祛瘀生新胶囊药效学及急性毒性实验研究*

穆庆丽，乔 园，郭 冬

（陕西省中医药研究院，陕西 西安 710003）

祛瘀生新胶囊为治疗缺血性股骨头坏死的经验方，具有通络止痛、消肿散结、温通经脉等功效，临床应用多年，疗效确切，不良反应较少。其由黄芪、桂枝、三棱、莪术、土贝母、制马钱子等水煎、提取（2次）、浓缩至所需质量浓度（1 mL药液中含1 g生药）而成。本研究中考察了其药效作用与急性毒性情况。现报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料

实验动物：KM 小鼠 184 只，体质量（20±2）g，雌雄各半，由西安交通大学医学院实验动物中心提供，实验动物生产许可证号：SCXK（陕）2007-001。小鼠饲养于恒温（22～25℃）、恒湿、屏障环境中，自由饮水。

仪器：BS210S型电子天平（北京赛多利斯天平厂）；721型分光光度计（上海第三分析仪器厂）；ZH-ZZY型足趾容积测量仪（淮北正华生物仪器设备有限公司）

试药：祛瘀生新胶囊（陕西省中医药研究院研制，批号为20110801）；吲哚美辛片（临汾奇林药业有限公司，国药准字H14020549，批号为20110702，规格为每片25 mg）；阿司匹林肠溶片（陕西白鹿制药股份有限公司，国药准字 H61023177，批号为 111201，规格为每片25mg）；角叉菜胶（辽宁省药物研究所，批号为20110822）；冰醋酸为分析纯，水为去离子水。

1.2 方法[1-3]

急性毒性预试验：取KM小鼠24只，分为6组（每组4只，雌、雄各半）进行2次实验，得到动物0死亡剂量（Dn）为 25.648g／kg，100% 死亡剂量（Dm）为 57.803g／kg，分别作为上下限。以预实验获得的Dm作为正式实验中的高剂量，求得比值为0.85，等比求得其他各剂量。

急性毒性试验：取KM小鼠60只，均编号标记并称定质量，随机分为6组（记为A～F组），每组10只，雌雄各半，剂量分别为 57.803，49.133，41.763，35.499，30.174，25.648 g ／kg，给药前禁食不禁饮 12 h。24 h 内灌胃3次，给药间隔时间4 h，给药体积每10 g体质量0.4 mL。用药后连续观察30 min，最初6 h内每1 h观察1次，之后每天观察2次，持续2周，观察小鼠的一般活动情况及存活情况（见表1），并记录小鼠行为活动、状态、饮食、大小便及毛色、分泌物和死亡数目、死亡时间及主要毒性反应。对观察期内死亡小鼠进行解剖学检查，并记录病理变化。

表1 急性毒性实验观察内容

小鼠半数致死量测定：按Bliss′s法[4-5]统计各组死亡数，计算死亡率及半数致死量（LD50）、95%置信区间（CI）。

角叉菜胶致小鼠足趾肿胀试验[6-8]：取KM小鼠50只，随机分为5组，每组10只，雌雄各半。模型组小鼠灌胃去离子水20 mL／kg，阳性对照组小鼠自实验第3天开始灌胃阿司匹林0.2 g／kg，共3次；祛瘀生新胶囊高、中、低剂量组小鼠分别灌胃 1.2，0.6，0.3 g ／kg（分别为人用量的 30，15，7.5 倍）；每天 1 次，连续 4 d。第 5 天给予角叉菜胶前先测所有小鼠左后足跖围（用手术线在左后足跖同一部位缠绕2周，剪下，量手术线的长度作为足跖围）。末次给药的同时，所有小鼠左后足皮下注射1%角叉菜胶0.05 mL，然后每隔1 h测左后足跖围1次，共测4次，作为肿胀值，肿胀值减去致炎前足跖围即为肿胀度。

