阿魏酸钠对颈动脉易损斑块患者TLR4/NF-κB 信号通路及MMP-7、MMP-9 的影响

胡晓飞 朱先华 金笑平

急性缺血性脑卒中是最常见的卒中类型，占我国脑卒中的69.6%～70.8%[1]，具有高复发率、高致残率的特点。颈动脉易损斑块的破裂和血栓的形成是引起缺血性脑卒中的主要原因之一[2-3]。影响斑块易损性的因素主要包括免疫炎症反应、细胞外基质降解、脂质代谢异常、氧化应激、细胞凋亡及血管新生等。研究提示Toll样受体4（TLR4）/核因子-κB（NF-κB）信号转导途径可导致一系列与易损斑块相关的炎性因子的大量合成与释放，在易损斑块的发展中起重要作用[4]。基质金属蛋白酶（MMPs）是一种锌离子依赖的蛋白水解酶，主要的功能是降解和重塑细胞外基质，其参与了动脉粥样硬化、易损斑块的形成和破裂的过程[5]。阿魏酸钠是中药当归和川芎的有效单体成分，先前的研究表明阿魏酸钠可能从不同环节、多靶点发挥协同作用，通过调节血脂、抗氧化损伤、抑制炎症细胞因子进而干预动脉粥样硬化的发生、发展[6]。目前阿魏酸钠对颈动脉易损斑块TLR4/NF-κB 信号通路的调节及对血清基质金属蛋白酶7（MMP-7）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）的影响尚不明确，本研究就此展开探讨。

1 对象和方法

1.1 对象 选取2017 年1 月至2018 年6 月本院神经内科收治的轻型缺血性脑卒中且颈动脉超声检查提示存在易损斑块的患者174 例，其中男100 例，女74 例；年龄45～78（68.36±8.15）岁。纳入标准：（1）CT 或MRI检查证实为急性缺血性脑卒中，且诊断符合《中国急性缺血性脑卒中诊治指南2014》中关于急性缺血性脑卒中的标准[7]；（2）首次发病，且发病至入院时间＜48h；（3）临床有经验的超声科医师检查发现存在颈动脉易损斑块，即斑块呈等回声、低回声、混合回声和溃疡[8]。排除标准：（1）合并冠心病者；（2）有严重心、肝、肾功能障碍者；（3）有急、慢性炎症性疾病者；（4）有肿瘤性疾病者；（5）有自身免疫性疾病者；（6）有血液系统疾病者；（7）2 周内有创伤史或行外科手术者；（8）入院前1 个月内服用过免疫抑制剂、激素类药物者。采用随机数字表法将患者分为实验组和对照组，每组87 例。两组患者性别、年龄、高血压、糖尿病、高脂血症、吸烟史、饮酒史比较差异均无统计学意义（均P＞0.05），见表1。本研究经医院医学伦理委员会批准通过，所有患者均签署知情同意书。

1.2 治疗方法对照组患者入院后给予抗血小板聚集，降脂，控制血压、血糖等常规基础治疗。实验组患者在常规基础治疗的同时口服阿魏酸钠片（批准文号：国药准字H51023608，规格：50mg/片，成都第一制药有限公司），100mg/次，3 次/d。两组均治疗8 周。

1.3 标本收集 所有患者均于入院当天及治疗结束后当天同一时间点采血5ml，于ST40R 离心机（赛默飞尔科技有限公司）内以2000r/min 离心10min，分离血清，分装于EP 管内，血清标本保存于-80℃冰箱中备用。

1.4 血清学检测 采用ELISA 法检测所有患者血清超

敏-C 反应蛋白（hs-CRP）、白细胞介素6（IL-6）、TLR4、NF-κB、MMP-7、MMP-9 水平，实验步骤严格参照试剂盒说明书操作，相关的试剂盒均购自上海捷瑞生物工程有限公司。

1.5 统计学处理 采用SPSS 22.0 统计软件。计量资料以表示，组间比较采用两独立样本t检验；计数资料组间比较采用χ2检验。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患者治疗前后炎症指标比较 治疗前两组患者血清hs-CRP、IL-6、TLR4 和NF-κB 水平比较差异均无统计学意义（均P＞0.05）。治疗后实验组患者血清hs-CRP、IL-6、TLR4 和NF-κB 水平均较对照组下降，且两组患者治疗后血清hs-CRP、IL-6、TLR4 和NF-κB水平均较治疗前下降，差异均有统计学意义（均P＜0.05），见表2。

