复发性流产患者血清IFN-、IL-4、IL-17变化分析

钟光芹 王小红 顾爱玲

解放军904医院(无锡，214000)

研究发现，部分地区复发性流产发病率可超过596/万[1]，在合并有阴道内菌群失调或盆腔慢性炎症性疾病的患者中发病率可进一步上升[2]。复发性流产严重影响妊娠结局。在复发性流产发病机理研究中发现，细胞因子的改变能够在疾病病情进展过程中发挥作用。干扰素(IFN)不仅参与炎症反应过程，还能够激活下游自然杀伤性T淋巴细胞，促进其对胚囊的损害，促进流产发生；白细胞介素-4(IL-4)能通过稳定树突状T淋巴细胞的活性，降低胚囊的自身免疫性损伤[3]；白细胞介素-17(IL-17)能通过募集下游中性粒细胞，促进子宫内膜炎症性损伤，加剧胚囊流产风险[4]。为了揭示IFN、IL-4、IL-17的表达与复发性流产关系，为预防流产或控制提供策略，本研究探讨IFN、IL-4、IL-17的表达与复发性流产的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2017年6月—2018年7月本院治疗的复发性自然流产患者(观察组)。纳入标准：①男女双方染色体正常，男方精液正常；②TORCH感染检查、自身免疫抗体、封闭抗体均阴性；③年龄>18岁，孕周≤12周；④患者及家属知情同意。排除标准：①有生殖道感染或畸形；②内分泌激素异常、恶性肿瘤、精神疾病、凝血功能异常等疾病；③母儿血型不合；④有抽烟、酗酒、吸毒等不良习惯。同时选取正常妊娠早孕孕妇作为对照组。

1.2 实验方法

采用酶联免疫吸附试验检测IFN、IL-4、IL-17。采用十字交叉方法测定抗原浓度，碳酸盐缓冲液稀释抗原，加入96孔酶标板中，盖盖置4℃过夜，蒸馏水冲洗3次，每次5min，轻轻叩击酶标板甩干；每孔加入5%脱脂牛奶200μl，4℃过夜，蒸馏水冲洗3次，每次5min；加入稀释好的抗体(购自Abcam公司，浓度1：800)，蒸馏水冲洗3次，每次5min，每孔中加入100μl的底物，显色后酶标仪上吸光度检测。

1.3 统计学处理

2 结果

2.1 一般情况

观察组100例，其中流产2次24例、3次43例，≥4次33例；年龄31.0±4.9岁，孕周8.9±1.0周。对照组100例，年龄30.1±5.2岁，孕周9.1±1.0周。两组年龄及孕周比较无差异(t=1.298、-1.115，P=0.196、0.266)。

2.2 两组血清激素比较

观察组血清IFN和IL-17高于对照组(P<0.05)，IL-4低于对照组(P<0.05)，见表1。

2.3 观察组不同流产次数者血清激素比较

观察组不同流产次数者血清IFN、IL-4、IL-17比较未见差异(P>0.05)，见表2。

表1 两组血清激素水平比较

表2 观察组不同流产次数者血清激素水平比较

2.4 相关性分析

将观察组血清IFN、IL-4、IL-17进行相关分析显示：IL-4与IFN、IL-17呈负相关(r=-0.373和-0.404，P<0.05)，IFN与IL-17呈正相关(r=0.419，P<0.05)，见图1。

图1 相关分析图

3 讨论

遗传性因素、盆腔炎症性损伤或者染色体异常，均能够促进复发性流产的发生[5]。IFN是免疫应答相关因子，其能够通过募集下游CD4+T淋巴细胞或者CD8+T淋巴细胞，进而诱导子宫内膜微环境的改变。基础研究认为，IFNr的表达上升还能够影响到自然杀伤性T淋巴细胞的活性，加深受精卵或胚囊细胞毒性损害程度。IL-4是免疫平衡相关因子，能够通过改善th1/th2 T淋巴细胞免疫平衡，降低炎症性免疫损伤，进而降低流产发生风险。IL-17是炎症性损伤指标，通过募集下游炎症细胞如单核细胞激活，影响受精卵着床，导致胚囊种植子宫内膜深度下降，促进流产发生[6]。部分研究者探讨了IFN，认为复发性流产患者中IFNr表达上升[7-8]，但对IL-4、IL-17的分析研究不足。

本次研究发现，在复发性流产患者中，IFNr、IL-17的表达上升，而IL-4表达下降，提示IFN、IL-4、IL-17均参与到复发性流产病情过程。这主要由于不同炎症或免疫因子病理改变有关[9-12]：①IFN、IL-17表达上升，能够通过诱导局部炎症信号通路NF-KB的激活，加剧下游炎症性因子如肿瘤坏死因子a的释放，促进胚囊的损害和流产的发生；②IL-4的下降失去了对th2 T淋巴细胞免疫平衡的稳定作用，导致绒毛膜滋养细胞种植能力和分化能力下降，促进流产发生。 李小英 等[13]研究发现，复发性流产患者外周血中IL-4表达平均下降45%，在流产次数较多或有流产家族史者中IL-4下降幅度更高。本文不同流产次数患者中，IFN、IL-4、IL-17的表达无差别，提示IFN、IL-4、IL-17的表达与流产数量并无直接关系。本文相关分析，IL-4与IFN、IL-17呈负相关关系，而IFN与IL-17呈正相关关系，提示IFN、IL-4、IL-17在促进复发性流产中可能具有一定协调作用， IL-4的表达通过影响细胞免疫调节通路，进而影响IFN、IL-17的表达，而IFN、IL-17可以相互激活，最终影响子宫内膜免疫耐受，并促进流产的发生。特别是IFN、IL-17对T或CD8+T淋巴细胞的协调激活作用，能够加剧对绒毛膜滋养细胞的损伤，加剧滋养细胞凋亡，最终促进流产发生。

综上所述，在复发性流产外周血中，IL-4的表达下降， FN-、IL-17表达上升， IFN、IL-4、IL-17在促进复发性流产过程中可能发挥了一定的协调作用。本次研究的局限性在于未探讨IFN、IL-4、IL-17诊断复发性流产的血清学价值，而本次研究的创新性在于探讨了IFN、IL-4、IL-17的表达与流产次数的关系。