前列腺素E2和还原型谷胱甘肽在慢性萎缩性胃炎胃黏膜中动态变化的临床研究

马玉红，唐媛媛，李玉珍，游颜杰，李小非，李 雪

前列腺素E2（PGE2）和还原型谷胱甘肽（GSH）是重要的胃黏膜保护因子，其水平在一定程度上反映胃黏膜的自我防御功能［1-4］。PGE2 和GSH 具有广泛而重要的生物活性，通过COX-2/PGE2 信号传导通路和GSH 氧化还原反应清除活性氧（ROS）参与胃黏膜损伤、炎性反应和肿瘤发生发展等过程［5-7］。本研究通过对110 例慢性萎缩性胃炎（CAG）患者胃黏膜中PGE2 和GSH 含量检测，探讨二者与患者胃黏膜损伤相关指标的关系。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 临床资料：收集宁夏回族自治区人民医院在2017-2018 年经胃镜下取材的110 例CAG 患者胃黏膜组织样本，冻存于-20 ℃备用。患者年龄22～71岁，中位年龄50.2 岁。排除标准：①曾经接受过胃大部切除手术；②患有胃十二指肠疾病、胃十二指肠肿瘤以及消化性溃疡等疾病；③长期服用非甾体类药物者；④近1 个月服用质子泵抑制剂者。

1.1.2 病理组织下判断标准：病理组织学检查诊断标准参照《中国慢性胃炎共识意见》（2012 年，上海），病理活检可见腺体萎缩程度分度：轻度，固有腺体减少1/3；中度，固有腺体减少1/3～2/3；重度，固有腺体减少＞2/3。肠上皮化生分度：轻度，肠上皮化生细胞取代＜1/3 胃黏膜固有细胞；中度，肠上皮化生细胞取代1/3～2/3 胃黏膜固有细胞；重度，肠上皮化生细胞取代＞2/3 胃黏膜固有细胞。胃黏膜炎症活动性评分按照4 级（0～3 分）进行评分，0 分：正常，1分：轻度，2 分；中度，3 分：重度。根据炎症程度评分多少，与GSH 和PGE2 含量水平进行相关性分析。

1.1.3 试剂：PGE2 检测试剂盒购自大连泛帮化工有限公司，GSH 检测试剂盒购自南京建成生物工程研究所。YH04D 幽门螺杆菌检测仪、C14-UBT 呼气卡、C14 尿素胶囊购自安徽养和医疗器械设备有限公司。

1.1.4 仪器：电子秤匀浆机（XHF-DY 宁波新芝生物科技股份有限公司），TriStar LB941 酶标比色仪（北京生物科技有限公），721 型分光光度计（上海第三分析仪器厂），恒温离心机（上海市精科精密仪厂），TM-S 电子秤（湖南仪器仪表总厂）。

1.2 方法

1.2.1 生物活性指标检测：胃黏膜组织匀浆后，离心取上清液，低温（-20 ℃）冰箱保存。

1.2.2 PGE2 检测：将胃黏膜匀浆样本从低温（-20 ℃）冰箱取出解冻，标本融化后仍然保持2～8 ℃的温度。按重量体积比1 g∶9 mL 的比例加入9 倍体积的PBS：pH7.4，2 000～3 000 g，离心20 min 左右。先洗去酶标孔中的的液体，吸水纸拍干，每孔加入30 μl稀释好的洗涤液，轻轻摇晃30 s，然后甩掉，在吸水纸上拍干，重复4～5 次。操作时空白孔不加样，只加显色剂A、B 和终止液用于调零。标准品孔每孔加入稀释好的标准品50 μl。样品孔加入样品50 μl，轻轻摇晃，盖上封板膜，37 ℃培养箱中孵育30 min。将25 倍浓缩洗涤液用蒸馏水25 倍稀释后备用。洗涤时小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 s 后弃去，如此重复5 次，拍干。每孔先加入显色剂A50 μl，再加入显色剂B50 μl，轻轻震荡混匀，37 ℃避光显色10 min。每孔加终止液50 μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。以空白孔调零，以450 nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值），测定应在加终止液后10 min 以内进行，最后计算PGE2 数值。

1.2.3 GSH 检测：准确称取组织重量，按重量（g）∶体积（mL）=1∶9 的比例，加入9 倍的生理盐水制成组匀浆2 500 g、离心10 min，取上清液低温（-20 ℃）冰箱保存待测。胃黏膜标本取出解冻，混匀，室温放置5 min，使用100 孔板依次加入样品或标准品，混匀；加入150 μl 总谷胱甘肽检测工作液后，混匀，25 ℃或室温孵育5 min。加入0.16 mg/mL NADPH 50 μl溶液，混匀后静置5 min，405 nm 处，酶标仪测定各孔吸光度值。根据不同浓度标准品测得的不同吸光度作出标准曲线，用样品对照标准曲线即可计算出总谷胱甘肽的含量。

