发酵菜籽粕对贵州黑山羊羔羊生长性能及免疫功能的影响

(1.贵州省开阳县双流镇农业服务中心，贵州 贵阳 550300；2.贵州省畜牧兽医研究所，贵州 贵阳 550005)

随着我省生态环境保护工作的推进及畜牧业相关政策的落实，贵州黑山羊的饲养逐渐从放牧转为舍饲或半舍饲。宋德荣等[1]试验表明，贵州黑山羊进行舍饲是可行的，并能有效促进养羊与生态的平衡发展。由于舍饲或半舍饲后贵州黑山羊的生活习性发生了改变，活动空间和运动量减少、饲料营养不均衡、密度过大以及饲养管理不当等，造成患病的概率日益增高，甚至影响其免疫能力[2，3]。因此，提高舍饲或半舍饲羊的抗病力和免疫力对提高养羊经济效益和保障养羊业健康稳定发展至关重要。已有研究表明，发酵菜籽粕代替部分豆粕饲喂仔猪能提高日增重，降低料重比和腹泻率[4，5]；饲喂肉仔鸡能提高生长性能、免疫功能和肠道消化酶活性的作用[6]；饲喂肉鸭能提高生长性能和改善肠道微生物[7]。本试验通过研究发酵菜籽粕等氮替代日粮中豆粕对贵州黑山羊羔羊生长性能和免疫功能的影响，为半舍饲或舍饲条件下精饲料的选择提供参考。

1 材料与方法

1.1 试验动物和时间地点选择3～4月龄、平均体重(14.90±0.89)kg的健康贵州黑山羊羔羊12只作为试验动物。试验于2017年8—10月在贵州省畜牧兽医研究所基地羊场进行。

1.2 试验材料(1)枯草芽孢杆菌、黑曲霉、酿酒酵母、粪链球菌，分别购自中国食品发酵工业研究院(中国工业微生物菌种保藏管理中心，CICC)和中国农业微生物菌种保藏中心(ACCC)；(2)羊免疫球蛋白 G(IgG)、γ干扰素(IFN-γ)、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、生长激素(GH)、三碘甲状腺原氨酸(T3)、四碘甲状腺原氨酸(T4)酶联免疫吸附试验(ELISA)检测试剂盒，购自上海优选生物科技有限公司。

1.3 发酵菜籽粕的制备称取菜籽粕40 kg，玉米粉2 kg，麸皮2 kg，无水氯化钙0.04 kg，氯化铵0.60 kg，发酵菌种液8 kg(枯草芽孢杆菌∶粪链球菌∶酿酒酵母∶黑曲霉=5∶1∶1∶1)，自来水48 kg(静置3 d)，搅拌均匀，装袋压实，密封发酵15 d。发酵完成后检查颜色和闻气味(发酵正常为褐色带酒香味，发酵不正常的为黑色带苦味)，将发酵正常的菜籽粕自然风干，装袋备用。经检测发酵菜籽粕的营养水平(风干基础)为：干物质88.00%、粗蛋白46.37%、消化能12.29 MJ/kg、粗脂肪2.01%、粗纤维7.80%、粗灰分9.26%、中性洗涤纤维16.70%、酸性洗涤纤维12.80%、钙0.95%、磷1.61%。

1.4 试验设计与饲养管理试验采用完全随机区组设计(RCBD)将试验羊分为3组，每组4只，组间体重差异不显著(P>0.05)。用发酵菜籽粕等氮替代精料日粮中16%豆粕，比例分别为：对照组0、试验1组50%、试验2组100%。日粮参考肉羊饲养标准(2004)[8]营养需要配制，组成及营养水平见表1。

表1 羔羊精料组成及营养水平(风干基础)

