正交试验优化八味茵术颗粒剂提取工艺及其颗粒剂的制备研究

戈大春 王卓君* 韦翠萍

（1 苏州市吴中人民医院 江苏 苏州 215128）

（2 苏州卫生职业技术学院 江苏 苏州 215128）

湿疹是一种过敏性炎症性皮肤病，为皮肤科常见多发病，易成慢性，病程迁延，容易反复发作。李东垣在《脾胃论·脾胃盛衰论》中说：“百病皆由脾胃衰而生也。”有些慢性、难治性皮肤病的病因病机都与脾胃功能失调有着相当密切的关系。脾失健运，则湿从内生，浸淫皮肤，如湿疮、湿疹、奶癣、老年性皮肤瘙痒症等。其治疗也要以健中补脾，促进运化为基本方。八味茵术颗粒为我院的自拟协定处方，由茵陈、生白术等八味中药组成，经过多年临床使用，疗效确切，主要的功效是健脾利湿，方中白术健脾益气[1-2]，茵陈利湿退黄[3-4]，共为君药，在皮肤科得到广泛应用。临床用于皮肤科湿疮、湿疹，对于脾失健运的胃肠道症状，如胃纳差、恶心腹胀、大便溏泄等也具有很好的效果。为了方便临床应用，对方中有效成分提取工艺进行多指标优化，经减压干燥得到干膏为原料，干法制粒的方法来制备颗粒剂。

1.仪器与试药

1.1 仪器

SHIMAZU LC-2030C 3D高效液相色谱仪(日本SHIMAZU公司)；Sartorius BT125D电子天平（赛多利斯科学仪器（北京）有限公司）；fzg-16板式真空干燥箱（杭州三特医药化工设备有限公司）；Buchi小型喷雾干燥仪（Germany）；GX-10B多功能粉碎机（浙江高鑫工贸有限公司）；GL-25干法制粒机（江苏张家港市开创机械制造有限公司）；AC220-240V超声波清洗机（深圳深华泰超声洗净设备有限公司）。

1.2 药材与标准品

药材：生白术购自于江苏福源中药饮片有限公司，茵陈、苍术等其余七味药材购自天马（安徽）国药科技股份有限公司；标准品：6,7-二甲氧基香豆素（批号：111740-200702，中国药品生物制品检定所）；白术内酯Ⅲ（批号：111978-201501，中国药品生物制品检定所）

1.3 试剂

乙腈（HPLC，MERCK，Germany）；甲醇（HPLC，MERCK，USA）；硬脂酸镁（批号：20170329，CP，国药集团化学试剂有限公司）

2.方法与结果

2.1 6,7-二甲氧基香豆素、白术内酯Ⅲ的HPLC测定

色谱条件：inertSustain® C18色谱柱（4.6mm×250mm，5 µm，Japan），柱温30℃，DAD检测（200nm～400nm），流速为1 mL·min-1，进样量为5 µL，流动相为水（A）-乙腈（B）梯度洗脱，0～10.0min，55% MPB，10.0～25.0min，55%～95%MPB，25.0～25.1min，95%～55%MPB，25.1～30.0min，55%MPB。

对照品溶液的制备：取6,7-二甲氧基香豆素、白术内酯Ⅲ对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含1.0mg的溶液。精密量取1mL，置10mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，0.45µm滤膜滤过，即得。

供试品溶液的制备：精密量取八味茵术颗粒20.0g，置20 mL具塞锥形瓶中，加入25mL甲醇：水（1∶1），室温超声提取15min，过滤，取续滤液5mL，转移至50mL容量瓶中，加流动相定容至刻度，摇匀，0.45µm滤膜滤过，即得含量测定的样品溶液。

2.2 提取工艺的研究

对提取工艺进行正交试验，参考方中君药白术、茵陈提取工艺的文献，提取效率的影响因素主要包括：加水量、提取次数、提取时间，确定加水量和优化工艺，分析是否有显著性差异。取出的样品液经过适当的稀释处理，HPLC进行指标性成分含量检测。

2.2.1 正交试验的设计 提取效率的影响因素主要包括：加水量（A）、提取次数（B）、提取时间（C），正交试验采用四因素、三水平的正交表进行试验，其因素水平表见表1，正交试验表选用L9(34)，未能安排的空白列作为误差。

