常用抗凝剂对凝血项目测定的影响分析

覃正星 李小兰 黎宇

（广西医科大学第四附属医院输血科 广西 柳州 545005）

抗凝剂是一种或一类通过抑制血液中某种或某类凝血活酶及凝血因子，用以达到防止血液发生凝结固缩为目的的化学制剂。不同类型的抗凝剂由于其自身的理化性能不同，其可有效作用于凝血活酶及凝血因子的种类也不同。它们均可因抑制了血液中在发生凝血系列连锁反应中的某一种或某一类的凝血酶及因子的活性而阻断了凝血反应的继续进行，致使血液最终不能发生自然凝结。然而，在用于不同目的而检测凝血酶及因子的凝血项目而言，不同的抗凝剂则影响着不同种类的凝血酶及因子的活性。因此，选择适用的抗凝剂将有利于确保目的凝血项目的准确性。笔者针对上述问题，做一次不同抗凝剂对凝血测定的影响实验，意在观察抗凝剂对凝血项目的影响，了解不同抗凝剂在不同凝血项目中的可替代性。

1.资料与方法

1.1 实验对象

选取我院2017年9月期间来体检人员经问了解无明显各类病史无心、肝、肾等脏器问题。近期没有用药史的体检受试者80名。目前的教学教材及众多研究资料表明，枸橼酸钠为凝血项目检测的最佳抗凝剂[1-2]。以0.11mol/L枸橼酸钠(1：9)抗凝剂组设为对照组，使用EDTA-K2、肝素钠及0.11mol/L枸橼酸纳(1∶4)抗凝剂分别设为观察1组、观察两组及观察3组。对于D2项目在此次实验而言，由于方法学与其他凝血项目的差异及受到该因素影响意义不大，因此不设其参与实验对比。

1.2 仪器与试剂

仪器使用日本希森美康生产SYSMEX CS-5100全自动血凝分析仪，相关使用试剂均为该厂家提供的原装配套试剂，离心机为湖南湘仪L-530低速台式离心机。

1.3 方法

将选定人员的静脉血分别抽人含有乙二胺四乙酸二钾（EDTA-K2)、肝素钠、枸橼酸纳（1：4）及枸橼酸纳（1：9）的抗凝管中，在确保质控的前提下按照仪器说明要求及科室SOP文件要求的操作上机操作，记录各组数据，用观察1，2，3组数据分别与对照组进行两两比较分析。

1.4 统计学分析

数据采用SPSS20.0统计软件进行统计分析，计数资料采用率（%）表示，进行χ2检验，计量资料采用（±s）表示，进行t检验，P＜0.05为差异具有统计学意义。

2.结果

观察1组和观察2组两组血标本的PT、APTT、TT的检测结果较对照组的结果高，差异均具有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）；观察3组血标本的APTT与TT的检测结果较对照组的结果高，差异均具有统计学意义（P＜0.05）；各组FIB的检测结果虽较对照组的血标本检测结果偏低，但差异均不具有统计学意义（P＞0.05），见表。

表1 血标本不同抗凝剂处理后影响分析（±s）

表1 血标本不同抗凝剂处理后影响分析（±s）

组别 PT（s） APTT（s） TT（s） FIB（s）观察1组 22.2±1.7 68.9±6.9 31.9±2.3 3.0±0.4观察2组 30.1±2.6 78.6±7.6 32.5±2.5 3.1±0.4观察3组 13.2±1.1 42.3±2.0 28.9±3.3 3.1±0.5对照组 12.5±0.8 32.0±1.4 21.8±1.9 3.3±0.5

3.讨论

对于EDTA-K2而言，其抗凝原理为通过结合血液中钙离子形成稳定的螯合物从而防止钙离子在血液凝固过程里发挥的促凝作用。因钙离子是凝血的Ⅳ因子，是凝血过程中的关键成分，而EDTA能将所有钙离子完全络合，并且EDTA还能抑制部分凝血酶及干扰纤维蛋白单体的聚合[3]，影响了凝血酶的激活从而阻碍了纤维蛋白的形成；而枸橼酸钠只是结合钙离子并能较好的保护Ⅴ因子和Ⅷ因子，不影响纤维蛋白的形成，故使用EDTA抗凝的标本其凝血指标PT、APTT、TT结果延长了，而FIB值受到影响较小，所以EDTA不适用于做凝血功能的PT、APTT、TT项目检验，适合FIB项目的检测，这结论与左灿等[4]试验结论一致；对于肝素钠而言，其抗凝原理为肝素通过与抗凝血酶Ⅲ（AT-Ⅲ）结合，引起AT-Ⅲ分子构型的改变并暴露其活性中心，这种结合物可抑制凝血因子Ⅸ、Ⅹ、Ⅺ和Ⅻ及丝氨酸蛋白酶的活性，障碍凝血酶的形成，导致纤维蛋白原不能转化为纤维蛋白，从而阻碍了纤维蛋白的形成，因其对凝血酶有抑制作用，所以肝素钠液不适用于凝血各项目的检测。其中肝素可抑制多种内源性凝血因子（如Ⅸ、Ⅺ和Ⅻ），而对外源性凝血因子也有一定程度的影响，因此使用肝素抗凝的标本其凝血指标PT，APTT及TT都明显延长了，而FIB值受影响较小，所以肝素不适合PT、APTT、TT项目的检测，合适用于FIB的检测。对于1：4枸橼酸钠而言，其抗凝原理和1∶9枸橼酸钠抗凝原理一致，差别在于过多的抗凝成分稀释了血标本实际参与仪器要求反应的血量，导致PT，APTT及TT都相对延长了，而FIB值受影响较小，而1∶9枸橼酸钠刚好使血液中的钙离子维持一定的浓度，能确保检验结果的准确，所以1∶4枸橼酸钠不适合PT、APTT、TT项目的检测，合适用于FIB的检测。综上所诉，仅FIB在EDTA-K2和肝素抗凝中使用，但由于FIB常需与PT、APTT和TT一起联合做为临床对凝血功能的综合诊断，独立应用极少，其项目的替代性也没有太多意义。因此EDTA-K2、肝素钠和1：4枸橼酸钠抗凝剂是无法替代1：9枸橼酸钠抗凝剂在凝血项目上的应用。