注：营养水平为计算值。预混料为北京科恩柯生物科技有限公司生产，每千克预混料中：VA20万～23万IU，VD338万～39万IU，VE≥100 IU，赖氨酸≥12 000 mg，水分≤14.0%，生物素≥2.5 mg，钙4%～11%，铁750～1 500 mg，铜300～500 mg，锌1 000～1 700 mg，锰500～1 000 mg，碘4～11 mg，硒5～10 mg，钴2.5～6 mg，磷2%～4%

试验羊采取“放牧+补饲”的模式饲养，每只山羊每天按照体重的2%饲喂精料，每日07：30和16：30 按照1∶ 1.5比例各饲喂1次，自由饮水。试验期 67 d(预试期7 d，正试期 60 d)。

1.5 指标测定

1.5.1生长性能：正试期间准确记录各组羊的投料量和剩料量，计算日均精料采食量。分别于试验第1、30、60 d早上空腹称量记录试验羊体重，计算正试期各组的平均日增重、料重比。

1.5.2腹泻情况：试验期间每天观察羔羊粪便，计算羔羊的腹泻率。腹泻率(%)=(腹泻羔羊只数×腹泻天数)/(羔羊总只数×总试验天数)×100%。

1.5.3免疫性能和血清激素指标：各组试验羊分别在正试期的第1、30、60 d早晨空腹称重后，用无菌采血管从山羊颈静脉采血4 mL，静置析出血清，于3 500 r/min 离心30 min制备血清，用移液枪吸出血清，分装于2支1.5 mL离心管中，做好标记，放入-20 ℃冰箱保存备用。采用ELISA测定IgG、IFN-γ、IGF-1、GH、T3、T4含量。

1.6 数据分析处理使用Excel进行数据前处理，用SAS for Windows 9.1软件进行统计分析，多重比较用SNK法。统计数据用“平均数±标准差”表示。

2 结果与分析

2.1 生长性能由表2可见：(1)试验全期各组的平均日采食量差异不显著(P>0.05)。(2)平均日增重以试验1组最高为80.21 g/只，各组间差异不显著(P>0.05)。(3)料重比以试验1组最低为3.71，与对照组(3.81)差异不显著(P>0.05)，比试验2组(4.14)低10.39%，差异显著(P<0.05)。

2.2 腹泻情况试验组无羔羊腹泻，无死亡。对照组第1～30 d有1只羔羊腹泻3 d，经治疗痊愈，无死亡，全期羔羊腹泻率为1.25%，死亡率为0。

2.3 免疫功能指标由表3可见：(1)IgG在试验第 1 d以试验1组最高为2.25 g/L，各组间差异不显著(P>0.05)；第30 d以试验1组最高为 2.22 g/L，比对照组(2.05 g/L)、试验2组(2.05 g/L)高8.29%，差异显著(P<0.05)；第60 d以试验1组最高为2.72 g/L，各组间差异不显著(P>0.05)。(2)INF-γ在试验第 1 d以试验1组最高为 692.32 pg/mL，各组间差异不显著(P>0.05)；第30 d以试验1组最高为664.30 pg/mL，比对照组(570.14 pg/mL)高16.52%，差异显著(P<0.05)，比试验2组(463.64 pg/mL)高43.28%，差异显著(P<0.05)；第60 d以试验1组最高为996.11 pg/mL，与对照组(989.39 pg/mL)差异不显著(P>0.05)，比试验2组(777.52 pg/mL)高28.11%，差异显著(P<0.05)。

