菊粉作为佐剂可增强禽多杀性巴氏杆菌ptfA 基因DNA 疫苗的免疫效果

由禽多杀性巴氏杆菌引起的禽霍乱是影响禽类健康的重要疫病之一，给养禽业带来了较大的经济损失，因此需要采取积极有效的措施来预防和控制该病。目前临床上用于预防该病的疫苗仍然以传统的弱毒活疫苗和灭活疫苗为主，但禽多杀性巴氏杆菌抗原结构较为复杂，且易发生变异，导致目前商品化弱毒疫苗的免疫效果并不是特别理想。弱毒活苗还存在免疫期较短、免疫保护力偏低、局部及全身的反应偏大，可能存在散毒危险、残余毒力引起蛋鸡产蛋率下降等问题，而禽霍乱灭活疫苗的保护效果尚不及弱毒活疫苗，应用较少。因此，为提高免疫预防的成功率需进一步研制新型疫苗。

目前国内外对于禽多杀性巴氏杆菌病新型疫苗的研究主要集中于基因工程亚单位疫苗、缺失突变活疫苗上，如外膜蛋白H 重组亚单位疫苗、pLpE 蛋白重组亚单位疫苗、荚膜缺失突变疫苗等。但多数细菌性DNA 疫苗的免疫效果差强人意。为提高DNA 疫苗的免疫原性，新型佐剂被广泛应用，其中多糖类化合物已成为佐剂研究领域的热点之一，而且大多表现出了较好的佐剂效应。

近期《Poultry Science》发表了菊粉增强禽多杀性巴氏杆菌ptfA 基因DNA 疫苗免疫效果的研究。菊粉是一类天然植物性多糖，是一种有效的补体替代激活途径的活化剂，给动物应用后可以激活动物机体的先天免疫系统，有效地诱导Th1 型和Th2 型免疫应答。而且菊粉在体内可以被代谢成简单的果糖和葡萄糖，因此不会伴随有任何局部或全身的毒性，是一种安全的免疫佐剂。该研究以菊粉为佐剂制备了禽多杀性巴氏杆菌ptfA 基因的菊粉佐剂DNA疫苗，以弱毒活疫苗、菌毛蛋白疫苗及DNA 疫苗为对照，同时设置了菊粉灌胃组（先以菊粉进行连续灌胃两周后以DNA 疫苗进行免疫），以上述各疫苗进行了动物免疫。在初次免疫后的第1-6 周分别以禽多杀性巴氏杆菌的菌悬液和菌毛蛋白为包被抗原，采用间接ELISA 方法测定了各疫苗组诱导机体产生的血清抗体水平，结果表明两种包被抗原检测到的菊粉佐剂组、菊粉灌胃组和DNA 疫苗组的血清抗体水平均无显著差异，且均低于弱毒活疫苗组和菌毛蛋白疫苗组，提示菊粉作为佐剂对于禽多杀性巴氏杆菌ptfA 基因DNA 疫苗诱导的血清抗体无明显的促进作用。在每次免疫后以禽多杀性巴氏杆菌的菌毛蛋白为刺激物，以MTT 法测定了免疫鸡外周血淋巴细胞的增殖水平及其分泌的Th1 型细胞因子IFN-γ、IL-2的浓度和Th2型细胞因子IL-4的浓度，结果在2免和3免后菊粉佐剂组分泌的IFN-γ和IL-2的浓度虽不及弱毒活疫苗组，但显著高于DNA 疫苗组、菊粉灌胃组和菌毛蛋白疫苗组；但菊粉佐剂组、DNA 疫苗组、菊粉灌胃组和菌毛蛋白疫苗组分泌的IL-4 的浓度始终无显著差异，且均低于弱毒活疫苗组和菌毛蛋白疫苗组。表明菊粉作为佐剂对于禽多杀性巴氏杆菌ptfA 基因DNA 疫苗诱导的Th2 型免疫应答无明显的促进作用，但可提高Th1 型免疫应答水平。3 次免疫后以禽多杀性巴氏杆菌强毒进行攻毒试验，测定了各疫苗为实验动物提供的保护率，结果显示菊粉佐剂组的保护率高于DNA 疫苗组，但菊粉灌胃组的保护率则并不优于裸DNA 疫苗组。该研究证实菊粉可在一定程度上增强禽多杀性巴氏杆菌ptfA 基因DNA 疫苗的免疫效果，对于DNA 疫苗佐剂的研究以及禽多杀性巴氏杆菌新型疫苗的研究具有一定的意义。