冠状动脉粥样硬化性心脏病慢性心力衰竭患者血清microRNA-499水平及与心功能和心肌重构的相关性

徐宝华，李楠，朱家庭

（大连市第三人民医院 心内科，辽宁 大连 116033）

慢性心力衰竭（chronic heart failure,CHF）是各种心脏疾病的终末阶段，为临床常见疾病之一。随着人口老龄化，CHF 的发病率逐年上升。CHF 具有致残率和病死率高的特点，对患者的健康和生活质量造成严重影响，给家庭和社会带来沉重负担。心肌重塑和神经内分泌过度激活是CHF 发生的重要作用机制。microRNA（miRNA）参与多种疾病的病理生理过程，在心肌梗死、冠状动脉粥样硬化性心脏病（以下简称冠心病）等心血管疾病的发生、发展过程中发挥重要作用[1-2]。miR-499与心肌损害关系密切[3]，在心肌梗死、冠心病等心血管疾病中也发挥重要作用[4-5]。本文对冠心病CHF 患者血清miR-499 水平进行研究，探讨其在心功能和心肌重构中的意义。

1 资料与方法

1.1 临床资料

选取2016年1月—2018年12月在大连市第三人民医院心内科就诊的冠心病CHF 患者90 例作为CHF组，同期本院健康体检者90 例为对照组。CHF 组年龄（59.38±11.24）岁；男性49 例，女性41 例；美国纽约心脏病学会（NYHA）分级：Ⅱ级29 例，Ⅲ级 34 例，Ⅳ级27 例。对照组年龄（60.02±9.58）岁；男性46 例，女性44 例。两组年龄、性别方面比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。CHF 患者根据左室射血分数（left ventricular ejection fraction,LVEF）分为LVEF 降低CHF 31 例，LVEF 中间CHF 19 例，LVEF保留CHF 40 例。CHF 符合《中国心力衰竭诊断和治疗指南2018》[6]的诊断标准。冠心病符合《稳定性冠心病诊断与治疗指南》[7]的诊断标准。本研究通过医院伦理委员会审批。

1.2 纳入与排除标准

1.2.1 纳入标准 CHF 患者均有冠心病病史、NYHA分级Ⅱ级～Ⅳ级、CHF 病史＞6 个月；两组病例资料完整，患者均签署知情同意书。

1.2.2 排除标准 对照组排除急性心肌梗死、急性心肌炎、不稳定心绞痛病史。CHF 组排除近期行经皮冠状动脉介入术、非冠心病所致心力衰竭。两组均排除恶性肿瘤，严重肝肾功能异常，肺动脉栓塞及阻塞性肺部疾病，合并急性心包炎、心脏瓣膜病，哺乳期及妊娠期女性，感染性疾病。

1.3 研究方法

1.3.1 标本采集 CHF 患者于入院第2 天，对照组体检当天采集空腹外周静脉血，3 000 r/min 离心10 min，分离血清备用。

1.3.2 血清miR-499 水平测定 取各研究对象血清，加入Trizol 提取总RNA，逆转录为cDNA，采用实时荧光定量聚合酶链反应，反应条件为：95℃预变性10 min，95℃变性15 s、58℃退火60 s，共42 个循环。以U6 为内参，用2-ΔΔCt法计算血清miR-499 水平。PCR 仪（ABI 7500 型）及配套试剂均购自美国ABI 公司。

1.3.3 心功能和心肌重构测定 采用Philips iE33 超声仪（荷兰飞利浦公司）测定心功能和心肌重构，利用二维平面法测定心功能指标：LVEF、心输出量（CO）；采用二维和三维超声心动图测定心肌重构指标：左心房内径（LAP）、左室舒张末内径（LVEDD）、左室后壁厚度（LVPW）、左室重构指数（LVRI）、左室质量指数（LVMI）。

1.4 统计学方法

数据分析采用SPSS 20.0 统计软件。计量资料以均数±标准差（±s）表示，比较用t检验或方差分析，两两比较用LSD-t检验，相关分析用Pearson 法，P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组血清miR-499 水平比较

对照组和CHF 组血清miR-499 水平分别为（1.00±0.07）和（1.57±0.11），经t检验，差异有统计学意义（t=41.474，P=0.000），CHF 组高于对照组。

2.2 不同心功能分级患者血清miR-499 水平比较

心功能Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级患者血清miR-499 水平分别 为（1.32±0.10）、（1.53±0.09） 和（1.71±0.12），经方差分析，差异有统计学意义（F=100.851，P=0.000），进一步两两比较经LSD-t检验，随心功能分级升高，血清miR-499 水平升高（P＜0.05）。

2.3 不同LVEF 患者血清miR-499 水平比较

LVEF 降低、中间、保留CHF 患者血清miR-499 水平分别为（1.68±0.07）、（1.55±0.08） 和（1.43±0.10），经方差分析，差异有统计学意义（F=72.921，P=0.000），进一步两两比较经LSD-t检验，随LVEF 降低，血清miR-499 水平升高（P＜0.05）。

2.4 两组心功能和心肌重构指标比较

两组LVEF、CO、LAP、LVEDD、LVPW、LVRI、 LVMI 比较，经t检验，差异有统计学意义（P＜0.05），CHF 组LVEF、CO、LVRI 低于对照组，LAP、LVEDD、LVPW、LVMI 高于对照组。见表1。