表2 各组羔羊生长性能统计

注：同行无字母标记或字母相同表示组间差异不显著(P>0.05)，字母不同表示组间差异显著(P<0.05)。下表同

表3 各组羔羊免疫功能指标检测

2.4 血清激素水平的变化由表4可见：(1)GH在第1、30、60 d以试验1组最高，分别为30.15、25.94、32.08 μg/L，各组间差异不显著(P>0.05)。(2)IGF-1在试验第 1 d以试验1组最高为42.73 μg/L，各组间差异不显著(P>0.05)；第30 d以试验1组最高为32.05 μg/L，比对照组(27.42 μg/L)高16.89%，差异显著(P<0.05)，与试验2组(31.24 μg/L)差异不显著(P>0.05)；第60 d以试验1组最高为39.47 μg/L，比对照组(29.54 μg/L)高33.60%，差异显著(P<0.05)，比试验2组(34.47 μg/L)高14.51%，显著差异(P<0.05)。(3)T3在试验第 1 d以试验1组最高为48.97 ng/mL，各组间差异不显著(P>0.05)；第30 d以试验1组最高为48.18 ng/mL，比对照组(39.82 ng/mL)高21.01%，差异显著(P<0.05)，比试验2组(38.73 ng/mL)高24.40%，差异显著(P<0.05)；第60 d以试验1组最高为48.75 ng/mL，与对照组(48.47 ng/mL)差异不显著(P>0.05)，比试验2组(44.33 ng/mL)高9.96%，差异显著(P<0.05)。(4)T4在试验第 1 d以试验1组最高为724.67 ng/mL，各组间差异不显著(P>0.05)；第30 d以试验1组最高为669.91 ng/mL，与对照组(646.23 ng/mL)差异不显著(P>0.05)，比试验2组(610.79 ng/mL)高9.68%，差异显著(P<0.05)；第60 d以试验1组最高为683.85 ng/mL，各组间差异不显著(P>0.05)。

表4 各组羔羊血清生长激素水平检测

3 讨论

3.1 发酵菜籽粕对贵州黑山羊羔羊生长性能的影响菜籽粕中硫代葡萄糖甙、单宁和植酸等抗营养物质对畜禽有毒副作用，从而在很大程度上制约了其在饲料中的应用[9]。本试验发酵菜籽粕经前期试验检测，真蛋白质量分数为45.69%，氨基酸含量为331.48 mg/g，多肽得率为18.31%，硫苷含量为10.32 μmol/g，单宁含量为5.61 μg/g；氨基酸含量比发酵前提高了18.19%，硫苷含量、单宁含量分别比发酵前降低了54.15%、50.62%，极大改善了菜籽粕的营养价值和适口性，在一定程度上增加了粗蛋白质和氨基酸含量，同时降低了抗营养因子含量，与陈昭琪等[10]的研究结果一致。本试验用发酵菜籽粕等氮替代50%豆粕时，试验羊平均日增重和日采食量分别为80.21 g和288.88 g，高于对照组的78.13 g和288.80 g；料重比为3.71，低于对照组的3.81，各指标均未达到差异显著水平。说明发酵菜籽粕等氮替代50%豆粕能提高贵州黑山羊羔羊日增重，降低料重比，促进生长，但是日增重与樊力[11]等用发酵菜粕饲喂波杂羊(波尔山羊与本地羊杂交)的研究结果差异较大，原因可能是贵州本地黑山羊羔羊生长性能比不上杂交羊。本试验用发酵菜籽粕等氮替代100%豆粕时，日增重和日采食量分别为75.00 g和288.30 g，低于对照组；料重比为4.14，高于对照组。分析原因可能是发酵菜籽粕中单宁、硫苷等抗营养因子未完全脱除，当替代比例过大时对试验羊的生长性能产生一定的副作用，抑制其生长。

3.2 发酵菜籽粕对贵州黑山羊羔羊腹泻的影响动物机体免疫能力和外部环境共同决定动物的健康状况。吴明文等[4]添加发酵菜籽粕饲料与全部添加普通豆粕饲料相比能降低仔猪腹泻发生率。有报道在断奶仔猪日粮中添加发酵豆粕，随着添加比例的增加，断奶仔猪肠道后段的大肠杆菌数量明显减少，乳酸杆菌在仔猪肠道前段显著增加[12]。本试验所用发酵菜籽粕经前期试验检测有益活性菌总数为4.35×107cfu/g，试验组无羊发生腹泻，而对照组有1只羊发生腹泻，说明发酵菜籽粕能减少山羊腹泻发生。

