戊己丸胃黏附片的制备及体外释放研究

周佳敏，胡 游，方朋超，蒋 博，袁志翔

0 引言

胃肠道生物黏附制剂(Gastrointestinal bioadhesion drug delivery System，GBDDS)是指利用聚合物与胃、肠黏膜黏液层/上层细胞表面之间的生物黏附，延长药物制剂在胃肠道停留时间或特定部位作用时间的给药系统[1]。戊己丸出自《太平惠民和剂周方》，为《中国药典》收载方。由黄连、吴茱萸和炒白芍按6∶1∶6比例组成，具有辛开苦降、清肝和胃、降逆止呕止泻之功效。现代药理学研究表明,其具有促进胃溃疡愈合、镇痛及抗腹泻的药效作用[2]。本研究首次将GBDDS和戊己丸中的有效成分相结合，选择羟丙基甲基纤维素(HPMC)和卡波姆为生物黏附剂，根据前期研究基础，制备了戊己丸胃黏附片，以期增加中药有效成分在胃肠道吸收部位的滞留时间，增强局部治疗效果，在减少给药次数的同时，提高对消化性溃疡的治疗效果。

1 仪器与试药

1200型高效液相色谱(美国Agilent公司)； BS210S电子天平(德国Sartorius公司)；FW135中草药粉碎机(天津泰斯特仪器有限公司)；ZRS-8C智能溶出试验仪(天津大学无线电厂)；TDP型单冲压片机(上海天和制药机械厂)。

盐酸小檗碱对照品(110713-201613，含量以86.8%计)、吴茱萸碱对照品(110802-201409，含量以99.4%计)以及芍药苷对照品(110736-201741，含量以95.7%计)均购自中国药品生物制品检定所；戊己丸普通片(自制片，含有淀粉和糊精等辅料，批号：20170726，李时珍医药集团有限公司)、精制黄连提取物(批号：20170301，盐酸小檗碱含量22.56%)、精制吴茱萸提取物(批号：20170301，吴茱萸碱含量1.65%)以及精制白芍提取物(批号20170301，芍药苷含量7.53%)均为实验室自制；羟丙基甲基纤维素(HPMC)(GB 1886.109-2015，成都市科隆化学品有限公司)；卡波姆(GB/T 10533-2014，成都市科隆化学品有限公司)；碱式碳酸镁(GB 25587-2010，成都市科隆化学品有限公司)；硬脂酸镁(GB1886.91-2016，成都市科隆化学品有限公司)；乙腈为色谱纯；其他试剂均为分析纯，水为重蒸水。

2 方法与结果

2.1 戊己丸胃释药黏附片的制备 根据前期的研究结果并加以改进[3]，分别按6∶1∶6的比例分别取精制黄连、吴茱萸、白芍提取物研磨混合均匀，取混合粉末15.0 g，以及过80目筛的HPMC(K15M)4.40 g、HPMC(E50)3.65 g、卡波姆934P 0.78 g、碱式碳酸镁1.05 g，采用等量递加法混匀，均匀喷洒95%乙醇制成软材，过16目筛制粒，50 ℃干燥1 h后，整粒，然后加入硬脂酸镁0.12 g混匀，压制成100片，片重约为0.25 g/片。

2.2 黏附力大小的测定 黏附力的测定采用自制的测定装置[3-4]：取新鲜猪胃黏膜组织，自来水冲洗除去胃肠内容物，浸泡于无酶人工胃液溶液冷藏室放置2 h后备用。将黏附片用胶水固定于实验装置B表面，再取出黏膜，用滤纸吸干背面的水分，剪成1.0 cm×1.0 cm，固定于实验装置A 表面。取装置B用无酶人工胃液浸润药片表面后与装置A接触，在装置A上施加100 g压力，维持一段时间后，解除压力，在装置B挂钩上系一塑料袋，以15 ml/min的速度向塑料袋中加水，直至装置A、B表面分开，立即停止加水。称取塑料袋中水的重量，即为黏附片体外胃黏附力大小。结果如表1所示，戊己丸胃黏附片的胃黏附力为(71.98±2.89) g/cm2，而戊己丸普通片的胃黏附力为(15.11±3.47 )g/cm2，表明制成胃黏附片后其胃黏附力明显增大。

2.3 黏附时间的测定 根据参考文献的方法，选用《中国药典》2015版四部通则溶出度与释放度测定法中第二法(浆法)的装置进行测定[5]。将处理好的猪胃黏膜，剪成1.0 cm×1.0 cm的小块，用胶水固定在载玻片一侧，用无酶人工胃液浸润药片表面后置于黏膜上，加外力维持1 min后解除。用防水胶布将载玻片固定在大杯中，载玻片上沿离杯口约2 cm，调节搅拌桨的高度，使桨叶的上沿与载玻片的下沿平齐。向杯中倒入一定温度人工胃液600 ml，记时(t0)，并启动搅拌桨(50 r/min)至黏附片完全从黏膜表面脱落，即为终止时间t。前后时间差即为黏附时间。结果如表1所示，戊己丸胃黏附片的胃黏附时间为(301.1±8.63) min，而戊己丸普通片的胃黏附时间为(0.47±0.16) min，表明制成胃黏附片后其胃黏附时间明显延长。

