不同干燥工艺对寒兰花总黄酮及抗氧化能力的影响

李程勋，徐晓俞，李爱萍*，郑开斌, *

1. 福建省农业科学院作物研究所（福州 350013）；2. 福建省农业科学院亚热带农业研究所（漳州 363005）

寒兰是兰科兰属植物，是国兰之一，广泛分布于中国、日本南部、朝鲜半岛南端，在中国寒兰主要分布在福建、广东、浙江、广西、江西、湖南、湖北、四川等地[1-2]。兰花性平、味辛，全草有养阴润肺之疗效，兼治咯血、头晕目眩、神经衰弱、尿道感染等病症[3]。寒兰具有很高的商业价值[4-5]，随着技术发展进步，寒兰花培育规模逐步增大，但是近期市场上盆栽寒兰花的销售量增长不快，甚至出现不增反减现象，寒兰花过剩，腐败丢弃现象大量发生，且寒兰花花期短、保鲜要求高、长途运输困难，在玫瑰花[6]、牡丹花[7]等早期发展时都有存在这些问题，相应干燥技术的开发研究使得这些花的资源优势得以充分发挥，因此研究寒兰花功效成分并有针对性地研究寒兰花干燥储存技术，对于寒兰花的市场应用前景和企业生产开发具有意义。黄酮类化合物是兰花中主要功效成分[8]，可以抗菌、抗炎、抗辐射，降低血糖、胆固醇，改善血液循环，促进伤口愈合和止痛等[9-13]。试验通过研究不同干燥工艺对寒兰花总黄酮及其抗氧化能力的影响，以期为寒兰花储存、开发和应用提供依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料

寒兰鲜花（福建省连城兰花股份有限公司）。

1.2 试剂和仪器

无水乙醇、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠（均为国产分析纯）；芦丁（含量大于98%，北京索莱宝科技有限公司）；1, 1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH，东京化成工业株式会社）。

电热鼓风干燥箱（DHG-9240 A，上海一恒科学仪器有限公司）；手提式粉碎机（HK-04 A，广州市旭朗机械设备有限公司）；电子天平（Denver TP-214，丹佛仪器有限公司）；超声仪（SB-5200 DTDN，宁波新芝生物科技股份有限公司）；离心机（Centrifuge 5804 R，eppendorf 公司）；紫外-可见分光光度计（T6新世纪，北京普析通用仪器有限责任公司）。

1.3 试验方法

1.3.1 寒兰花干燥方法

分别采用3种不同的杀青方法和3种不同的烘干温度对寒兰鲜花进行处理（见表1）。杀青方法采用较为传统的蒸汽杀青[14]和高温杀青[15]，烘干温度根据前期试验得出，低于45 ℃烘干时间过长，高于75 ℃时寒兰花断碎较多、颜色变黑且焦味明显。

表1 寒兰花干燥方法

1.3.2 样品溶液制备

将烘干至恒重的寒兰花，用手提式粉碎机打成粉末（80目），以1︰20（g/mL）料液比加入90%乙醇溶液，混合均匀，静置10 min，静置后样品超声提取（40 ℃）10 min，在10 000 r/min下离心5 min，取上清液即为样品溶液。

1.3.3 不同处理寒兰花总黄酮测定

标准品溶液制备。精密称取14.4 mg标准品芦丁于50 mL容量瓶中，用无水乙醇定容至刻度线，制成质量浓度0.288 mg/mL的标准品溶液。

显色反应及测定方法。取适量测定溶液于5 mL试管中，加入0.3 mL的5%亚硝酸钠溶液，混合均匀，静置6 min；加入0.3 mL的10%硝酸铝溶液，混合均匀，静置6 min；加入2 mL的4%氢氧化钠溶液，用蒸馏水定容至刻度线，混合均匀，静置10 min，于510 nm处测定其吸光度。

标准曲线的绘制。分别移取0，0.3，0.6，0.9，1.2，1.5和1.8 mL标准品溶液，按照显色及测定方法进行测定，以吸光度为纵坐标，标准品浓度为横坐标绘制标准曲线。

