肝癌组织中glypican-3、MMP-9 蛋白的表达情况及临床意义

彭旭 杨静

（河南省驻马店市中心医院病理科 驻马店 463000）

肝细胞癌的发病具有起病隐匿、病情进展快速、易转移、预后差等特点，因此对患者进行早期诊断和治疗，是降低肝细胞癌患者病死率的主要方法[1]。恶性肿瘤的典型生物学特征是可发生转移、侵袭[2]。近些年，研究显示磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3（glypican-3）可作为原发性肝癌的诊断分子标志物，能和多种生长和转移因子相结合引起肿瘤细胞发生转移；基质金属蛋白酶-9（MMP-9）的表达与肿瘤细胞的转移、侵袭密切相关，可促进癌细胞突破组织学屏障[3～4]。本研究探讨肝细胞癌患者组织中glypican-3、MMP-9 的表达情况，为肝细胞癌患者的早期诊断、临床治疗提供理论依据。现报道如下：

1 材料与方法

1.1 标本 选取2017 年9 月～2019 年3 月我院收治的63 例原发性肝癌患者为研究对象，均经病理学检查确诊，且行根治术治疗。患者术前均未接受过任何抗肿瘤治疗，临床资料完整者。63 例患者中男39 例，女24 例；年龄35～80 岁，平均（59.2±5.3）岁。采集63 例患者的肝癌组织标本及距肿瘤组织至少6 cm 处的正常癌旁肝组织50 例。

1.2 实验方法 常规制备石蜡组织切片（德国SLEE 公司CUT4062 型石蜡切片机），脱蜡，水化，3%H2O2封闭处理后，滴加鼠抗人glypican-3、MMP-9 抗体（英国Abcam 公司），37℃下孵育30 min，经PBS 洗涤；滴加广谱通用型非生物素化IgG，滴加DAB 染色液，然后经苏木精复染，以中性树胶封片，于光学显微镜（日本Olympus 公司CKX41-A32RC 型倒置显微镜）下观察各组织标本中glypican-3、MMP-9 蛋白表达情况。glypican-3、MMP-9 蛋白阳性着色为细胞质或细胞膜中出现棕黄色或棕褐色颗粒，以半定量积分法判定染色结果。染色总评分=阳性细胞数评分×阳性染色强度评分，0～4 分为阴性，＞4 分为阳性[5]。

1.3 统计学方法 采用SPSS23.0 统计学软件分析数据，计数资料以%表示，组间比较采用χ2检验，以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 肝癌组织及癌旁正常组织glypican-3、MMP-9蛋白表达情况比较 glypican-3、MMP-9 蛋白阳性表达分布区域主要在细胞质和细胞膜中。见图1。肝癌组织glypican-3、MMP-9 蛋白阳性表达率均高于癌旁正常组织（P＜0.05）。见表1。

图1 肝癌组织及癌旁正常组织glypican-3、MMP-9 蛋白表达(×200)

表1 glypican-3、MMP-9 蛋白表达情况[例（%）]

2.2 肝癌组织中glypican-3、MMP-9 表达与临床病理特征的关系 glypican-3、MMP-9 在肝癌组织中的阳性表达与患者性别、年龄、血管内有无癌栓、肿瘤直径均无显著相关性，（P＞0.05），而与包膜是否完整、淋巴结是否发生转移、被膜是否发生侵犯具有显著相关性（P＜0.05）。见表2。

表2 肝癌组织中glypican-3、MMP-9 表达与临床病理特征的关系[例（%）]

3 讨论

目前如何在基因水平上更早期、准确地诊断原发性肝癌是临床研究的重点。研究显示，glypican-3可激活经典Wnt 信号途径，主要通过自分泌和旁分泌的方式来使Wnt 基因高表达，进而刺激体内和体外原发性肝癌细胞生长。另外，glypican-3 还可通过促进Wnts 与其特异的Frizzled 受体结合，进而促进细胞的恶性转化和肿瘤的持续增殖[6～7]。

在肝癌细胞中，与glypican-3 表达相关的基质金属蛋白酶和生长信号分子发生了改变；而MMP-9是主要降解Ⅳ型胶原的基质蛋白水解酶，可促使肝癌细胞穿越组织屏障，其在多种恶性肿瘤组织中高表达，并增加了肿瘤细胞的侵袭能力[8～9]。本研究中，肝癌组织glypican-3、MMP-9 蛋白阳性表达率显著高于癌旁正常组织。在肿瘤组织中，肝癌、绒毛膜癌、甲状腺癌、卵黄囊瘤、黑色素瘤可见glypican-3 表达，而在乳腺癌、肺癌、胃癌、结肠癌、卵巢癌中表达下降或不表达，表明glypican-3 具有在癌组织特异表达的特性[10]。肝细胞癌患者的临床病理参数、预后等与肝癌细胞的恶性生物学行为之间的关系日渐受到人们的关注。本研究进一步分析发现，glypican-3、MMP-9 在肝癌组织中的阳性表达与患者性别、年龄、血管内有无癌栓、肿瘤直径均无显著相关性，而均与包膜是否完整、淋巴结是否发生转移、被膜是否发生侵犯具有显著相关性。

综上所述，glypican-3、MMP-9 在原发性肝细胞癌的发生及进展过程中起重要作用，原发性肝癌组织中存在glypican-3、MMP-9 异常高表达现象，可作为肝癌患者早期检测指标。但有关其对肝癌细胞侵袭及转移机制仍需进一步深入研究。