云南咖啡害虫柑橘臀纹粉蚧发生初报①

白学慧 吴贵宏 邵维治 罗 琴 张洪波③

(1 云南省德宏热带农业科学研究所 云南瑞丽678600;2 瑞丽海关综合技术中心 云南瑞丽678600)

粉蚧科（Pseudococcidae）昆虫是一类重要的农林害虫，全世界超过2000种［1]。据Waller等报道，国外为害咖啡花、叶的粉蚧科害虫有南洋臀纹粉蚧Planococcus lilacinusCockerell、肯尼亚粉蚧P. kenyaeLe Pelley、柑橘臀纹粉蚧P.citriRisso、 双条拂粉蚧Ferrisia virgataCockerell 等4 种；为害咖啡根部的粉蚧科害虫有Benedictycoccina omataHambleton、Capitisetella migransGreen、Cataenoccus podagrosusGreen、Coccidella globoculusHambleton、菠萝灰 粉 蚧Dysmicoccus brevipesCockerell、D.debregeasiaeGreen、 香蕉灰粉蚧D. grassiLeonardi、D. probrevipesMorrison、D. radicisGreen、D. subterreusWilliams、D. tex-ensisTinsley、 格 林 蚁 粉 蚧Formicococcus greeniVayssière、印度蚁粉蚧F. robustusEzzat & McConnell、咖啡荒粉蚧Geococcus coffeaeGreen、Neochavesia caldsiaeBalachowsky、N.eversiBeardsley、斐济簇粉蚧Paraputo leveriGreen、柬埔寨臀纹粉蚧P. angkorensisTakahashi、柑橘臀纹粉蚧P. citriRisso、P. fungicolaWatson & Cox、南洋臀纹粉蚧P. lilacinusCockerell、P. radicumWatson & Cox、橘小粉蚧Pseudococcus cryptusHempel、P. pseudocitriculusBetrem、Pseudorhizoecus proximusGreen、Puto antioquensis（Murillo）、P.mexicanusCockerell、 美 洲 根 粉 蚧Rhizoecus americanusHambleton、R. arabicusHambleton、R. caladiiGreen、咖啡根粉蚧R. coffeaeLaing、R. divaricatusHambleton、R. elotiGiard、R. falciferKunckel d'Herculais、R.nemoralisHambleton、Ripersiella andensis

Hambleton、柑橘土粉蚧R. kondonisKuwana 等37种［2]。中国报道，为害咖啡叶部的粉蚧有双条拂粉蚧F. virgataCockerell［3]，为害咖啡根部的粉蚧有广布蚁粉蚧F. polysperes（Williams）、南洋臀纹粉蚧P. lilacinusCockerell、大洋臀纹粉蚧P. minorMaskell［4]和印度牦粉蚧Planococcoides robustus［5]。2018年笔者在云南省瑞丽咖啡种植园发现有粉蚧为害，并采用形态学与分子生物学对该粉蚧进行了鉴定，现将研究结果报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料

粉蚧标本采自云南省瑞丽市咖啡（Coffea arabica）植株地上部分，其中10头雌成虫用于形态学鉴定，6 头（雌虫3 头，若虫3 头）用于分子生物学鉴定。

1.2 方法

1.2.1 形态学鉴定

玻片标本的制作参照张江涛［4]方法，玻片显微形态特征观察使用Leica DM5000B 双筒光学显微镜观测、拍照。

1.2.2 分子生物学鉴定

1.2.2.1 DNA提取、PCR扩增

采用DNeasy Blood & Tissue Kit （Qiagen，Duesseldorf，Germany）试剂盒进行粉蚧DNA 提取。以文献报道的粉蚧通用引物组合PCOF（5’-CCTTCAACTAATCATAAAAATATYAG-3’）/LepR1 （5’-TAAACTTCTGGATGTCCAAAAAATCA-3’）［6]，扩 增P.citri的COI基因条形码序列区段，引物由生工生物工程（上海）股份有限公司合成。PCR 反应体系：模板DNA 1.5 μL，10×Buffer 2.5 μL，dNTPs 0.4 μL （10 mmol/L），上游引物和下游引物各0.4 μL （10 μmol/L），Taq 酶0.4 μL （2.5 U/μL），ddH2O 19.4 μL，总体积为25 μL。扩增程序为：94 ℃2 min；94 ℃40 s，45 ℃50 s，72 ℃50 s，5 个循环；94 ℃40 s，51 ℃50 s，72 ℃50 s，35个循环；72 ℃5 min。扩增反应在VeritiTM96-well Thermal Cycler （ABI-Applied Biosystems，USA）上进行。

1.2.2.2 电泳检测及序列测定

取5 μL PCR 扩增产物 在含有Gold viewII 的1.0%琼脂糖凝胶上以100 V 电泳分离45 min，然后，以凝胶成像系统分析电泳结果。最后，将经电泳检验合格的PCR产物直接送生工生物工程（上海）股份有限公司进行双向测序。

1.2.2.3 序列处理与分析

以MEGA 5.22［7]和Dna SP5.10.01［8]软件进行序列校正、拼接、多序列比对和单倍型多样性分析，并对COI基因所有的单倍型进行Blast，分析其与NCBI 数据库中同名种的序列一致性；然后，将测样本序列整合NCBI 中同名种和臀纹粉蚧属的其他粉蚧的序列（每种单倍型选用1 条序列），以NCBI 中的扶桑绵粉蚧Phenacoccus solenopsisTinsley 序列（GeneBank 登录号：AB858432））作为外群，用MEGA5.22 软件，采用HKY＋G＋I 模型，以最大似然法maximum likelihood（ML）构建系统进化树，并对各分支进行1000次Bootstrap检验。