2.2 两组患者治疗前后血清MMPs 水平比较 治疗前两组患者血清MMP-7 和MMP-9 水平比较差异均无统计学意义（均P＞0.05）。治疗后实验组患者血清MMP-7 和MMP-9 水平均较对照组下降，且两组患者治疗后血清MMP-7 和MMP-9 水平均较治疗前下降，差异均有统计学意义（均P＜0.05），见表3。

3 讨论

目前易损斑块被誉为心脑血管病领域的“罪犯斑块”。研究表明易损斑块不可预测的破裂导致了60%～65%的冠脉栓塞[9]及将近90%的缺血性脑卒中[10]。因此寻找能够稳定易损斑块的药物，对延缓、遏制我国心脑血管病发病率有着重要的意义。

影响动脉粥样斑块易损性的内在机制包括免疫炎症、细胞外基质的降解、氧化应激反应、脂质代谢异常、巨噬单核细胞浸润和泡沫细胞形成、内皮功能损伤、新生血管形成等。其中炎症及免疫防御是引起斑块易损性的关键因素。TLR4 是炎症及天然免疫系统的一种跨膜信号传递受体蛋白，在炎症与动脉粥样硬化的发生、发展过程架起了一座桥梁。在多种内源性配体的作用下，TLR4 可通过髓样分化因子88（MYD88）依赖或非依赖的信号转导通路，激活NF-κB，促使炎性因子的合成和释放，活化巨噬细胞，促进平滑肌细胞凋亡，使斑块内基质合成减少、降解增多，脂质池扩大、纤维帽变薄，最终导致斑块易于破裂及血栓形成[11]。hs-CRP 是炎症的敏感指标之一。IL-6 是炎性反应中起核心作用的重要介质，可致血清hs-CRP 浓度升高，纤维蛋白原合成增加，诱导血管活性物质释放、促进凝血及血栓形成，并通过多种机制促使易损斑块破裂[12-13]。

表1 两组患者一般资料比较

表2 两组患者治疗前后炎症指标比较

表3 两组患者治疗前后血清MMPs 水平比较（μg/L）

阿魏酸钠是中药当归和川芎的主要活性成分。现代药理研究表明，阿魏酸钠具有调节血脂、抗氧化、抗血小板聚集、抑制血管平滑肌细胞、保护内皮细胞等作用，同时也具有强大的抗炎作用。姚君等[14]研究发现阿魏酸钠可以通过降低结肠NF-κB 表达及活性从而减轻肠道的炎症反应。龚婉等[15]研究表明阿魏酸钠可通过抑制NFκB p65 核转位从而减轻缺血/再灌注大鼠脑神经细胞炎症反应。胡潇等[16]研究提示阿魏酸可降低TLRs 信号通路相关蛋白（TLR2、TLR4、MYD88、NF-κB p65）的表达从而抑制PM2.5 诱导的小鼠主动脉炎症。本研究发现在常规用药的基础上联合阿魏酸钠片治疗颈动脉易损斑块患者，治疗后其血清TLR4、NF-κB、CRP、IL-6 水平均较常规治疗明显降低。结合以往研究，笔者推测阿魏酸钠可能通过抑制TLR4/NF-κB 信号通路从而减轻炎症反应。

MMPs 是锌离子、钙离子依赖性蛋白水解酶，其在细胞外基质降解与重构过程中发挥至关重要的作用。MMP-7 是一种活性最强的蛋白多糖降解酶。研究表明MMP-7 可降解血管平滑肌细胞间起连接作用的粘连蛋白，促进平滑肌细胞凋亡，破坏粥样硬化斑块的稳定性[17]。MMP-9 是由巨噬细胞、中性粒细胞、平滑肌细胞分泌的MMPs，能对血管壁基底膜、细胞外基质发挥降解作用，可促进血管中膜平滑肌细胞向内膜迁移，使覆盖在斑块表面的纤维帽遭到破坏，从而降低斑块的稳定性[18]。本研究发现阿魏酸钠可明显降低易损斑块患者血清MMP-7、MMP-9 水平，从而可能增加斑块的稳定性。

综上所述，本研究结果表明阿魏酸钠可能通过抑制颈动脉易损斑块TLR4/NF-κB 的信号通路，降低炎症因子hs-CRP、IL-6 水平和血清MMP-7、MMP-9 的表达，从而可能增加颈动脉易损斑块的稳定性。