外源生殖激素对繁殖后期母蓝狐影响研究

赵 耀 吴汝梓 刘志平* 魏 来 韩欢胜

(1.东北林业大学野生动物与自然保护地学院，哈尔滨，150040；2.哈尔滨华隆蓝狐育种有限公司，哈尔滨，150000；3.黑龙江省农垦科学院，哈尔滨，150038)

在蓝狐(Alopexlagopus)养殖生产实践中，母狐不发情的现象普遍存在。生殖激素分泌不足是导致母狐不发情最主要原因。为了提高母狐繁殖率，人们试图通过使用外源激素来改善这一状况。目前国内外学者使用外源激素对犬诱导发情的方法有了一定深入研究，也有过相关报道[1-4]，但因为生殖激素之间有着复杂的相互作用关系，目前均未获得满意的效果[5-6]。外源激素对动物的生殖机能有重要的影响，其中垂体促卵泡素(pituitarii follitropinum pro injectione，FSH)、孕马血清促性腺激素(pregnant mare serum gonadotropin，PMSG)、人绒毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotropin，HCG)已被广泛应用在动物生产中，FSH在超数排卵和诱导泌乳繁殖后期乏情的母畜发情方面能获得良好的效果[7-8]。在狐方面也曾有使用HCG、PMSG和LRH-3的报道，但未见使用FSH报道。相关研究认为，使用外源性激素可以促使母兽发情但不产仔的原因，可能是与孕酮(P)缺乏有关[9]，据此本试验在使用PMSG、LRH-3基础上增加了FSH和P+FSH的组合，对繁殖后期乏情母蓝狐进行催情处理。

1 材料

1.1 试验动物

本试验动物由哈尔滨华隆蓝狐育种有限公司提供，在2018年繁殖末期选取3年龄内、体况良好、繁殖后期母蓝狐30只，哈尔滨华隆蓝狐育种中心隶属于哈尔滨华隆集团，现有蓝狐种群存栏8 400余只，建设占地30万m2，年存栏约5.5—6万只。

1.2 试验药品

兽用注射促黄体素释放激素A3(LRH-3)、孕马血清(PMSG)由赤峰博恩药业有限公司生产；垂体促卵泡素(FSH)由宁波第二激素厂生产；孕酮(P)由宁波第二激素厂生产。其中LRH-3、FSH、PMSG均采用医用生理盐水稀释，现用现配。

1.3 主要仪器

一次性注射器；载玻片；盖玻片；棉签；显微镜(型号为：BM-57XCS)；数码相机；电子测情仪，由德国伍尔特公司生产；人工授精器械(保定设施、输精针、输精套管等)。

2 试验方法

2.1 外源激素的注射

将选取的30只母狐(♀)，随机分成Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组，每组10只，Ⅰ组狐编号A1—10，Ⅱ组编号B1—10，Ⅲ组编号C1—10。分别注射所需的外源性激素，注射部位为蓝狐后腿肌肉[3]。

Ⅰ组注射孕酮(P)0.85 mL、垂体促卵泡素(FSH)21.0 IU、孕酮(P)+垂体促卵泡素(FSH)0.1 mL+5.0 IU及垂体促卵泡素(FSH)+孕马血清(PMSG)4.0 IU+25.0 IU，共注射11次。

Ⅱ组注射垂体促卵泡素(FSH)26.0 IU、垂体促卵泡素(FSH)+孕马血清(PMSG)4.0 IU+25.0 IU，共注射6次。

Ⅲ组为空白对照组，不做任何处理。

对试验的两组母蓝狐从2018后5月3日开始注射外源生殖激素，注射日期及剂量详见表1、表2。

5月13日开始对实验狐进行发情鉴定，对发情母狐实施输精并于当天注射促黄体素释放激素A3(LRH-3)2.5 μg/只，至实验结束。

2.2 发情鉴定

母狐的发情鉴定采用外阴观测、阴道角化细胞检测、阴道电阻检测综合判定法[10]，即：外阴肿胀开始消退；阴道涂片可见大量角化细胞；阴道电阻值升高后回落。

2.3 输精

选取优质种公狐，按摩法采精，后进行精子质量检测，精子活力达到0.8以上，精子密度≧1 000×106个/mL，采用子宫内输精(1次/d×3 d)，输精量 0.6—0.8 mL。输精3次后再次测量阴道电阻值，当阴道电阻值低于300 Ω，阴道角化细胞圆形细胞数增多则结束输精，否则继续输精。