2.5 不同心功能分级患者心功能和心肌重构指标比较

不同心功能分级患者LVEF、CO、LAP、LVPW、LVRI、LVMI 比较，经方差分析，差异有统计学意义（P＜0.05），进一步两两比较经LSD-t检验，随心功能分级升高，LVEF、CO、LVRI 降低（P＜0.05），LAP、LVPW、LVMI 升高（P＜0.05）。见表2。

2.6 CHF 患者血清miR-499 水平与其他的指标相关性

CHF患者血清miR-499 水平与LVEF、CO、LVRI 呈负相关（P＜0.05），与LAP、LVPW、LVMI 呈正相关（P＜0.05）。见表3。

表1 两组心功能和心肌重构指标比较 （n =90，±s）

表1 两组心功能和心肌重构指标比较 （n =90，±s）

组别 LVEF/% CO/（ml/min） LAP/mm LVEDD/mm LVPW/mm LVRI/（g/ml） LVMI/（g/m2）对照组 55.37±6.28 7.34±1.76 35.67±7.68 47.31±6.02 7.95±1.24 1.21±0.19 102.16±41.35 CHF 组 45.16±6.02 5.57±1.68 49.32±8.14 73.26±9.61 9.67±1.38 1.02±0.16 132.14±37.58 t 值 11.134 6.901 11.571 21.710 8.975 7.257 5.090 P 值 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000

表2 不同心功能分级患者心功能和心肌重构指标比较 （±s）

表2 不同心功能分级患者心功能和心肌重构指标比较 （±s）

心功能分级 n LVEF/% CO/（ml/min） LAP/mm LVEDD/mm LVPW/mm LVRI/（g/ml） LVMI/（g/m2）Ⅱ级 29 49.21±5.76 6.35±1.24 42.78±8.59 72.67±10.32 8.94±1.27 1.09±0.15 117.58±11.62Ⅲ级 34 45.34±5.91 5.42±1.33 48.79±8.51 73.37±9.54 9.81±1.42 0.98±0.14 130.16±16.28Ⅳ级 27 41.06±5.73 4.85±1.27 54.73±11.02 74.04±10.51 10.63±1.19 0.90±0.12 140.02±15.69 F 值 13.765 9.820 11.416 0.129 11.715 13.486 16.332 P 值 0.000 0.000 0.000 0.879 0.000 0.000 0.000

表3 CHF 患者血清miR-499 水平与其他指标的相关性

3 讨论

miRNA 为单链、小分子、非编码RNA，转录后对细胞生长发挥调控作用[8]。miRNA 除在细胞生长、分化、凋亡及集体生长发育中发挥重要作用外，在心律失常、冠心病、心力衰竭等心血管疾病的发生、发展中也发挥重要作用[9-10]。研究表明，miRNA在血清中表达稳定，与组织来源的miRNA 比较，血清miRNA 敏感性高、稳定性好、可连续监测，故近年来血清miRNA 在心血管疾病中的意义越来越受到大家关注[11-12]。

miR-499 为miRNA 家族成员之一，为具有心脏特异性的代表成员，与多种心肌细胞的特异性基因关系密切，可通过多种信号通路对心肌细胞的生理功能进行调控[13-14]。miR-499 在急性心肌梗死等心血管疾病中扮演重要角色，如在急性心肌梗死患者血清中升高[15]。miR-499 是急性心肌梗死的新型敏感生物标志物[16]。血清miR-499 在急性冠脉综合征早期诊断中具有重要价值[17]，血清miR-499 与急性冠脉综合征患者冠状动脉病变程度关系密切[18]。本文对冠心病慢性心力衰竭患者血清miR-499 水平进行研究，发现患者血清miR-499 水平升高，且随CHF 心功能分级升高，血清miR-499 水平升高，表明miR-499 可能参与CHF 的发生、发展过程。

LVEF 和CO 为反映心功能的指标，值越高表明心功能越好[19]。心肌重构是CHF 发生、发展的重要病理机制，心肌细胞间质胶原沉积、心室壁增厚、心脏变形能力降低等为心肌重构的主要体现[20]，LAP、LVPW、LVRI、LVMI 为反映心肌重构的指标[21]。本研究结果发现，CHF 患者LVEF、CO、LVRI 降低，LAP、LVPW、LVMI 升高，血清miR-499 与LVEF、CO、LVRI 呈负相关，与LAP、LVPW、LVMI 呈正相关，表明冠心病CHF 患者存在心功能异常和心肌重构，心功能分级越高，心功能异常及心肌重构越严重，血清miR-499 在一定程度上可反映CHF 患者的心功能和心肌重构程度。miR-499 的编码基因位于人类20 号染色体Myh7b基因内，miR-499 与Myh7b可协同在骨骼肌纤维及心肌纤维中表达，在其他组织中只有少量表达。miR-499 具有促进心肌增殖和分化功能，高表达miR-499 可通过促进梗死区心肌细胞再生和分化，改善心功能；miR-499 可抑制心肌细胞凋亡，沉默miR-499 可通过促进心肌细胞凋亡，增加心肌肥厚和心功能不全[22]。由此可见，miR-499 可能通过影响心肌细胞增殖和凋亡，影响心功能和心肌重构。

综上所述，冠心病CHF 患者血清miR-499 水平升高，检测血清miR-499 水平在其病情评估、心功能和心肌重构判断上具有一定指导价值。