冰醋酸致小鼠疼痛试验[2，9]：取KM小鼠50只，随机分为5组，每组10只，雌雄各半。模型组小鼠灌胃去离子水20 mL／kg，阳性对照组小鼠在实验第5天灌胃吲哚美辛肠溶片1次（15 mg／kg），祛瘀生新胶囊高、中、低剂量组小鼠分别灌胃 1.2，0.6，0.3 g ／kg；连续 5 d，末次给药后30 min，腹腔注射 0.8%冰醋酸0.2 mL，5 min后，统计小鼠在10 min内的扭体次数（腹部收缩内凹、伸展后肢、臀部抬高、蠕行），计算扭体反应抑制率[抑制率（%）=（模型组平均扭体次数-给药组平均扭体次数）／模型组平均扭体次数×100%]。

1.3 统计学处理

采用SPSS21.0统计学软件分析。计量资料以表示，组间数据行单因素方差分析。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 动物一般生长状况

给药后，部分小鼠初始自发活动减少、倦卧不动、嗜睡、眯眼，继而动物出现震颤、抽搐、麻痹、运动失调、蹿动、全身肌肉强直性痉挛，直至死亡（死亡症状为角弓反张）。第1次给药后20 min，A组小鼠开始死亡，死亡时间多集中在第1次和第2次给药后1 h，B组小鼠的死亡时间多集中在第2次和第3次给药后1 h，C组和D组小鼠的死亡时间多集中在第3次给药后1 h到次日早晨。在 57.803 g／kg，49.133 g／kg 剂量下，存活小鼠大多数开始出现自发活动减少、倦卧不动、嗜睡、眯眼，继而出现震颤、抽搐、麻痹、运动失调、蹿动、全身肌肉强直性痉挛等临床表现，对死亡小鼠进行解剖，肉眼可见其胃充盈，肠管胀气，余未见异常。最终存活小鼠给药14 d后逐只处死、解剖，并肉眼观察，心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、胸腺、卵巢、子宫、精囊、前列腺、睾丸、胃、肠等重要脏器、器官及胸腔、腹腔未见颜色、形态异常，无出血点或其他病理改变，胃黏膜颜色红润，无出血点或溃疡，尸检无异常。

2.2 半数致死量

灌胃给予 57.803，49.133，41.763，35.499，30.174，25.648 g／kg祛瘀生新胶囊后，各组小鼠死亡数分别为10，9，7，3，1，0 只。回归方程式：P（Probit）=-16.42368+13.512 22 × log（D），r=0.994 185，LD50=38.503 8 ±3.124，95%CI（35.651 3，41.584 6）。

2.3 对小鼠足趾肿胀的影响

结果见表2。

表2 祛瘀生新胶囊对角叉菜胶所致小鼠足趾肿胀度的影响（X ± s，n=10）

2.4 对小鼠疼痛的影响

结果见表3。

表3 祛瘀生新胶囊对小鼠扭体反应的影响（n=10）

3 讨论

祛瘀生新胶囊根据临床经验方加工制成，临床主要用于治疗风、寒、湿、邪等多种原因引起的髋部疼痛、肿胀、屈伸活动受限、行走困难功能障碍性疾病[10]。方中制马钱子的主要成分为士的宁，可通络止痛、消肿散结[11]；桂枝发汗解肌、温通经脉，可促发汗、解热、镇痛、抗炎、抗过敏[12]；三棱行气破血，消积止痛[13]；黄芪补气固表、利尿托毒、排脓、敛疮生肌[14-15]。全方共奏通络止痛、消肿散结、温通经脉之功效。

毒理学研究是药物研究的中心环节，是评价药物安全的重要指标，本试验中通过小鼠灌胃最大给药量的急性毒性实验观察祛瘀生新胶囊的用药安全性。结果该药的Dn和Dm分别为 25.648 g／kg和 57.803 g／kg。角叉菜胶致小鼠足肿胀法和冰醋酸致疼痛法是常用于评价或筛选抗炎作用药物的经典模型，其作用机制主要是通过注射角叉菜胶使局部毛细血管扩张、血管通透性增高、渗出、水肿产生炎症。1.2g／kg（2 ～3h），0.6g／kg（2 ～3h），0.3 g／kg（2 h）剂量的祛瘀生新胶囊可明显降低模型小鼠足跖的肿胀度，给药 1.2 g／kg和 0.6 g／kg 可明显减少模型小鼠扭体次数，说明该药有明显的抗炎镇痛作用，但对其深入的药效学研究，长期毒性实验及其抗炎镇痛机制有待进一步研究。