表1 戊已丸胃黏附片、普通片的黏附力及黏附时间比较

2.4 含量测定及体外释放

2.4.1 色谱条件 采用Hypersil ODS色谱柱(4.6 mm×150 mm，5 μm，Thermo Scientific)，流动相为乙腈(A)-0.05 mol/L磷酸二氢钾(B)为流动相，进行梯度洗脱(表2)，流速为1.0 ml/min，柱温30 ℃，检测波长为225 nm，进样体积10 μl[6]。芍药苷的tR为11.2 min，盐酸小檗碱的tR为21.3 min(图1)。

表2 梯度洗脱设置

2.4.2 标准曲线的建立及线性范围 精密称取芍药苷对照品和盐酸小檗碱对照品适量，用色谱甲醇配置成0.514 6 mg/ml以及0.497 5 mg/ml的溶液，得对照品储备液。精密量取储备液适量，分别置于同一10 ml量瓶中混合，用溶剂色谱乙腈稀释至刻度，摇匀，得到不同浓度的混标工作液，按上述色谱条件进样测定。将峰面积(A)与样品浓度(C)进行线性回归。结果表明，芍药苷在0.102 9～5.146 μg/ml范围内，峰面积(A)与药物浓度(C)有良好的线性关系，回归方程为A=37.68 C+2.864 (R2=0.999 8)；盐酸小檗碱在0.198 8～4.975 μg/ml范围内，峰面积(A)与药物浓度(C)有良好的线性关系，回归方程为A=15.94 C+1.473 (R2=0.999 7)。

图1 对照品 (A)和样品(B)色谱图

2.4.3 回收率及精密度 按处方比例称取空白辅料适量，置于100 ml量瓶中，精密量取已知含量的芍药苷对照品和盐酸小檗碱对照品溶液9份，加乙腈-磷酸二氢钾(1∶2)溶解后，定容，0.45 μm的微孔滤膜过滤，取续滤液，分别得到高、中、低3种浓度的混标对照品溶液，经过测定，芍药苷平均回收率分别为99.5%±1.84%、103.2%±1.23%、102.7%±2.00%，日内精密度为1.78%，日间精密度为1.96%；盐酸小檗碱平均回收率分别为104.5%±2.65%、99.7%±1.56%、98.7%±1.95%，日内精密度为1.54%，日间精密度为1.86%，均符合要求。

2.4.4 样品含量测定 按“2.1”项下方法制备3批戊己丸胃黏附片，各取10片，研细后精密称取0.25 g置于100 ml容量瓶中，加乙腈-磷酸二氢钾(1∶2)流动相溶解后，定容，0.45 μm的微孔滤膜过滤，得续滤液。采用“2.4.1”项下方法进行含量测定，结果见表3，每片戊己丸胃黏附片约含有芍药苷5.0 mg，盐酸小檗碱15.5 mg。

表3 戊己丸胃黏附片中芍药苷、盐酸小檗碱含量测定(mg/g)

2.4.5 体外释药研究 按照《中国药典》2015版四部通则0931溶出度与释放度测定法中第二法(浆法)，选用释放介质为含有0.8%的吐温80的人工胃液900 ml，转速为100 r/min，温度设定为(37±0.5)℃。分别于0.5、1、2、4、6、8、10、12 h取样2 ml 并补足等量同温的溶出介质，过0.45 nm微孔滤膜得到滤液，按“2.4.1”项下方法测定样品中芍药苷和盐酸小檗碱的含量，三批制剂平行试验，计算平均值，绘制累积溶出度曲线。结果如图2所示，自制的戊己丸普通片不具备缓释效果，在2 h内基本完全释放完毕，而戊己丸胃黏附片缓释作用明显，12 h实现完全释放，基本符合研究预期。

图2 戊已丸胃黏附片及普通片累积溶出度曲线比较(n=3)

2.4.6 释放模型拟合 为了进一步探讨戊己丸胃黏附片的释药机制，将释放度曲线进行零级方程、一级方程、Higuchi方程、Ritger-Peppas方程等常用的释放模型拟合，结果见表4。可见，用Ritger-Peppas方程能较好地对释放度曲线进行拟合。

表4 戊己丸胃黏附片释放度曲线拟合结果(n=3)

3 讨论

关于戊己丸胃黏附片的体外释放拟合中，用Ritger-Peppas方程能较好地对释放度曲线进行拟合，其方程F=K×Tn。其中，K、n为常数。K为释放速率常数，随药物、制剂处方和释放条件变化而变化；n为释放特征参数，与片剂形状有关。对于圆柱型制剂而言，当n≤0.45时，药物释放以Fick扩散为主；当0.45

在前期研究中，笔者通过现代制剂技术，已经成功构建了包括左金丸、元胡止痛片等在内的经典名方中有效成分(或者有效部位群)胃内释药系统，系统研究了这些中药复方有效成分的不同胃内释药制剂(如漂浮型、生物黏附型、漂浮与生物黏附协同型等)的制剂工艺技术、辅料应用技术和质量评价方法[3,7-9]。经方“戊己丸”主治脾湿泄利，饮食不化、脐腹刺痛及小儿抢积下痢等证，但由于受剂型的局限和药物本身性质的影响，有效成分随着胃的排空很快进入小肠，不能在胃溃疡表面形成有效的药物浓度，或达不到有效治疗时间。本研究中，我们以戊己丸为研究目标，在精提各中药有效成分的基础上，制备成胃黏附片，使药物直达病灶并缓慢释放，充分发挥了有效成分的作用时间与作用强度，为中药创新药物和新型给药系统的研究提供新技术。