3.3 发酵菜籽粕对贵州黑山羊羔羊免疫功能的影响免疫球蛋白水平的高低与动物机体抵抗力的强弱相关[13]，而IgG是血清中含量最高的免疫球蛋白，约占血清中免疫球蛋白总含量的75%，是初级免疫应答中最持久、最重要的抗体，大多数抗菌、抗毒和抗病毒体属于IgG，其在机体抗感染中起到主力军的作用[14]。本试验用发酵菜籽粕等氮替代50%豆粕时，IgG的含量(2.72 g/L)高于对照组(2.71 g/L)，用发酵菜籽粕等氮替代100%豆粕时，IgG的含量(2.64 g/L)低于对照组，但均未达到差异显著水平，这与邓卉等[15]用发酵菜籽粕等氮替代7.5%豆粕可显著提高生长猪血清IgG含量报道不一致，可能是试验动物种类不同或未去除的抗营养因子在一定程度上抑制了免疫球蛋白的合成所致。干扰素是维持动物机体免疫调控网络的1个重要组成部分，其中INF-γ主要由活化的T淋巴细胞和NK细胞产生，在动物先天性免疫反应中发挥重要的作用，能直接反映动物正常状态下的免疫状态。本试验用发酵菜籽粕等氮替代50%豆粕时，INF-γ含量(996.11 pg/mL)高于对照组(989.39 pg/mL)，差异不显著，而用发酵菜籽粕等氮替代100%豆粕时，INF-γ含量(777.52 pg/mL)显著低于对照组，可能与发酵菜籽粕中未去除抗营养因子有关。本试验全期贵州黑山羊IgG、INF-γ含量先降低后升高，可能是试验羊介于3～7月龄，且在试验过程中因为季节、气候等因素影响了免疫分子的分泌，这与杨华等[16]报道萨福克羊免疫分子的分泌具有年周期和昼夜节律变化的特征相似。

3.4 发酵菜籽粕对贵州黑山羊羔羊血清激素水平的影响GH有促进生长和调节代谢的功能，是动物出生后调节生长最重要的激素之一，其水平的变化能反映出机体代谢调节状况。除此之外，动物机体的生长受到肝脏分泌的胰岛素样生长因子(IGF-1)、甲状腺分泌的甲状腺激素(T3、T4)等多种激素的调控，它们是动物生长轴激素的重要组成激素，能够参与调节糖、脂和蛋白质的代谢，对动物的生长发育发挥着关键的调控作用。同时，已有报道甲状腺激素在动物生长方面与 GH共同表现出协同作用[17]。本试验用发酵菜籽粕等氮替代50%豆粕时，试验羊的GH、IGF-1、T3、T4含量均较高，其中GH和T4差异不显著，IGF-1和T3含量达到显著水平。分析原因可能是发酵菜籽粕中产生的多肽促进了 GH 的合成，调节 T3、T4 及IGF-1 的合成与分解，从而增强了动物机体的消化吸收功能，并促进肌肉蛋白质沉积，加速了生长发育。本试验中血清激素水平随着试验时间延长先降低后升高，说明发酵菜籽粕等氮替代日粮中豆粕可调节血清水平在一定范围内波动，可能是发酵菜籽粕中未去除的抗营养因子含量影响了甲状腺活动，但未达到亢进或减弱状态，可能是试验羊瘤胃内微生物对发酵菜籽粕中抗营养因子有一定的降解作用，使体内营养物质代谢趋于相对稳定。

4 结论

在“放牧+补饲”的饲养模式下，发酵菜籽粕以50%的比例等氮替代精料日粮中豆粕饲喂贵州黑山羊羔羊能在一定程度上提高羔羊的平均日增重，降低料重比；增加IgG、INF-γ的含量，增强机体的免疫功能；提高GH、IGF-1、T3、T4质量浓度，促进羔羊生长发育。