前哨淋巴结组织冷冻切片与标准化操作方法的探讨

程宇

（浙江大学医学院附属第二医院，浙江 杭州 310008）

0 引言

乳腺癌是一种较为常见的乳腺疾病，据相关研究表明：乳腺癌的发病率约占女性恶性肿瘤总数的10 %，该疾病的发病因与遗传、年龄有关，好发于妇女绝经期前后，该疾病也会发于男性患者，但数量较少，约占乳腺癌总数的1 %。该疾病不仅严重影响患者的心理健康，更威胁了患者的生命健康安全[1]。乳腺癌腋窝淋巴转移是乳腺癌中较为重要的独立预后因素，该因素决定了治疗方案的最终选择[2]。特别是在乳腺外科手术范围不断精准及缩小的形式下，对腋窝淋巴结的处理成为了当前的主要问题[3]。前哨淋巴结主要是指收纳器官或某区域组织淋巴结液的第一站淋巴结，如前哨淋巴结未发生转移，就不需要对腋窝淋巴结进行清扫[4-5]。因此，如何准确、迅速地对其进行诊断，成为了临床所需要思考的问题[6-7]。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取我院病理科2018 年7 月至2019 年7 月收治的680 例乳腺癌患者，随机分为对照组及观察组，每组各340 例。对照组患者均为女性，年龄24～68岁，平均（38.84±4.53）岁，病程时长3 个月至6年，平均（2.43±0.23）年；观察组患者均为女性，年龄22～69 岁，平均（38.87±4.52）岁，病程时长4 个月至6 年，平均（2.42±0.25）年。两组患者一般资料无明显差异，P<0.05，具有可比性。

1.2 方法

对照组使用术后石蜡切片进行诊断：选取个人综合素质较高的医生进行操作，需要使用的相关仪器包括：医用镊子、手术刀、纱布、组织脱水机（Therom）、切片机。需要使用的试剂：苏木精染色液、水溶性伊红、梯度酒精、二甲苯、石蜡溶液以及10 %福尔马林溶液。在术后选取患者新鲜前哨淋巴结，放入10 %福尔马林溶液中临时固定，后再将组织放入组织脱水机中固定、脱水、浸腊，制成组织蜡块，切片经HE 染色待用。观察组则使用冷冻切片进行病理诊断：选取个人综合素质较高的医生进行操作，术前对相关仪器进行消毒，需要使用的相关仪器及试剂包括：OCT 包埋剂、1 %盐酸乙醇分化液、苏木精染色液、水溶性伊红及梯度乙醇、恒温冰冻切片机、玻璃立缸。在术后选取患者新鲜病变组织，大小一般为1.5 cm×1.5 cm×0.4 cm，将其放置于倒有少量OCT 包埋剂的金属标本托盘上，将其冷冻，冷冻时间分为2 min、5 min、10 min，并切为2 μm、4 μm、6 μm、8 μm 的切片样本，采用100 mL 95 %乙醇溶液作为固定液，将切好的冰冻切片浸入玻璃立缸，常温下固定时间为2 min。随后将固定的切片进行清洗，再加入苏木精染液染色，染色后用1 %盐酸乙醇分化液分化并用清水蓝化25 s，再加入伊红染液染色。完成后放入梯度乙醇内脱水，再浸入二甲苯使切片透明，以中性树胶封片。

1.3 观察指标

观察以对照组为标准，观察不同冷冻时间、不同质量的冷冻切片的诊断准确率。

1.4 统计学方法

运用统计学软件SPSS 18.0 处理患者资料，计量资料用均数±标准差（±s）表示，计数资料用率（%）表示，采用t和χ2检验，以P<0.05 为准，说明差异较大，具有临床对比价值。

2 结果

2.1 不同冷冻时间下切片诊断正确率对比

以石蜡切片诊断为标准，观察不同冷冻时间下冷冻切片的准确性，结果表明：冷冻时间为2 min的切片诊断的准确率最高，明显优于其他两组，详情见表1。

表1 不同冷冻时间下切片诊断正确率的对比[n(%)]

2.2 不同质量下切片诊断正确率对比

以石蜡切片诊断为标准，观察不同质量下冷冻切片的准确性，结果表明：切片厚度为4 μm 时，诊断准确率最高，明显优于其他两组，详情见表2。

表2 不同质量下切片诊断正确率对比[n(%)]

3 讨论

冷冻切片在制作过程中对于切片的固定具有较为重要的作用[8]。因此，在选择切片固定、染色时，需要保持玻片和切片的温差[9]。如发生切片脱落，应当仔细对情况进行分析，一般情况下，切片脱落主要由以下原因所致：（1）载玻片存在异物；（2）固定液浓度不足；（3）组织坏死细胞过多[10]。对于上述问题，可采取以下处理方式：（1）加强载玻片的清洁工作，避免载玻片被污染；（2）定时更换固定液，如实验取样较多时，应当及时更换固定液；（3）在条件允许的情况下多取几组样品，或延长切片固定的时间。

通过此次研究发现：不同的冷冻时间以及不同厚度的切片质量均会对前哨淋巴组织冷冻切片的准确率产生影响，因此，我们应当及时探索其规律，选取最为合理的切片质量及冷冻时间，从而增加冷冻切片的诊断确诊率。此外，还值得注意的是：除冷冻切片的质量以及冷冻时间，脱片问题以及染色过程及其他问题也需要我们关注。冷冻切片在染色时需要注意苏木精染液以及固定液的浓度。在染色工作完成后，应对其进行观察，确保切片合格。

综上所述，经过研究发现：在前哨淋巴结组织冷冻切片的制作过程中，应当严格制作过程，并精准控制冷冻切片的各细节步骤，并将冷冻时间控制在2 min、切片厚度控制在4 μm，以此来提高前哨淋巴组织冷冻切片的准确率。