表1 Ⅰ组实验母蓝狐激素注射时间、名称和剂量

Tab.1 Time，name and dose of hormone injection in group Ⅰ experimental female blue foxes

表2 Ⅱ组实验母蓝狐激素注射时间、名称和剂量

Tab.2 Time，name and dose of hormone injection in group Ⅱ experimental female blue foxes

3 结果与分析

发情、假孕及产仔情况见表3。

通过对Ⅰ组和Ⅱ组蓝狐进行发情检测可知，Ⅰ组蓝狐共有3只发情，其中A6、A9出现假妊娠现象；Ⅱ组蓝狐共2只发情，其中B9出现假妊娠现象。

4 结论

4.1 在蓝狐发情末期，联合使用外源性P、FSH、PMSG和LRH-3可以促使部分繁殖障碍母蓝狐发情，并出现假妊娠，但不能产仔。

表3 实验组蓝狐发情、假孕及产仔情况

Tab.3 Estrus，pseudo pregnancy and farrowing status of blue fox in experimental group

续表3

4.2 发情的母蓝狐符合目前狐发情鉴定标准。

4.3 Ⅰ组使用激素后输精3只，占比30%，假妊娠2只，占比66%，产仔0只，占比0。Ⅱ组使用激素后输精2只，占比20%，假妊娠1只，占比50%，产仔0只，占比0。

4.4 从蓝狐发情表现和发情数量上看，使用P组比没使用P组效果好。

5 讨论

蓝狐是季节性单次发情，自发排卵动物，在非繁殖期卵巢出现休眠状态，休情期可以达到9—10个月，若错过了一个发情期则会增加一整年的饲养成本[11]。养殖狐生产中总是有相当一部分母狐在繁殖期不发情，使用外源性激素若能促使这些不发情的母狐正常繁殖，将会明显提高养殖者的效益。

本研究中的外源激素对在繁殖后期乏情母蓝狐使用。外源性激素注射部位为蓝狐后腿外侧[3]，结果证明使用外源激素可以促进蓝狐发情，如果能使繁殖季节处于乏情状态的母蓝狐发情，提高配种率和蓝狐的使用效率并产生较多后代，对于蓝狐养殖业有重要的意义。本次实验为发情后期对乏情母狐催情方法提供一个新的研究方向，有利于进一步发掘更多蓝狐的生殖潜能。

促黄体素(LH)和促卵泡素(FSH)都有促卵泡发育的作用，单独使用二者均可诱导发情。PMSG具有类似FSH和LH的双重活性，但以FSH的作用为主，因此有着明显的促卵泡发育的作用，同时有一定的促排卵和黄体形成的功能[11]。促黄体素释放激素A3(LRH-3)能促使动物垂体前叶释放促黄体素(LH)和促卵泡素(FSH)。兼具有促黄体素和促卵泡素作用。

葛东宁等[12]对正常发情母狐使用PMSG+HCG不同剂量组合和FSH+LH组合，获得了较好的产仔效果。说明使用外源性激素对于正常发情的母蓝狐可以提高蓝狐繁殖率；谭建华等[13]给休情期性成熟母犬肌注PGF2α、eCG、hCG成功诱导其发情并使胚胎着床。说明使用外源性激素对于休情期母犬有促使其发情并排卵的作用

崔青山等[14]研究发现，对繁殖后期乏情母狐注射PMSG+HCG，可促使其出现发情表现，并接受交配，但是否产仔未做说明；刘志平等[15]使用PMSG+HCG组合促使不发情青年母狐发情并实施人工授精，结果也无一产仔。

以上研究表明，使用不同种外源激素可以促进蓝狐发情，但都不能使其产仔。影响母狐受孕的因素有多种，对于使用外源性激素促使发情的母狐不受孕的原因分析是由于子宫和卵巢发育不同步造成的，也可能是由于P水平低下或催乳素不足[16]。因此本实验设计在常规激素基础上增加P组合，虽然未能获得产仔，但有3只出现假孕生理反应，因此可以认为此3只母狐具备受孕的条件。

由于激素水平分泌不均导致的可能是隐性发情(非典型发情)，卵泡可发育成熟和排卵[11]。实验组发情的5只母狐，从外阴观测及电阻值(表3)上看，有3只属典型发情(A6、A9、B9)，另2只属非典型发情，后者不怀孕分析可能与卵子着床有关，而卵子着床与相应的环境、激素水平、子宫发育状态密切相关，需要有解剖及组织学检测证实，有待于进一步研究。