超高效液相色谱-串联质谱法测定苹果中辛硫磷残留

韩煜晖 张爱英 梅寒

摘 要：目的：建立检测苹果中辛硫磷残留的超高效液相色谱-串联质谱法（UPLC-MS/MS）。方法：样品经1%醋酸-乙腈溶液提取，PSA为净化剂，结合UPLC-MS/MS技术，采用正离子多反应监测（MRM）模式进行检测。结果：辛硫磷检出限为1.0μg/kg，定量限为4.0μg/kg，在2.0～100.0ng/mL范围内呈现良好的线性关系，相关系数R2>0.999，在4.0、8.0、40.0μg/kg的加标水平下回收率在82.71%～102.10%，相对标准偏差（RSD）在0.72%～3.10%。 结论：该方法快速简便、灵敏度高，能很好的满足苹果中辛硫磷残留的检测要求。

关键词：超高效液相色谱-串联质谱;苹果;辛硫磷

中图分类号 S859.84文献标识码 A文章编号 1007-7731（2019）23-0111-03

Determination of Phoxim in Apple by Ultra Performance Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry

Han Yuhui et al.

（Anhui grain and oil products quality supervision and testing station，Hefei 230000，China）

Abstract：Objective：To establish a method to detect the residue of Phoxim in apple by ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry（UPLC-MS/MS）. Methods：The sample was extracted by 1% acetic acid-acetonitrile，cleaned-up by PSA ，then detected by UPLC-MS/MS under multiple reaction monitoring mode （MRM） .Results：The limits of detection （ LOD） of Phoxim was 1.0 μg/kg ，while limits of quantification （ LOQ） was 4.0 μg/kg，the linear ranges were 2.0～100.0 ng/mL and the correlation coefficients （ R2） was above 0.999.The recoveries in samples were between 82.71%～102.10% at three spiked levels （4.0，8.0，40.0 μg/kg） ，with relative standard deviations of 0.72%～3.10%（n=6）.Conclusion：The method was convenient ，simple ，accurate and high efficiency，and can be applied to the determination of the residue of Phoxim in apple.

Key words：Ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry;Apple;Phoxim

近年來，我国消费者对水果蔬菜的安全问题日益关注，而果蔬中的农药残留是影响其食用安全性的最大因素，因而人们开始重视果蔬中农药残留的检测。辛硫磷作为高毒有机磷农药的替代品，是当前农业生产中应用较多的杀虫剂之一。目前，果蔬中的辛硫磷残留检测方法主要有气相色谱法[1-3]和液相色谱法[4-6]，而由于辛硫磷在高温下易分解，限制了气相色谱法的检测;液相色谱法也因为其专一性差、易受杂质干扰等缺点未能得到广泛的应用。液相色谱-串联质谱因其抗基质干扰能力强、灵敏度高、分析速度快等优点而被广泛应用到于水果中的农残检测中[7-8]。与此同时，QuEChERS技术具有快速、简便且价格低廉等特点，是当前果蔬农残检测中应用较广的一种样品前处理方法[9-11]。

周霞等结合QuEChERS技术和液相色谱-串联质谱法研究了辛硫磷在春笋中的残留[12]，但当前关于苹果中辛硫磷的残留分析文献报道仍较少。为此，本研究基于QuEChERS技术，采用超高效液相色谱-串联质谱法（UPLC-MS/MS），建立了快速检测苹果中辛硫磷农药残留的方法，并将此方法应用于实际样品的分析。结果显示，该方法准确、可靠，并缩短了样品的检测时间，可以满足分析的要求。

1 材料与方法

1.1 仪器与设备 超高效液相色谱-质谱联用仪（型号Waters Xevo TQD，美国沃特世公司）;十万分之一电子天平（型号XA105DU，瑞士Mettler Toledo公司）;高速冷冻离心机（型号Multifuge X1R，美国赛默飞世尔科技公司）;高速匀浆机（型号IKA T25，德国IKA公司）;涡旋混合仪（型号IKA MS3，德国IKA公司）。