表1 因素、水平表

2.2.2 正交试验结果分析

以指标性成分6,7-二甲氧基香豆素、白术内酯Ⅲ的含量为优先考虑指标，综合干膏得率，采用方差分析F检验进行试验结果的统计分析，选取最佳的提取工艺。见表2～5。

表2 八味茵术颗粒提取正交试验结果表

表3 八味茵术颗粒提取正交试验方差分析表（6,7-二甲氧基香豆素含量）

表4 八味茵术颗粒提取正交试验方差分析表（白术内酯Ⅲ含量）

表5 八味茵术颗粒提取正交试验方差分析表（出膏率）

经方差分析，因素A、B有显著差异，其中对于茵陈的指标性成分，因素A有显著性差异，对于白术的指标性成分，因素B有显著性差异，对于干膏得率来说，各因素都没有显著差异，八味茵术颗粒这一协定方为复方制剂，不能单纯以其中某一味药物的含量来确定提取工艺，综合含量和干膏得率的分析，相对于因素A、B，因素C无显著性差异，结合临床实际工作，在本实验的条件下八味茵术颗粒提取工艺组合为A3B2C1的提取液有效成分煎出率相对高，故最终确定提取工艺为加水量10倍、8倍，提取2次，提取时间0.5 h、0.5 h。

2.2.3 提取工艺的验证试验

取三份合格饮片，每帖100 g，按优化后的煎煮方法进行提取（药材煎煮前浸泡30min，加入10倍量水煎煮30min，药渣加入8倍量水煎煮30min，将两次的汤液合并浓缩），比较分析提取液指标性成分、干膏得率（总提取物量），确定提取工艺。试验见表6，所得指标性成分的含量与正交试验表中的结果相比有明显提高，且平行性良好，工艺较为稳定。

表6 续断优化工艺的验证试验结果（n=3）

2.3 浓缩工艺研究

取八味茵术颗粒大提提取液（30公斤药材提取）适量于60℃、70℃、80℃的水浴中，以提取液在指标性成分6,7-二甲氧基香豆素、白术内酯Ⅲ的含量为指标，分别考察提取液在0h、2h、4h、6h、8h的稳定性。不同时间取出的样品液经过适当的稀释处理，HPLC进行检测。试验结果表明续断提取液在60℃、70℃、80℃条件下8h内均稳定，可在80℃条件下进行浓缩，见表7。

表7 八味茵术颗粒提取液在不同温度、不同时间下成分的含量（μg·mL-1）

2.4 干燥工艺研究

取八味茵术颗粒大提提取液（30公斤药材提取）并适当浓缩，选择真空干燥、喷雾干燥法，进行比较，以提取液干燥前后在指标性成分的含量、所得到的干粉性状和干粉得率为指标，筛选合适的干燥方法。从干燥过程和干粉的形状角度，两种干燥方法都可以，干燥过程相对容易，两种干燥方法所得到的药粉不黏壁，流动性也好，吸湿性相对强，真空干燥、喷雾干燥的浸膏粉收率分别为85.01%、88.15%。但是从指标性成分6,7-二甲氧基香豆素和白术内酯Ⅲ含量的角度，真空干燥（4.61、34.74μg/g）稍优于喷雾干燥（3.68、29.14μg/g）。故综合考虑表明真空干燥的方法比较适合于八味茵术颗粒提取液。

2.5 制粒工艺研究

2.5.1 处方的选择 选择八味茵术颗粒真空干燥浸膏粉作为原料药，通过加入不同辅料和调整辅料的用量，以颗粒成型情况和制粒过程顺利与否为指标，筛选出最优处方。

处方为：99.0%八味茵术颗粒减压干燥粉，1.0%硬脂酸镁。以上处方出片光洁，颗粒色泽均一，硬度适中，不粘轮，成品率高，可选择此处方为制粒处方。

将所得到的颗粒和辅料硬脂酸镁取相同的质量，用甲醇：水（1∶1）溶解成相同的浓度，HPLC测定，液相条件参照2.1项下。结果证明制粒的过程对于含量基本没有影响，制粒的过程和加入的辅料对于指标性成分含量也没有影响。HPLC色谱图见图1、2。

