阿替洛尔片溶出度测定方法的改进

刘志杰，李东辉，王 鑫

（北京市海淀区食品药品安全监控中心，北京 100094）

阿替洛尔在生物药剂学分类系统（BCS）中属Ⅲ类，即高溶解性、低渗透性药物。2015年版《中国药典（二部）》中阿替洛尔片的溶出度测定方法为紫外分光光度（UV）法，但在实际检验工作中发现，有些产品含量测定结果不高，而溶出度测定值却超过120%。在溶出度测定中，虽然自动取样系统和滤膜多采用惰性材料，但在实际操作中发现某些产品仍存在滤膜吸附现象[1-2]，致使结果变低。该现象一般可通过增加初滤液体积解决。本研究中建立了高效液相色谱（HPLC）法测定阿替洛尔片的溶出度，并与UV法进行了比较，且对原方法的不合理高值进行了探讨。现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

XS205DU型电子天平（瑞士梅特勒-托利多公司）；1260型高效液相色谱仪，包括二极管阵列检测器（DAD，美国 Agilent公司）；TU-1901型紫外分光光度计（北京普析通用责任有限公司）；RC-8MD型智能溶出仪（天津市天大天发科技有限公司）。

1.2 试药

阿替洛尔对照品（中国食品药品检定研究院，批号为 100117-201105，纯度 99.8%）；阿替洛尔片（A 厂，批号分别为 161202，180104，180301，规格为 12.5 mg；B 厂，批号为 20161230，规格为 25 mg）；甲醇、磷酸、辛烷磺酸钠均为色谱纯，其他试剂均为分析纯，水为纯化水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件[3-4]

色谱柱:Waters Symmetry C18柱（150 mm ×4.6 mm，5 μm）；流动相:磷酸盐缓冲液（取磷酸二氢钾 6.8 g，辛烷磺酸钠 1.3 g，加水溶解并稀释至 1000 mL，用磷酸调 pH 至 3.0）-甲醇（70 ∶30，V／V）；检测波长:226 nm；柱温:30 ℃；流速:1.0 mL ／min；进样量:20 μL。

2.2 溶液制备

对照品溶液:称取阿替洛尔对照品9.94 mg，精密称定，置 100 mL容量瓶中，用溶出介质[（9→1000）盐酸溶液]溶解并定容，作对照品贮备液，精密量取2 mL，用溶出介质溶解并定容至20 mL，滤过，取续滤液，作对照品溶液。

供试品溶液:按2015年版《中国药典（二部）》阿替洛尔片项下方法制备溶出液。

2.3 方法学考察

系统适用性试验:取2.2项下2种溶液，按2.1项下色谱条件进样测定，在此色谱条件下的色谱图见图1。结果，待测成分峰峰形对称，对称因子为1.07；待测成分峰与其他峰可达到基线分离，分离度大于2.0，理论板数按阿替洛尔峰计不低于7000。

图1 高效液相色谱图

专属性试验:分别取2个厂家的样品，依法制备供试品溶液20 μL，按2.1项下色谱条件进样测定。结果主成分与各有关物质能完全分离，分离度大于2.0。利用DAD进行峰纯度分析，阿替洛尔峰纯度因子大于980，表明符合定量要求。

线性关系考察:分别取2.2项下对照品溶液10，15，20，25，30 μL 进样（每个进样量梯度连续进样 3 次，取平均值）测定，以进样量（，μg）为横坐标、峰面积（Y）为纵坐标进行线性回归，得回归方程Y=1934.3X+0.6，R2=0.9999（n=5）。结果表明，阿替洛尔进样量在0.0994 ～0.2982 μg范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验:取同一供试品溶液20 μL，按2.1项下色谱条件连续进样5次，测定峰面积。结果的RSD为0.50%（n=5），表明仪器精密度良好。

稳定性试验:取同一供试品溶液，室温下分别于放置 0，2，4，6，8 h 时进样 20 μL，测定。结果阿替洛尔峰面积基本保持不变，RSD为0.82%（n=5），表明室温下供试品溶液放置8 h内稳定。

重复性试验:取溶出样品溶液，室温下分别于放置0，2，4，6,8 h 时进样，测定，结果阿替洛尔峰面积基本保持不变，RSD为0.78%（n=5），表明室温下供试品溶液在8 h内稳定。

回收试验:阿替洛尔片溶出度的法定限度[3]为标示量的70%，故选择回收率的体积分数梯度分别为50%，70%，100%。按阿替洛尔片处方配置空白辅料，精密称定9份，置500 mL容量瓶中，分别精密加入质量浓度为0.5012 g／L 的阿替洛尔对照品溶液 5，7，10 mL，各3份，用溶出介质溶解并定容，按2.1项下色谱条件进样测定，计算回收率。结果见表1。

表1 回收率试验结果（n=9）

2.4 样品溶出度测定

取样品（批号为161202）6片，按2015年版《中国药典（二部）》溶出条件制备溶出液，按2.1项下色谱条件进样20 μL分析，根据标准曲线计算溶出度。同时，采用UV法测定样品溶出度。结果见表2。

表2 2种方法测定阿替洛尔片溶出度结果比较（%）

3 讨论

2015年版《中国药典（二部）》中阿替洛尔片的溶出度检测采用UV法。按法定方法测定阿替洛尔片的含量为97.9%，而溶出百分含量却超出120%，结果不合理。因该制剂的适应面局限，本中心共抽到2个厂家4批次样品，所有批次的溶出度均出现不同程度的不合理高值。按本研究中方法进行测定，溶出度值均显著降低。

对对照品溶液进行全波长扫描，阿替洛尔在226 nm与275 nm波长处有最大吸收，且226 nm波长处的吸光度约为275 nm波长处的8倍，故UV法测定阿替洛尔片含量时均选用226 nm波长。提取溶出样品中杂质的光谱图，此杂质在226 nm波长处具有很强的末端吸收。对于没有分离功能的UV法，无法排除杂质的干扰，测定值常虚高，无法反映溶出样品本身效果，存在较大的质控风险。比较发现，对于UV法测定溶出度值较高的溶出样品，其液相色谱的杂质峰面积也相应较大。

为进一步探讨阿替洛尔片溶出样品中的杂质，以溶出介质配制相同质量浓度的样品溶液，按本研究方法测定，并未检出此杂质。这说明该杂质并非是药物辅料或溶出介质引入，而是溶出过程中新产生的物质。与稳定性试验不同的是，溶出过程是在37℃下进行，溶出样品在自动收集系统中与管路充分接触，这些都增加了新物质产生的可能性。有文献报道，阿替洛尔原料与某些辅料或辅料中的杂质存在相容性问题[5-6]，溶出过程的特殊环境是否启动了某些化学反应还有待进一步研究。综上所述，本研究中建立的阿替洛尔片溶出度测定方法，简单，快速，准确，专属性强，可有效控制阿替洛尔片的溶出效果。