1.2 材料与试剂 辛硫磷（Phoxim）标准品（1000mg/L，农业部环境质量监督检验测试中心）;乙腈（色谱纯，德国默克公司）;甲酸、醋酸（色谱纯，上海安谱实验科技股份有限公司）;实验用水为Milli-Q纯水仪制备的超纯水（美国密理博公司）;检测样品为市售苹果。

1.3 实验方法

1.3.1 色谱条件 色谱柱：Waters UPLC BEH C18柱（2.1×50mm，1.7μm）;流动相：0.1%甲酸水溶液（A）和乙腈溶液（B），梯度洗脱见表1。流速：0.3mL/min;柱温：35℃;进样量：10μL。

1.3.2 质谱条件 离子源：ESI源;扫描方式：正离子扫描;扫描模式：MRM（多反应监测）模式;喷雾电压：3200;离子源温度：500℃;辛硫磷质谱信息见表2。

1.3.3 标准溶液配制 准确吸取一定量的标准物质，用甲醇配置成浓度100mg/L的标准储备液，-20℃条件下保存。制备空白的苹果基质溶液，以此空白基质配制浓度为2、4、8、20、40、100ng/mL的标准系列。

1.3.4 样品制备 按照相关标准对苹果进行处理，用匀浆机破碎混匀，制成待测样，-20℃冷冻保存。称取10.0g样品于离心管中，加入20mL 1%醋酸-乙腈溶液，加入2颗玻璃均质子，然后加入1g NaCl，4g无水Mg SO4，0.5g柠檬酸氢二钠和1g柠檬酸钠，涡旋震荡1min，8000r/min离心5min，取10mL上清液加入含有150mg PSA（乙二胺-N-丙基硅烷）和900mg无水MgSO4的离心管中，涡旋震荡1min，8000r/min离心5min，取1mL上清液过0.22μm有机滤膜，待UPLC-MS/MS检测分析。

2 结果与分析

2.1 方法条件优化

2.1.1 样品前处理方法 本实验以QuEChERS技术为基础进行样品处理。水果样品的农残分析中一般采用乙腈、甲醇或者丙酮为提取溶剂，有文献报道甲醇和丙酮的提取效率较差[13-14]，另外根据辛硫磷本身的性质，其在酸性条件下不易分解，因而本实验选定1%醋酸-乙腈溶液为提取溶剂。苹果样品含水量高，且含有较多的有机酸和糖类等杂质，因此，在提取过程中加入氯化钠和柠檬酸钠进行盐析和除杂，加入无水MgSO4除去多余的水分，在净化过程中加入PSA作为固相萃取吸附剂，去除有机酸等杂质。

2.1.2 色谱条件 样品提取溶剂选择酸化乙腈，为减少色谱分析过程中的溶剂效应，本实验流动相采用水-乙腈体系。水相中加入适量酸能促进化合物电离，提高其响应值和灵敏度。因此，选择0.1%甲酸水溶液为A相，乙腈为B相。实验选择Waters UPLC BEH C18柱，1.7μm的粒径和超高压的耐受能带来更好的分离度和灵敏度。流动相的梯度洗脱程序见表1。采用此条件对辛硫磷进行分析，总分析时长5min，目标物的保留时长1.97min。

2.1.3 质谱条件 采用仪器自带的Masslynx软件来优化目标物的质谱条件，运行Intellistart功能对目标物分别进行一级全扫描和二级质谱扫描，最终得到优化后的母离子、子离子、碰撞电压等参数。其中，以响应值最大的子离子为定量离子。对辛硫磷标准溶液进行分析，得到其MRM模式下的离子提取图，详见圖1。

2.2 方法学验证

2.2.1 线性方程、检出限及定量限 用空白的苹果基质溶液配制浓度分别为2.0、4.0、8.0、20.0、40.0、100.0ng/mL的标准溶液。按照上述分析条件测定，以目标物的峰面积（Y）对浓度（X，ng/mL）建立标准曲线，如图2所示。从图2可以看出，其线性回归方程为Y=7371.3X+3283.04，相关系数R2=0.999020，说明辛硫磷在2.0～100.0ng/mL范围内呈现出了良好的线性关系。以信噪比S/N≥3确定方法的检出限（LOD），S/N≥10确定方法的定量限（LOQ），得出LOD=1.0μg/kg，LOQ=4.0μg/kg。

