提高乳康舒胶囊质量标准的研究

任会旭，吴嫣艳，胡浩彬

1 南京中医药大学，南京 210023；2 江苏省食品药品监督检验研究院，南京 210019

乳康舒胶囊由鹿角、淫羊藿、白芍、郁金、王不留行、丹参6 味药材组成。具有益肾疏肝、止痛散结等作用，用于乳腺增生病证属肾虚肝郁、冲任失调者。原质量标准为原国家食品药品监督管理局标准（YBZ00592009），其仅有淫羊藿苷、芍药苷、原儿茶醛的薄层色谱鉴别和淫羊藿苷、芍药苷的含量测定。为提高乳康舒胶囊质量标准，本文拟建立淫羊藿、王不留行的薄层色谱鉴别法，以及乳康舒胶囊中淫羊藿苷、王不留行黄酮苷、芍药苷3 个成分的高效液相色谱法，为该制剂的质量控制提供参考[1-5]。

1 仪器与药品、试剂

1.1 仪器

LC-20AB HPLC（日本岛津）；CPA224S 型，BS21S 型电子天平（德国Sartorius 公司）；MX5 型电子天平（瑞士Mettler Toledo 公司）。

1.2 药品与试剂

乳康舒胶囊（批 号16100791、171116ML、171118MM，江苏恒瑞医药有限公司）；淫羊藿苷对照品（纯度94.2%，批号110737-201516）、王不留行黄酮苷对照品（纯度92.6%，批号111853-201303）、芍药苷对照品（纯度95.7%，批号110736-201741）、淫羊藿对照药材（批号121632-201101）、王不留行对照药材（批号121094-201305），均购自中国食品药品检定研究院；阴性对照制剂为实验室自制。

乙腈（色谱纯，Fisher Scientific 公司），其余试剂均为分析纯；水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 薄层色谱鉴别

2.1.1 淫羊藿

供试品溶液制备：取本品内容物2 g，置锥形瓶中，加甲醇20 mL，超声处理30 min，滤过，滤液水浴蒸干，固体物加甲醇2 mL 使溶解，即得。

对照药材溶液制备：取淫羊藿对照药材0.5 g，余同“供试品溶液制备”。

对照品溶液制备：取淫羊藿苷对照品适量，加甲醇制成每毫升含0.4 mg 的溶液，即得。

阴性对照溶液制备：取缺淫羊藿的阴性样品，余同“供试品溶液”制备方法。

薄层色谱鉴别方法：吸取供试品、对照药材、对照品溶液及阴性对照溶液各2～5μL，点于同一硅胶G薄层板上，以甲醇-丁酮-三氯甲烷-水（4∶6∶6∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，105 ℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯（365 nm）下检视。于供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上显相同的绿色荧光斑点，阴性制剂无干扰。见图1。

2.1.2 王不留行

供试品、对照品、阴性对照溶液制备：同“2.1.1”。

图1 淫羊藿TLC 色谱图

鉴别方法：除展开剂为正丁醇-乙酸乙酯-水-甲酸（4∶1∶5∶0.5）的上层溶液，5%三氯化铝乙醇显色外，余同淫羊藿鉴别方法。结果可见供试品在与对照品色谱相应的位置上显相同的蓝色荧光斑点，阴性无干扰。见图2。

图2 王不留行TLC 色谱图

2.2 乳康舒HPLC 法测定

2.2.1 色谱条件 色谱柱：Agilent ZORBAX SBC18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相：乙腈（A）-水（B）（梯度洗脱：0～23 min，12%A；23～25 min，29%A；25～40 min，29%A）；检测波长：230 nm（芍药苷）、270 nm（淫羊藿苷、王不留行黄酮苷）；流速：1.0 mL·min-1；柱温：30 ℃；进样量：20 μL。

2.2.2 对照品溶液制备 分别精密称取淫羊藿苷、芍药苷、王不留行黄酮苷对照品适量，加60%甲醇制成每毫升含40 μg、40 μg、10 μg 的混合对照品溶液。

2.2.3 供试品溶液制备 取本品内容物研细，取约0.3 g 精密称定，加入60%甲醇50 mL，称定重量，超声处理30 min，放冷，用60%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.4 阴性供试品溶液制备 按本胶囊生产工艺制备缺淫羊藿、白芍、王不留行药材的阴性供试品样品，按“2.2.3”项下方法制备，即得。