2 结果与分析

2.1 为害特点

P.citri雌成虫和若虫吸食咖啡叶片、嫩稍、花和浆果（图1），造成咖啡叶片变黄枯萎、该蚧虫排泄的蜜露可引发煤污病，影响咖啡的光合作用。

2.2 形态特征

雌成虫（活体）虫体扁平，椭圆形，背面稍向上隆起，表面盖有白色蜡粉，体节明显，虫体边缘有17 对细长蜡丝，尾端蜡丝稍长（图2-A）。雌成虫（玻片）呈椭圆形，长1.96～2.52 mm，宽1.19～1.90 mm（图2-B）。触角全长410.5～429.6 μm，共8 节，第1 节长52.0～61.5 μm，第2 节长52.0～60.0 μm，第3 节长53.0～59.0 μm，第4 节长28.5～36.5 μm，第5 节长32.0～38.5 μm，第6节长30.5～38.0 μm，第7节长46.0～48.5 μm，第8节长97.5～102.5 μm（图3-A），眼位于触角之后近体缘，呈锥状。口器发达。足细长发达，前足基节长60.5～66.5 μm，转节＋腿节长216.0～255.0 μm，胫节+跗节长239.5～259.0 μm；中足基节长72.5～82.0 μm，转节＋腿节长256.0～270.0 μm，胫节＋跗节长265.0～301.0 μm；后足基节长86.5～94.0 μm，转节＋腿节长275.5～296.0 μm，胫节＋跗节长295.0～329.0 μm；后足基节、胫节有多个透明孔。爪粗壮，无爪齿。腹脐横椭圆形，位于第3、第4 腹节腹板间，有节间褶。肛环位于背末呈圆形，长约85.5 μm，宽75.5～82.5 μm，有6 根长环毛，长110.5～130.5 μm。尾瓣发达，腹面有硬化棒，刺孔群18 对。末对刺孔群C18有2 根锥刺，2～3 根附毛和多个三格腺（图3-B）。管腺长6.5～8.5 μm，宽3.0～3.5 μm，头部和胸部第8 刺孔群附近管腺20～50 个，在腹部体缘成群（图3-C）。与张江涛［4]、汤祊德［9]描述的柑橘臀纹粉蚧P.citri雌成虫形态特征基本一致。因此，该虫鉴定为柑橘臀纹粉蚧P. citri。

2.3 分子鉴定

2.3.1 PCR扩增及序列分析

以不同虫态的P. citri为对象，以COI基因条形码区段的通用引物进行PCR扩增，无论成虫还是若虫均可扩增出长度约为710 bp 的单一靶标片段（图4）。扩增片段经双向测序、拼接、比对和剪切处理后，各靶标片段大小均为666 bp。单倍型分析结果表明，6头P. citri的序列完全相同，为同一单倍型；将获得的P. citriCOI基因5’端的所有单倍型序列与NCBI 中P. citri的相应序列进行比对分析，其核苷酸序列一致性为99%～100%；与其它种相应核苷酸序列的一致性＜98%。

2.3.2 系统发育分析

整合NCBI 中臀纹粉蚧属粉蚧的序列，进行系统发育分析。结果显示，本研究中的P. citri与NCBI 中的P. citri聚为一支，分支支持率为90%（图5）。而且，臀纹粉蚧属的其他物种亦各自聚为一支，并共同构成臀纹粉蚧属分支。

3 讨论与结论

3.1 讨论

柑橘臀纹粉蚧P. citri寄主植物很多，报道有83 科239 种。我国报道的寄主植物有41 科85种，其中茜草科Rubiaceae 植物有：栀子Gardenia jasminoides、 白 纸 扇Mussaenda es-quiroill、团花Neolamarckia cadamba、龙船花Ixora chinensis等4 种［4]。目 前 国 内 尚 未 见P.citri为害咖啡的报道。P. citri是东南亚最为常见的粉蚧之一。由于该蚧腹面管腺数量常有不同程度的变异，极易与P. minor混淆。印度、菲律宾、越南和印度尼西亚有P. citri为害咖啡根部的记录，但Williams 在其对东方粉蚧的综述中未引用印度或菲律宾的材料，并认为是将P. minor误认为P. citri［2]。本研究通过形态学与分子生物学方法将该粉蚧鉴定为P. citri，鉴定结果可靠真实。

据郭俊等［10]报道，P. citri在云南瑞丽柠檬园的发生、分布与温湿度相关。7～10月份进入雨季，湿度大、温度高该虫在地上部分危害较重，4～6月份湿度较低，该虫在地下根部危害较重，并采用10%吡虫啉可湿性粉剂2000 倍液在P.citri低龄虫期，进行灌根，取得了较好的防治效果。本研究发现，P.citri可为害咖啡地上部分，尚未发现其为害咖啡根部，是由于本研究调查地点和时间范围的影响，还是该蚧不为害咖啡根部有待进一步研究，同时，P. citri、F. polysperes、P. lilacinus、P. minor和Pl. robustus等蚧虫在云南咖啡园的分布发生情况及流行动态还需作系统研究，以便制定合理的咖啡园蚧虫防治方案。

3.2 结论

形态学与分子生物学相结合的鉴定结果表明，该为害咖啡的粉蚧为柑橘臀纹粉蚧P.citri（Risso），隶属于半翅目（Hemiptera） 蚧总科（Coccoidea） 粉蚧科（Pseudococcidae） 臀纹粉蚧属（Planococcus）。