2.2.2 加标回收率和精密度 本实验采用标准加入法进行回收率和精密度的考察，在空白苹果样品中加入不同浓度的标准溶液，制成加标含量分别为4.0、8.0、40.0μg/kg的样品，按照“1.3.4”样品制备方法进行处理，每个浓度水平做6个平行样品。由表3可知，苹果中辛硫磷3个水平的加标回收率在82.71%～102.10%，相对标准偏差（RSD）在0.72%～3.10%;方法的回收率和精密度均符合农残分析的要求。

2.3 实际样品测定 利用本实验建立的分析方法对市售的6种苹果样品进行了辛硫磷残留的检测，结果均未检出残留。

3 结论

本研究基于QuEChERS技术，采用超高效液相色谱-串联质谱法（UPLC-MS/MS），建立了一种快速、简便、准确检测苹果中辛硫磷农药残留的方法，缩短了样品分析检测的时间，同时保证了结果的准确性。该方法灵敏度高、回收率稳定、重复性良好，能很好的满足苹果中辛硫磷残留的检测要求。

参考文献

[1]朱鲁生，王军.甲氰菊酯和辛硫磷混合剂在苹果及土壤中的残留分析[J].农药，2000，39（2）：21-22.

[2]李静，徐国峰，聂继云，等.分散固相萃取-气相色谱法测定水果中辛硫磷农药残留量[J].中国果蔬，2008（1）：64-66.

[3]樊海燕，田瑞华.气相色谱法快速检测辛硫磷残留[J].内蒙古石油化工，2002，28（4）：11-12.

[4]李欣，郑琦，李锋格.高效液相色谱法测定番茄酱中辛硫磷残留[J].分析科学学报，2012，28（4）：590-592.

[5]王勇，周宏琛，闫秋成，等.高效液相色谱法测定浓缩胡萝卜汁中辛硫磷残留量[J].2006，25（6）：81-83.

[6]仲伶俐，李曦，李华仙，等.高效液相色谱法测定果蔬中的5种农药残留[J].食品安全质量检测学报，2017，8（5）：1778-1782.

[7]Ramadan G，Al Jabir M，Alabdulmalik N，et al. Validation of a method for the  determination of 120 pesticide residues in apples and cucumbers by LC-MS/MS [J].Drug Test Anal，2016，8（5）：498-510.

[8]林涛，邵金良，刘兴勇，等.超高效液相色谱-串联质谱法测定热带水果中杀虫双残留[J].色谱，2018，36（12）：1223-1227.

[9]Anastassiades M，Lehotay SJ，Stajnbaher D. Fast and easy multiresidue method employing acetonitrile extraction/partitioning and “dispersive solid-phase extraction” for the determination of pesticide residues in produce [J]. J AOAC Int，2003，86（2）：412-431.

[10]李俊芳，景伟文，李德强，等.分散固相萃取-超高效液相色谱-串联高分辨质谱法测定新疆苹果中7种农药残留[J].食品科学，2018，39（8）：295-301.

[11]王利强，葛含光，王永芳，等.QuEChERS-高效液相色谱-串联质谱法测定苹果中丁醚脲及其代谢物残留量[J].食品安全质量检测学报，2015，6（2）：431-436.

[12]周霞，陈万勤，陈晶燕，等.QuEChERS-高效液相色谱-串联质谱法测定春笋中4种农药残留[J].中国食品卫生杂志，2018，30（5）：486-490.

[13]林涛，邵金良，刘兴勇，等.QuEChERS-超高效液相色谱-串联质谱法测定蔬菜中41种农药残留[J].色谱，2015，33（3）：235-241.

[14]吴成，程刚，赵志强，等.液相色谱-串联质谱法测定苹果中水胺硫磷[J].化学分析计量，2016，25（4）：78-80.

（责编：张宏民）