样品溶液测定。取样品溶液，按照显色及测定方法进行测定，得到样品溶液的吸光度，每个样品重复3次，并对其含量进行计算。

式中：W为样品总黄酮得率，%；C为待测样品总黄酮质量浓度，mg/mL；V为待测液体积，mL；n为稀释倍数；m为寒兰花质量，g。

1.3.4 不同处理寒兰花DPPH自由基的清除能力测定

待测样品溶液的稀释。取样品溶液，分别稀释成10%（5 mg/mL），1%（0.5 mg/mL）和0.1%（0.05 mg/mL）的溶液进行测定。

测定方法。配制质量浓度39.40 μg/mL的DPPH自由基无水乙醇溶液，存放冰箱，30 d内有效；取2 mL DPPH溶液和2 mL样品混合，静置30 min后，于517 nm波长检测吸光度，并对其DPPH自由基清除率进行计算。

式中：A0为DPPH自由基乙醇溶液与纯水混合液吸光度；Ai为DPPH自由基乙醇溶液加等体积样品测得吸光度；每个样品重复3次，取平均值。

2 结果与分析

2.1 不同干燥工艺对寒兰花总黄酮的影响

对不同干燥工艺下制成的寒兰花总黄酮含量进行测定，结果见表2和图1。

结果表明，90 ℃杀青的寒兰花总黄酮显著高于水蒸气杀青和不杀青寒兰花，不同杀青方法下的寒兰花总黄酮整体呈现为：90 ℃杀青＞不杀青＞水蒸气杀青，其中在45 ℃烘干条件下，90 ℃杀青寒兰花总黄酮含量是水蒸气杀青的2.29倍；在60 ℃烘干条件下，90 ℃杀青寒兰花总黄酮含量是水蒸气杀青的2.12倍；在75 ℃烘干条件下，90 ℃杀青寒兰花总黄酮含量是水蒸气杀青的1.96倍，因此得出不同杀青方法对于寒兰花总黄酮的影响很大。不同烘干温度下寒兰花总黄酮得率差异不大，因此得出45，60和75 ℃这3个烘干温度对于寒兰花总黄酮的影响不大。

表2 不同干燥工艺下寒兰花总黄酮含量

2.2 不同干燥工艺对寒兰花抗氧化能力的影响

对不同干燥工艺下制成的寒兰花进行提取，对其提取液的DPPH自由基清除能力进行测定，结果见表3和图2。

结果表明，在较高浓度（10%）和较低浓度（0.1%）的寒兰花提取液中，所有处理的寒兰花提取液DPPH自由基清除能力没有显著性差异；在中等浓度（1%）寒兰花提取液中，90 ℃杀青寒兰花DPPH自由基的清除能力显著强于其他两种杀青方式。

图2 10%寒兰花提取液的DPPH自由基清除能力

图3 1%寒兰花提取液的DPPH自由基清除能力

图4 0.1%寒兰花提取液的DPPH自由基清除能力

3 讨论

不同干燥工艺对于寒兰花的总黄酮影响很大，其中，水蒸气杀青显著降低寒兰花总黄酮含量，可能因为温度过高造成部分黄酮类物质发生转化或热降解，而90℃杀青寒兰花总黄酮会比不杀青高，这可能是因为90℃杀青后，寒兰花中含有的黄酮类物质降解酶失活，因此对于寒兰花中存在的黄酮物质降解速度减慢。

干燥工艺对于寒兰花提取液的DPPH自由基清除能力也有一定影响，在中等浓度（1%）时，90 ℃杀青寒兰花提取液的DPPH自由基清除能力显著高于另外2种杀青方法。黄酮类物质是一种抗氧化物，是天然抗氧化剂，研究中寒兰花提取物的DPPH自由基清除能力也和寒兰花中的总黄酮含量呈现一定相关关系，90 ℃杀青的寒兰花总黄酮含量较高，DPPH自由基清除能力也较强。

4 结论

干燥工艺对于寒兰花总黄酮的影响很大，不同杀青条件下寒兰花总黄酮含量为：90 ℃杀青＞不杀青＞水蒸气杀青。寒兰花提取液的DPPH清除能力排序为：90 ℃杀青＞不杀青≈水蒸气杀青。不同烘干温度下寒兰花总黄酮的含量差别不大。因此，对于寒兰花的干燥储存需要采用合适的杀青方法，有利于寒兰花中功效物质保存，保留寒兰花的利用价值。