图1 制粒后与硬脂酸镁比较的HPLC色谱图a.白术内酯Ⅲ

图2 制粒后与硬脂酸镁比较的HPLC色谱图b.6,7-二甲氧基香豆素

2.5.2 工艺的考察 对处方进行工艺筛选，以颗粒质量、颗粒得率为考察指标，对压轮压力（MPa）、压轮转速（r/min）、送料速度（r/min）三个因素进行单因素水平考察，每个因素进行三个不同水平的考察，最终确定处方的最优工艺条件。

2.5.2.1 压轮压力的考察 固定压轮转速和送料速度，以颗粒质量、成品率为考察指标，当压轮转速为5r/min，送料速度为15r/min时，分别对比压轮压力为15MPa、20MPa、25MPa时对制粒工艺的影响。试验结果表明当压轮压力为20MPa时，出片连续；颗粒硬度适中、无色差，细粉少，成型性好；得率为82%。

2.5.2.1 压轮转速的考察 固定送料速度，以颗粒质量、成品率为考察指标，选择压轮压力为20MPa，当送料速度为15r/min时，分别对比压轮转速为4.0r/min、4.8r/min、5.5r/min时对制粒工艺的影响。试验结果表明当压轮转速为4.8r/min时，出片连续；颗粒硬度适中、无色差，成品得率较高，细粉少，得率为80%。

2.5.2.3 送料速度的考察 以颗粒质量、成品率为考察指标，选择20MPa的压轮压力和4.8r/min的压轮转速，分别对比送料速度为10r/min、12r/min、15r/min时对制粒工艺的影响。试验结果表明当送料速度为15r/min时，出片连续；颗粒硬度适中、无色差，成品得率较高，细粉少，得率为83%。

根据单因素考察结果选择干法制粒机技术参数为压轮压力20MPa、压轮转速4.8r/min、送料速度为15r/min。综合处方及工艺的考察，确定了八味茵术颗粒的干法制粒处方和条件：干燥浸膏粉99.0%；硬脂酸镁1.0%；压轮压力20MPa、压轮转速4.8r/min、送料速度为15r/min。

3.讨论

八味茵术颗粒为一中药复方制剂，具有健脾利湿之功效，中药复方成分复杂，干扰因素多，不能单纯以单一指标性成分来确定提取的效率，方中白术、茵陈为君药，白术有明确的健脾益气、调节胃肠运动的功能的特点[5-9]，最近还有研究表明白术的主要活性成分白术内酯I、II、Ⅲ体内外有抗轮状病毒（RV）的作用[10]。茵陈利湿退黄，同样具有多种的药理作用[11-13]，这两味也是方中用药剂量比较大的药味，故选用6,7-二甲氧基香豆素、白术内酯Ⅲ为指标性成分，结合干膏得率综合考察，经过验证试验表明优化的提取工艺可行性和稳定性都较好。

制粒方法选用干法制粒，以干浸膏为原料，处方为99.0%减压干燥粉，1.0%硬脂酸镁。干法制粒所得到的成品颗粒硬度适中、无色差，细粉少，成型性好。处方中选择了润滑剂硬脂酸镁，硬脂酸镁的加入可以增加浸膏粉的流动性和润滑性，对比加入硬脂酸镁和不加入硬脂酸镁进行干法制粒，无论从颗粒的硬度、色泽、可压性以及最后剩余细粉这些方面，加入硬脂酸镁都比不加入效果好。另外在制粒方法方面，对比了干法制粒和湿法制粒，湿法制粒采用传统挤出制粒，3倍的糊精作为稀释剂，颗粒硬度适中、无色差、成型性良好，但与干法制粒相比，载药量少，病人服用量增加，吸湿性也比干法制粒的强，从工业化中式放大以及可行性的角度，干法制粒更加符合现代化工业生产自动化的要求，且质量可控性强，故最后选用干法制粒来制备八味茵术颗粒。所得到颗粒剂外观好，细粉少，为其后期的相关制剂研究以及体内动物实验的研究奠定了基础。