口位于核酸检测设备上方，空调出风可能对实验室气流有一定影响，干扰新风系统对实验室空气的循环净化作用，从而造成混检反应率增高，试剂利用率下降。

综上所述，血站核酸检测实验室为了控制检测成本，减少试剂损耗，在今后的工作过程中应在以下几方面加以改进：①加强培训，提高核酸实验室工作人员的素质与技能，提高检测人员操作的熟练度和标本管理能力。②严格按照消毒灭菌标准操作规程对实验室清洁消毒，降低外部污染造成的试剂损耗。③对于浩源检测系统，在不影响献血者血液检测进程的情况下，可以尽量凑足整条使用，减少试剂浪费损耗。④对于华益美检测系统，实验室温湿度适宜的情况下，减少甚至不用空调，做好日常消毒的同时，每周用紫外灯消毒车对仪器内部进行照射消毒，降低设备内部的气溶胶集聚粘附的概率。通过以上措施，尽可能避免环境、人为因素对检测的影响，提高核酸试剂利用率，降低检测成本，对于保障血站正常运行具有重要意义。⑤实验室人员需做好仪器的日常维护工作，并做好试剂和标本的管理工作，例如严格保证标本的有效性，避免标本质量对检测结果的影响，提高检测成功率； 常规检测压力仪能提前预知到压力泵问题，避免因压力泵问题造成的实验无效。定时仪器维护还能有效防止管道堵塞出现。此外，还能阻止灰尘进入到机器中，减少机器硬件故障出现，减缓仪器老化与各部件损耗[9-10]。⑥深入分析每次试剂损耗的原因，吸取经验，并建立起防止类似问题出现的措施，经每次全面深入分析，不断总结，不断提高，获取宝贵经验。⑦因NAT检测过程非常精密，在检测过程中软件、仪器、工作人员操作等因素均可能导致试剂的浪费，故实际检测中还需优化工作流程，设计好检测计划，提高试剂的利用率。