ELISA法检测梅毒特异性抗体假阳性分析

潘丽艳 晏燕

梅毒是由苍白密螺旋体苍白亚种感染引起的一种慢性、系统性性传播疾病，可引起人体多系统多器官损害，产生多种临床表现，导致组织破坏，功能失常，甚至危及生命。近年来我国梅毒感染率呈现上升趋势[1-2]。梅毒血清学检查是诊断梅毒的重要依据。当人体感染梅毒螺旋体后，主要产生梅毒特异性抗体和梅毒非特异性抗体。梅毒特异性抗体包括IgM 抗体和IgG 抗体。IgM 抗体感染2 周后即可测出；可消退；不能通过胎盘。IgG 抗体感染第4 周产生，可终生存在；能通过胎盘，来自于母亲的IgG 抗体在6 个月多数消退，15 个月基本消退。目前检测梅毒特异性抗体的实验方法有酶联免疫吸附试验（ELISA）、梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验（TPPA）、化学发光（CLIA）等等，ELISA 法价格低廉，操作方便，灵敏度高，特异性强而被广泛使用[3]。但是ELISA 法存在一定的假阳性。就此问题，本研究用ELISA 法检测了31 036 例患者，阳性样本再采用TPPA 方法进行确认，分析ELISA 法检测梅毒特异性抗体的假阳性情况，现将结果报道如下。

1 材料和方法

1.1 标本来源及患者资料

血清标本来自吉林省一汽总医院2018 年4 月1 日—2018 年10 月25 日，门诊及住院患者31 036 例，均为常规筛查梅毒特异性抗体，年龄18～99 岁，平均（56.85±17.71）岁，其中男16 264 例，女14 772 例。

1.2 试剂

ELISA 法采用英科新创（厦门）科技有限公司生产的梅毒螺旋体抗体诊断试剂盒。TPPA 采用富士瑞必欧株式会社生产的梅毒螺旋体抗体检测试剂盒。试剂在有效期内使用。

1.3 主要仪器

烟台艾德康生物科技有限公司生产的全自动酶免分析仪。

1.4 方法

所有标本先采用TP-ELISA 方法检测，阳性标本再采用TPPA方法进行确认，步骤严格按照说明书操作。将阳性标本按S/CO 将标本分为1 ≤S/CO ＜4 和S/CO ≥4 两组，按年龄将患者分为＜65岁和≥65 岁两组，分析TP-ELISA 法假阳性情况。

1.5 统计学方法

应用SPSS 16.0 软件，采用χ2检验。P＜0.05 为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 ELISA 法假阳性的性别差异

ELISA 法检测阳性900 例，其中男性594 例，女性306 例。经TPPA 确认，结果见表1。男性565 例为阳性，ELISA 法假阳性率4.88%，女性294 例为阳性，假阳性率3.92%。两组结果差异无统计学意义（χ2=0.43，P＞0.05）。由此可见ELISA 法检测梅毒特异性抗体假阳性率无性别差异。

2.2 ELISA 法不同S/CO 的假阳性率差异

ELISA 法1 ≤S/CO ＜4 有104 例，S/CO ≥4 有796 例，经TPPA 确认结果见表2。1 ≤S/CO ＜4 组假阳性率21.15%，S/CO≥4组假阳性率2.39%，两组比较差异有统计学意义（χ2=70.25，P＜0.05），且低S/CO 组假阳性率明显高于高S/CO 组。

2.3 ELISA 法假阳性的年龄差异

ELISA 法检测＜65 岁组阳性528 例，≥65 岁组372 例，经TPPA 确认，结果见表3。＜65 岁组假阳性率3.20%，≥65 岁组假阳性率6.45%，两组比较差异有统计学意义χ2=4.52，P＜0.05），≥65 岁的假阳性率高于＜65 岁。

3 讨论

梅毒血清学检查是梅毒诊断的重要依据之一，有两种筛查流程，一种先用梅毒非特异抗体进行初筛，阳性结果用梅毒特异性抗体试验进行证实，另一种先用梅毒特异性抗体进行初筛，然后对初筛后的阳性结果进行梅毒非特异抗体检测以评估临床是否需要治疗干预[4]。TP-ELISA 是采用特异性抗原TP 47 及TP 17 包被微孔板，特异性抗原经基因重组，以双抗原夹心法测定梅毒螺旋体特异性免疫球蛋白G 与免疫球蛋白M 抗体[5]。TPPA 法是筛检梅毒螺旋体抗体阳性标本的确诊试验，TPPA 法用超声将梅毒螺旋体裂解，梅毒螺旋体与致敏红色明胶颗粒结合，形成肉眼可见的红色凝集反应，具有高度敏感性及特异性，但操作复杂，需人工判读结果，不适合大样本量检测，其应用受到限制[6]。由于ELISA试剂盒中没有配置吸收稀释剂，若待测血清中存在非梅毒螺旋体交叉反应的抗体，会出现假阳性，因此目前认为若TP-ELISA 法检测为阳性时，应再次予TPHA、TPPA 或WB 法以验证[7]。本研究显示，TP-ELISA 存在一定比例的假阳性，在男性和女性中，这种假阳性率基本一致，差异无统计学意义（P＞0.05）。另外本研究显示在TP-ELISA 弱阳性样本中，其假阳性率更高。而年龄因素对TP-ELISA 假阳性影响比较大，老年人假阳性率偏高，这与很多文献报道一致[8-9]。其原因可能为：（1）老年人生理功能逐步退化，容易出现免疫功能的异常，产生一些针对链接用的清蛋白抗体或一些异常蛋白质而干扰了ELISA 检测出现假阳性[10]。（2）疾病因素：心血管疾病的患者大都存在血脂异常，体内大部分存在抗类脂抗体，凡能导致产生类脂质抗体的疾病均能导致假阳性产生。老年人是心血管疾病的高发人群。还有老年人易患自身免疫病、糖尿病、癌症，易被细菌、病毒感染，这些疾病可使机体诱导产生类脂质抗体或抗TP 抗体交叉抗原[11]。（3）与人体共生螺旋体可能诱导产生抗特异抗原的交叉反应抗体[12]。（4）临床检验时可能存在血液标本未完全凝固即离心或离心不彻底，纤维蛋白在微孔上吸附，导致吸光率升高；标本溶血，细胞内各种酶及活性物质与底物非特异结合而产生假阳性结果。

综上所述，TP-ELISA 是诊断梅毒的重要依据，但并非确诊的依据。尤其对于老年人及弱阳性（低S/CO）标本，应用TPPA 及其他的方法进行确认，并结合患者的症状、体征、冶游史、性伴及家人的检测结果等进行综合判断。

表1 不同性别组检测结果比较

表2 不同S/CO 组检测结果比较

表3 不同年龄组检测结果比较