细胞核分布基因C结构域1在非小细胞肺癌中的表达及其意义

李贺鹏

（漯河医学高等专科学校第二附属医院 外科，河南 漯河 462300）

非小细胞肺癌临床上比较常见，约占肺癌总数的80%～85%，70%患者初诊时均为晚期，发病率和死亡率较高。目前该病的治疗主要注重手术治疗，但术后预后不佳［1］。因此，寻找新的标记物阻断癌细胞的浸润和转移为目前临床研究热点。细胞核分布基因 C （nuclear distribution gene C,NudC）参与了细胞有丝分裂、细胞周期和迁移。细胞核分布基因C 结构域1（NudC domain containing 1,NudCD1）作为该家族的成员之一，在癌症中具有重要生物学功能［2］。但NudCD1 在非小细胞肺癌中的表达及其意义尚不清楚。本研究采用免疫组化检测了NudCD1 在非小细胞肺癌组织及癌旁组织的表达情况，并分析了其与患者的预后关系，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2011 年1 月至2014 年 1 月在本院接受治疗的116 例肺癌患者，收集所有患者的癌组织和癌旁组织石蜡标本。其中男63 例，女53 例；年龄25～84 岁，中位年龄59 岁。治疗前患者均未接受化疗等其他治疗，研究前所有患者均告知并知情同意，并经院伦理委员会批准。

1.2 NudCD1在癌组织和癌旁组织的表达

采用免疫组化SP 法，实验中所用NudCD1（1∶150）兔抗人一抗从Zymed Laboratories 公司购买、SP 免疫组化试剂盒购于福州迈新生物公司。将标本连续4 μm 切片，再脱蜡、水化、抗原修复后石蜡切片放入3% 的 H2O2-甲醇溶液浸泡10 min，消除内源性过氧化物酶，PBS 冲洗3 次，滴加封闭液孵育10 min。滴加一抗，湿盒内孵育60 min，PBS 冲洗 3 次。滴加二抗 37℃孵育10 min，PBS 冲洗3 次，滴加链亲和素标记的HRP，孵育 10 min，PBS 冲洗 3 次，DAB 显色，苏木精复染，脱水、透明、镜检。以PBS 代替一抗作阴性对照。NudCD1 以肿瘤细胞浆着色为阳性细胞，由两位病理科医师结合染色细胞所占百分比和染色强度做出判断。按阳性细胞所占肿瘤细胞的百分比评分：0 分（无染色细胞），1 分（＜10%），2 分（10%～50%），3 分（＞50%），再按显色程度记分：0 分（无染色细胞），1 分（细胞被染浅黄色），2 分（棕黄色），3 分（棕褐色），两者相加≥3 分为阳性，0～3 分为阴性。

1.3 统计学方法

采用SAS 9.0 软件对实验数据进行统计分析。应用t检验对计量资料、χ2对计数资料进行统计分析，应用Kaplan-Meier 生存曲线和log-rank 检验进行生存分析，P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 NudCD1在肺癌组织中的表达

本研究共纳入116 例患者，免疫组织化学显示NudCD1 主要在细胞质中表达，为棕褐色。本研究非小细胞肺癌石蜡标本中NudCD1 阳性表达99 例，阳性表达率85.3%。癌旁组织NudCD1 阳性表达29 例，阳性表达率25%。见图1。

图1 NudCD1 在肺癌组织中的表达（×200）（A：癌组织；B：癌旁组织）

2.2 NudCD1与肺癌病理、临床特征的关系

NudCD1 蛋白表达增加与肺癌的病理分级、淋巴结转移、临床分期密切相关，而与患者性别、年龄、肿瘤大小无关。见表1。

2.3 NudCD1与肺癌生存的相关分析

在非小细胞肺癌组织中，NudCD1 蛋白高表达的患者与低表达的患者相比，总生存较差，两组整体生存曲线分布比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。见图2。

图2 Kaplan-Meier 生存曲线

2.4 多因素Cox回归分析

Cox 逐步多因素分析显示，淋巴结转移、组织学分级、临床分期和NudCD1 均是肺癌患者预后的独立影响指标。见表2。

该Cox 回归模型还包括了年龄、性别、肿瘤大小等。

表1 NudCD1 与肺癌病理、临床特征的关系

表2 多因素Cox 回归分析

3 讨论

NudCD1 作为NudC 蛋白家族的成员之一，在癌症中存在潜在的重要生物学功能。NudCD1 作为原癌基因，与肿瘤的发生和发展关系密切，一方面可以导致染色体异常排列，细胞出现多个细胞极［3］。此外，NudCD1 还可以直接调控肿瘤进展，诱导肿瘤细胞扩散/入侵。人NudCD1 基因位于染色体8q23.3，参与了肾癌、结直肠癌、前列腺癌等发生和进展，但有关非小细胞肺癌鲜有报道［4］。本研究中，非小细胞肺癌石蜡标本中NudCD1 阳性表达率85.3%，明显高于癌旁组织NudCD1 阳性表达率（25%），表明NudCD1 与肿瘤的发生和发展关系密切。NudCD1 高表达与年龄、性别、肿瘤大小等因素无关，这与NudCD1 在其他肿瘤中表达结果一致。在淋巴结转移、组织学分级G2+G3期、临床分期Ⅲ+Ⅳ期中NudCD1 表达明显高于无淋巴结转移、组织学分级G1 期、临床分期Ⅰ+Ⅱ期，这可能与NudCD1 促进肿瘤细胞迁移和浸润有关，同时也说明NudCD1 表达水平可以作为临床诊断、预测以及疗效监测新的标志物。

恶性肿瘤的发生和进展包含了多因素、多阶段的过程，并由多种因素彼此作用。本研究通过Cox 模型进行逐步回归分析，结果显示淋巴结转移、组织学分级、临床分期和NudCD1 均是肺癌患者预后的独立影响指标。这些也都说明NudCD1参与了非小细胞肺癌细胞生物学活性。可以说NudCD1 高表达与肿瘤进展程度有关，并与其他指标存在关联性。HAN 等［5］研究发现，NudCD1 在结肠癌组织中高度表达，参与了上皮细胞-间充质转化，这也是癌症进展的关键过程，同时抑制了细胞凋亡促进结肠癌的发生和转移。HE 等［6］研究发现，NudCD1 上调会出现多核形态的束状结构异常微管，促进细胞分裂和迁移。这些都说明NudCD1 与肿瘤的发生和进展有关。本研究5 年随访显示，NudCD1 基因阳性表达患者的5 年存活率明显低于低表达患者，提示NudCD1 与患者的生存期相关，这也间接说明NudCD1 可以反映非小细胞肺癌患者预后，并可以作为非小细胞肺癌治疗的新靶点。

总之，NudCD1 在非小细胞肺癌组织表达均上调，与非小细胞肺癌的发生、进展以及临床预后密切相关，提示NudCD1 可以作为治疗非小细胞肺癌新的靶点。