2.2.5 专属性考察 取对照品、供试品、阴性供试品溶液，精密吸取20 μL，在“2.2.1”项色谱条件下进样测定，结果见图3。阴性供试品在对照品相同保留时间处未出现对应色谱峰，表明阴性无干扰。

图3 检测波长（A）230 nm、（B）270 nm 下的高效液相色谱图

2.2.6 线性关系 精密称取淫羊藿苷、王不留行黄酮苷、芍药苷对照品适量，加60%甲醇制成浓度分别为2、10、20、40、80、100、160、200 μg·mL-1的系列对照品溶液，在“2.2.1”项色谱条件下分别进样20μL。以浓度（X，μg·mL-1）为横坐标，峰面积（Y）为纵坐标，绘制标准曲线，结果见表1。3 种成分在各自浓度范围内线性关系良好。

表1 线性关系考察结果

2.2.7 进样精密度试验 精密吸取“2.2.2”项下对照品溶液20 μL，在“2.2.1”项色谱条件下连续进样测定6 次，计算得淫羊藿苷、王不留行黄酮苷和芍药苷峰面积的RSD 分别为0.12%、0.60%和0.14%，表明仪器精密度良好。

2.2.8 稳定性试验 取“2.2.3”项下供试品溶液，按“2.2.1”项色谱条件于0、2、4、6、8、10、12、24 h 进样测定，测得淫羊藿苷、王不留行黄酮苷和芍药苷的峰面积RSD 分别为0.52%、1.35%和0.24%，表明供试品溶液在24 h 内稳定性良好。

2.2.9 重复性试验 取同一批样品（批号16100791），按“2.2.3”项下方法平行制备6 份供试品溶液，在“2.2.1”项色谱条件下进样测定，测得淫羊藿苷、王不留行黄酮苷和芍药苷含量的RSD 分别为0.29%、1.72%和0.76%，表明该方法重复性良好。

2.2.10 加样回收率试验 取本品适量（批号171116ML），研细，取约0.15 g，精密称定，精密加入混合对照品溶液（含淫羊藿苷55.27 μg·mL-1、王不留行黄酮苷17.22 μg·mL-1、芍药苷84.19 μg·mL-1）25 mL，再加入60%甲醇25 mL，密塞，称定重量，超声处理30 min，放冷，用60%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。按“2.2.1”项色谱条件进样测定。结果淫羊藿苷的回收率为103.94%～105.41%，平均回收率为104.90%，RSD 为0.53%（n=6）；王不留行黄酮苷的回收率为99.81%～101.70%，平均回收率为100.90%，RSD 为0.72%（n=6）；芍药苷的回收率为100.99%～102.84%，平均回收率为102.00%，RSD 为0.69%（n=6）。

2.2.11 定量限 取“2.2.6”项下对照品溶液（淫羊藿苷1.93 μg·mL-1、芍药苷1.95 μg·mL-1、王不留行黄酮苷1.87 μg·mL-1）稀释，按“2.2.1”项色谱条件进样测定，信噪比为10 时，即为定量限，淫羊藿苷、王不留行黄酮苷、芍药苷的定量限分别为0.89、4.65、4.30ng。

2.2.12 样品含量测定 取3 批样品，按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，另取“2.2.2”项下对照品溶液，均在“2.2.1”项色谱条件下依法测定，结果见表2。

表2 含量测定结果（n=2）

3 讨论

3.1 薄层色谱法展开系统的筛选

在淫羊藿TLC 定性鉴别时，选择以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水、三氯甲烷-甲醇-水下层溶液等[1]展开剂进行考察，最终确定了甲醇-丁酮-三氯甲烷-水（4∶6∶6∶1）作为展开剂。在王不留行TLC 定性鉴别时，选择以三氯甲烷-甲醇-水的下层溶液、甲醇-水、正丁醇-乙酸乙酯-水的上层溶液等[1，5]展开剂进行考察，均不太理想，最终确定了正丁醇-乙酸乙酯-水-甲酸（4∶1∶5∶0.5）的上层溶液作为展开剂。

3.2 高效液相色谱法相关条件的筛选

本实验对提取溶剂（50%、60%、70%甲醇）、提取方法（超声、静置1 h 后超声）、超声提取时间（30、45、60 min）进行了考察比较，最终确定供试品溶液提取方法为60%甲醇、超声提取30 min。

本法采用DAD 检测器，在190～800 nm 波长范围内进行扫描，结果淫羊藿苷、王不留行黄酮苷在波长270 nm 附近有最大吸收，芍药苷在波长230 nm附近有最大吸收，故选择270nm、230nm 为检测波长。