1.3 统计学方法：采用SPSS 17.0 统计软件分析，计量资料以±s 表示，2 组间比较采用t 检验，多组间比较采用方差分析，指标间的相关性采用Spearman等级相关分析法，P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 CAG 患者胃黏膜组织中PGE2 和GSH 水平比较：110 例CAG 患中，无HP 感染的CAG 患者PEG2含量为（38.89±5.15）pg/mL，轻度HP 感染的CAG 患者PEG2 含量为（33.68±6.32）pg/mL，二者差异有统计意义（P＜0.05），随着HP 感染程度的增加CAG 患者PGE2 值进一步下降；无Hp 感染的CAG 患者GSH 含量为（1.94±0.15）mg/mL，而轻度HP 感染的CAG患者胃黏膜组织GSH 含量为（1.86±0.26）mg/mL，二者差异有统计意义（P＜0.05），随着HP 感染程度的增加CAG患者GSH2 值进一步下降；CAG 患者胃黏膜组织中PGE2 和GSH 水平在无HP 感染的CAG 组和有HP感染的CAG 组均显著降低，差异均有统计学意义（P＜0.05）。

2.2 CAG 患者胃黏膜组织中GSH 和PGE2 水平与临床病理指标的关系：CAG 患者胃黏膜组织中PGE2和GSH 水平下降同炎症程度呈明显相关性（P＜0.05）。GSH 和PGE2 水平与患者性别、年龄、病变部位、肠化程度、高级别瘤变、萎缩程度等因素比较差异无统计学意义（P＞0.05），见表1。Spearman 相关分析显示，GSH 和PGE2 水平与炎症程度呈负相关性（r=-0.157 和-0.288；P＜0.05）；GSH 和PGE2 水平与HP感染程度呈负相关性（r=-0.359 和-0.237；P＜0.05）。

表1 PGE2、GSH 水平与临床病理特征的关系（±s）

表1 PGE2、GSH 水平与临床病理特征的关系（±s）

3 讨论

PGE2 由胃黏膜上皮细胞合成和分泌，是一种重要的细胞生长和调节因子，参与众多的细胞代谢活动和不同的生理及病理过程［5，6］。生理状态下的PGE2水平较低，然而却具有很强的生物学活性。PGE2 可以抑制胃酸分泌，增加胃黏膜血液供应，促进上皮细胞再生，增加碳酸氢盐和黏液分泌，修复已受损的胃黏膜［7-8］，是重要的胃黏膜保护因子。本研究发现胃黏膜中PGE2 水平下降与炎症程度和HP 感染程度密切相关，随着HP 感染程度的增加，炎症程度的加重，PGE2 水平逐渐下降，提示HP 等胃黏膜攻击因素造成的胃黏膜炎症使胃黏膜保护因子PGE2 水平明显下降。

GSH 保护胃黏膜细胞主要通过保护细胞膜中的多不饱和脂肪酸防止脂质过氧化而实现［9］。在GSHPx 参与下，通过氧化还原反应清除ROS，减轻胃黏膜损害［10］，亦是重要的衡量胃黏膜保护能力的因素。研究表明GSH 水平的增加与胃黏膜表现出一致的适应现象，即GSH 含量越高，胃黏膜损伤越轻［11-12］。本实验结果显示，胃黏膜中GSH 水平下降同样与炎症和HP 感染程度密切相关，且随着炎症和HP 感染程度加重，GSH 水平下降更为显著。

慢性胃炎、消化性溃疡、胃癌等疾病已被证实与HP 感染密切相关［13］。HP 感染增加胃黏膜上皮细胞的凋亡，通过多种分子机制导致胃上皮细胞凋亡，使胃黏膜慢性萎缩［14］。前期研究证实HP 感染引起内源性GSH 水平显著下降［15］。本研究发现随着HP 感染程度加重，PGE2 和GSH 水平逐渐降低。上述结果可能由于HP 感染导致胃黏膜炎性反应，HP 直接损伤黏膜上皮细胞，或使胃黏膜炎性细胞数量增加并产生大量的炎症因子，多种因素共同作用从而影响胃黏膜的分泌功能。

本研究将CAG 作为研究对象，研究PGE2 和GSH在胃黏膜损伤中的作用，为指导临床个体化治疗提供了参考依据。然而，仍需进一步研究PGE2 和GSH在减轻胃黏膜血管损伤、改善胃微循环和黏膜损伤后修复方面的机制。