外周血CD4+T细胞亚群中趋化性细胞因子受体5的表达水平与颈动脉狭窄的相关性研究

陈增光, 纪 元, 陈 新, 刘 宇, 周长乐, 郭建路

(南京医科大学附属常州第二人民医院 心内科, 江苏 常州, 213164)

颈动脉粥样硬化是缺血性脑卒中的重要危险因素。炎症免疫反应在动脉粥样硬化过程中发挥着关键作用，存在于动脉粥样硬化斑块中活化的T细胞则提示其可影响疾病的进展[1-3]。趋化性细胞因子受体5(CCR5)在炎症免疫应答过程中发挥着归巢作用，是T细胞功能活化标志物之一[4]。研究[5]表明，CCR5及其配体对CD4+T细胞迁移到动脉粥样硬化斑块中起到了关键性作用，进而引起动脉粥样硬化的加重。本研究探讨了外周血CD4+T细胞亚群中CCR5的表达水平与颈动脉狭窄之间的关系，现报告如下。

1 资料和方法

1.1 一般资料

选取2016—2018年在本院就诊或体检且经颈动脉彩超证实颈动脉狭窄的84例患者设为颈动脉狭窄组，并将经颈动脉彩超证实颈动脉正常的45名受检者设为对照组。采用颈动脉彩超测量颈动脉狭窄率，并根据狭窄率的不同将颈动脉狭窄组分为3个亚组，即轻度狭窄组(狭窄率<50%)30例、中度狭窄组(狭窄率50%～<70%) 28例; 重度狭窄组(狭窄率70%～99%) 26例[6]。对照组45例为颈动脉正常者，彩超未见颈动脉狭窄，且颈动脉内膜中层厚度(IMT)<0.9 mm。排除标准: ① 既往3个月内出现如急性冠脉综合征、脑卒中等严重心脑血管事件; ② 严重心、肝、肾功能不全; ③ 各种急慢性感染、自身免疫性疾病、恶性肿瘤患者; ④ 近3周服用免疫抑制剂、血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)或血管紧张素受体拮抗剂(ARB)类降压药; ⑤ 其他严重疾病。

1.2 方法

1.2.1 颈动脉狭窄率的测量方法: 采用IE33超声心动图仪，探头频率为7 MHz, 以二维实时显像探查颈动脉，测量颈动脉最严重狭窄处残留管腔内径及原始管腔内径，用于计算颈动脉狭窄率。狭窄率=(原血管管径-残留管径)/原血管管径×100%。

1.2.2 标本收集及检测方法: 在空腹状态下，经肘静脉抽取受试者静脉血5 mL，检测肝功能、肾功能、血脂、血糖，并采用流式细胞术检测外周血CD4+T细胞亚群中CCR5(CD4+CCR5)的表达水平以及CD4+亚群在T细胞中的占比(CD3+CD4+)。

1.3 统计学处理

采用SPSS 21.0统计学软件分析本研究数据，两独立样本均数的比较采用t检验，多组间均数的比较采用One Way ANOVA方差分析，组间多重比较采用LSD-t检验，计数资料的比较行χ2检验,P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 一般资料比较

各组间年龄、性别、高血压、血脂异常、糖尿病、吸烟等一般资料比较，差异无统计学意义(P>0.05), 见表1。

表1 各颈动脉狭窄亚组与对照组的一般资料比较

BMI: 体质量指数。

2.2 各组间CD4+CCR5及CD3+CD4+比较

流式细胞术检测结果显示，颈动脉狭窄组的CD4+CCR5表达水平高于对照组，各颈动脉狭窄亚组的CD4+CCR5表达水平也高于对照组，差异均有统计学意义(P<0.05); 重度狭窄组CD4+CCR5表达水平高于轻度狭窄组，差异有统计学意义(P<0.05); 各组间CD3+CD4+比较，差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。

3 讨 论

免疫细胞存在于动脉粥样硬化病变发展的所有阶段[7-9]。病变中的适应性免疫细胞主要是T细胞，而大多数病变T细胞为辅助T细胞(Th), 其中Th1细胞是CD4+T细胞的主要部分[10-12]。早期的动物研究中, CD4+T细胞在动脉粥样硬化中的重要性已得到证实，其中CD4+T细胞的转移[13]加剧ApoE-/-小鼠的动脉粥样硬化，而CD4+T细胞缺乏[14]则产生减轻的效果。动脉粥样硬化发生和发展的最关键因素和起始步骤是脂质的循环水平升高，这会引起慢性炎症，进而将趋化因子吸引到动脉壁中[15], 该过程主要由Th介导完成。

表2 各组CD3+CD4+与CD4+CCR5表达水平比较

CCR5: 趋化性细胞因子受体5。与对照组比较, *P<0.05; 与轻度狭窄组比较, #P<0.05。

研究[16-17]发现, CCR5与动脉粥样硬化发病过程密切相关。在T细胞趋化因子的引导下，活化后的Th1细胞迁移到病灶中发挥炎症反应作用，而CCR5扮演着关键性角色[18], 其所发挥的Th1细胞的归巢作用是不可替代的[19]。一项关于遗传危险因素表征与人动脉闭塞性疾病导致的腹主动脉瘤研究发现，严重动脉狭窄(颈动脉超声检查发现颈动脉狭窄程度>50%)患者中CCR5Δ32缺失突变与对照组相比更有意义[20]。研究[21]发现，在系统性红斑狼疮患者中，随着时间推移, CD4+CCR5水平对颈动脉粥样硬化斑块厚度具有预示作用，但其未对颈动脉狭窄程度进一步细化。本研究不仅根据有无颈动脉狭窄进行分组，还根据颈动脉狭窄程度分为3个亚组，旨在分析CD4+T细胞CCR5的表达水平与颈动脉狭窄程度的相关性。结果显示，颈动脉狭窄组CD4+CCR5表达水平高于对照组，各亚组CD4+CCR5表达水平亦均高于对照组，重度狭窄组CD4+CCR5表达水平高于轻度狭窄组，不仅表明CD4+T细胞的活化参与了颈动脉粥样硬化及斑块形成，而且可能对颈动脉狭窄程度的判断有一定提示作用。但值得注意的是，本研究中度狭窄组CD4+CCR5表达水平并未与轻度、重度组之间形成差异性的梯度关系。这可能是由于本研究将颈动脉狭窄患者常规按颈动脉狭窄率的不同分为轻、中、重组(狭窄率并未等分)，中度狭窄组与轻度、重度组的狭窄率差值相对较小，从而导致组间无显著差异。另外，本研究纳入样本量较少，研究数据可能存在一定偏倚，故尚需增加样本量、改良分组方法等进一步验证。

综上所述，外周血CD4+T细胞CCR5表达水平的升高与颈动脉狭窄关系密切, CD4+T细胞的活化参与了颈动脉斑块的形成及进展。CD4+CCR5表达水平与颈动脉狭窄的不同程度存在一定相关性，对判断颈动脉狭窄程度可能有一定的提示作用。