微粒子化学发光法在HIV抗体筛查试验中的应用

邵淑丽 孙梅 李刚 王晓伟 姚继承 宋宇 曲业敏 王明义＊

1 威海市立医院中心实验室 （山东 威海 264200）

2 威海威高生物科技有限公司 （山东 威海 264200）

内容提要： 目的：分析微粒子化学发光法在HIV筛查试验中的应用价值。方法：采用微粒子化学发光法对本院2017年2月～2019年4月所有筛查HIV抗体的患者进行初筛检测，免疫印迹法（WB）对初筛阳性标本进行确证试验。结果：84482份血清标本中，共筛检出有反应性血清86例，除拒绝做确认的9例，其余经WB方法进行确认后，63例为阳性，2例为不确定，12例为阴性。结论：微粒子化学发光法检测HIV抗体的灵敏度较高，对患者结果应结合临床资料及确认试验结果综合判断。

我国的人类免疫缺陷病毒（HIV）流行有数十年，随着感染者和临床患者的不断增加，流行模式表现复杂，艾滋病的预防控制面临巨大的挑战。因此，寻求高敏感性、特异性，又简便、快速的HIV检测技术可以尽早发现HIV感染者和艾滋病患者，及早提供咨询、治疗手段[1]。微粒子化学发光免疫分析（MCIA)是一种新型的免疫学检测技术，检测样本的S/CO值明显高于ELISA方法，对于抗体效价较低的弱阳性血清样本，有利于早期发现HIV感染。AutolumiS 3000微粒子化学发光检测试剂盒2017年2月在本院投入使用以来，至2019年4月共检测84482例患者血清标本，现将结果报道如下。

1.材料与方法

1.1 标本来源

2017年2月～2019年4月，威海市立医院术前检查患者共计84482例，其中男38434例，女46048例，年龄0～97岁。标本收到后立即以4000r/min离心10min，然后上机检测。

1.2 仪器和试剂

威海威高生物科技有限公司生产AutolumiS 3000全自动化学发光测定仪及配套的微粒子化学发光免疫分析（MCIA)试剂，可检测血清中抗-HIV(1+2)型抗体，质控品和定标液均购自威高生物科技有限公司。HIV1+2胶体金试剂盒购自艾博生物医药（杭州）有限公司，试剂盒在有效期内使用。

1.3 方法

采用AutolumiS 3000微粒子化学发光法检测样品中的抗-HIV(1+2)型抗体，S/CO≥1则可考虑样本对HIV抗体有反应性，对初次用AutolumiS 3000微粒子化学发光法进行筛查试验S/CO≥1有反应性的样本进行4000r/min离心15min后复检，复检后仍为S/CO≥1有反应性的样本通过胶体金试验再次进行复检，将复检至少有一种试剂呈阳性反应的样本送威海市疾病预防控制中心（CDC）通过免疫印迹法（WB）进行确认。

1.4 结果统计

使用Microsoft Excel对数据进行整理统计，再使用SPSS对数据进行统计学分析。

2.结果

2.1 免疫印迹法确认试验结果

AutolumiS 3000微粒子化学发光法筛查HIV S/CO≥1有反应性的血清样本86份，其中9例患者拒绝做确认试验，余下77份血清经WB确认阳性63份，阴性12份，不确定2份，AutolumiS 3000微粒子化学发光法检测HIV筛查结果与WB的符合率为81.8%。

2.2 微粒子化学发光法（MCIA）检测不同S/CO值与免疫印迹法（WB）结果比较，比较结果见表1。

表1. 63例阳性标本MCIA及WB 试验结果

由表1可看出，以WB检测结果为“金标准”，微粒子化学发光法检测S/CO值≥100时，100%为HIV阳性。也就是说，当AutolumiS 3000检测结果S/CO值＜100时，WB确认试验结果有可能为阴性或不确定。S/CO值越低，WB检测结果为阴性的可能性越大。

2.3 WB确证试验结果的条带特征

确证试验为HIV阳性的63份样本带型中，出现＞9条带26份（41.2%），5～8条带36份（57.1%），3～4条带1份（1.59%）（图1）。gp120、gp160、gp66、gp41、p24条带出现的百分率最高，为100%；gp36最低，为8.7%。

图1. WB确证HIV试验结果条带特征

2.4 威海地区HIV流行状况分析

威海地区HIV筛查的总反应率为0.1%，WB确证试验HIV阳性率0.07%，与中国疾控中心、联合国艾滋病规划署、世界卫生组织联合评估的全人群感染率9.0/万基本一致，说明威海处于低流行水平。而确证HIV阳性的63例患者中：男性53例（84.1%），女性10例（15.9%），P＜0.01，差异有统计学意义；威海本地32例，占50.8%，外来人员以黑龙江、云南为主，分别占12.7%、11.1%。

3.讨论

国务院办公厅关于印发中国遏制与防治艾滋病“十三五”行动计划的工作目标是最大限度发现感染者和患者，来自CDC的资料显示，我国艾滋病抗体检测的人次数从2012年的1.0亿上升到2017年的2.0亿。艾滋病检测是艾滋病防治工作的重要组成部分。

本实验室采用AutolumiS 3000微粒子化学发光法与WB的符合率为81.8%，与雅培化学发光法的符合率相似[2]，符合率都略低，HIV抗体确证结果与筛查试验的符合率因筛查方法、送检人群的不同存在较大差异[3-5]。这些样本都来源于本院术前筛查时的HIV初筛有反应性的血清样本，应属于HIV感染的低危人群。HIV抗体检测结果不确定见于HIV感染早期，本院为综合性医院，就诊的患者中不乏自身免疫性疾病、免疫接种、妊娠、肝肾功能衰竭、其他反转录病毒感染等，这些会导致机体产生类似HIV特异性抗体的蛋白成分或一些异常蛋白质干扰引起非特异性反应[6,7]。对结果不确定受检者的随访外，实验室可以通过其他抗体确证试剂复检、核酸检测等方法做出早期诊断或排除HIV感染[8,9]。

微粒子化学发光法检测S/CO值≥100时，100%为HIV阳性。也就是说，当AutolumiS 3000检测结果S/CO值＜100时，WB确认试验结果有可能为阴性或不确定。S/CO值＜10的样本占WB确认试验阴性结果的75%，由此可见S/CO值越低，WB检测结果为阴性的可能性越大。但是国外研究显示，化学发光法有时高S/CO值也可能为HIV假阳性，因此进行确认试验是必要的[10]。

从本研究结果看，AutolumiS 3000微粒子化学发光法检测HIV抗体的灵敏度较高，可以满足艾滋病抗体筛查的需要，同时假阳性率也较高，因此我们要慎重对待每一位疑似患者。实际工作中，可以通过重新采集血样复检，增加HIV核酸检测等手段排除一些非特异性反应。针对不同的人群，采用不同的检测策略，并结合流行病学资料综合分析，最大限度地预防艾滋病的传播。