卵巢癌患者血清人附睾蛋白4、抗缪勒管激素水平与T淋巴细胞水平的相关性研究

朱莉，邓飞，秦惠萍，贺春兰，孙兆霞，姚佳佳

1青海省中医院检验科，西宁810000

2青海红十字医院检验科，西宁810000

3青海大学医学检验中心，西宁810001

卵巢癌是女性常见的恶性肿瘤，其病死率居妇科恶性肿瘤首位，严重影响女性的生命健康及生活质量[1]。目前，卵巢癌的发病机制尚未明确，普遍认为与遗传和内分泌因素等有关，早期卵巢癌的临床症状缺乏典型性，随着病情不断发展可出现腹胀、腹痛、消瘦等症状[2]。人附睾蛋白4（human epididymis protein 4，HE4）最早于1991年被发现，是早期诊断和鉴别诊断卵巢癌的重要血清标志物[3-4]；抗缪勒管激素（anti-Müllerian hormone，AMH）属于转化生长因子β超家族的一种多肽，是由两个相同的70 kD亚基组成的二聚糖蛋白，当机体缺乏AMH时，缪勒管可发展为子宫、输卵管和阴道上部[5]。但临床上对HE4、AMH在卵巢癌中的表达及与T淋巴细胞水平的相关研究较少[6]。因此，本研究探讨HE4、AMH在卵巢癌中的水平及与T淋巴细胞水平的相关性，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2016年1月至2018年1月青海省中医院和青海省红十字医院收治的卵巢癌患者。纳入标准：①均符合卵巢癌诊断标准，均经病理学检查确诊；②均接受手术治疗，且患者均可耐受手术；③意识清楚，能与医生进行沟通、交流。排除标准：①合并凝血异常、精神异常；②合并认知功能障碍或伴有自身免疫疾病；③临床资料不完整。依据纳入和排除标准，本研究共纳入78例卵巢癌患者作为观察组，年龄19～71岁，平均年龄为（54.98±5.32）岁；TNM分期：Ⅰ期5例，Ⅱ期20例，Ⅲ期35例，Ⅳ期18例；病理类型：浆液性囊腺癌32例，黏液性囊腺癌27例，子宫内膜癌18例，透明细胞癌1例。选取医院同期收治的卵巢良性肿瘤患者。纳入标准：均符合卵巢良性肿瘤诊断标准，经病理学检查确诊。排除标准：①合并其他部位恶性肿瘤；②合并严重肝肾功能异常、自身免疫系统疾病；③临床资料不完整。依据纳入和排除标准，本研究共纳入53例卵巢良性肿瘤患者作为对照1组，年龄16～68岁，平均年龄为（43.59±5.13）岁；病理类型：卵巢畸胎瘤12例，子宫内膜异位囊肿33例，浆液性囊腺瘤8例。选取在医院同期进行健康体检的女性健康者39例作为对照2组，年龄17～67岁，平均年龄为（44.18±5.31）岁。3组受试者年龄比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

1.2 检测方法和观察指标

入院后次日清晨抽取了观察组与对照1组患者空腹静脉血5 ml，健康体检当天抽取了对照2组受试者空腹静脉血5 ml。采用化学发光仪检测3组受试者血清HE4（参考值＜70 pmol/L）和AMH水平；采用流式细胞仪检测观察组与对照1组患者T淋巴细胞亚群水平，包括CD3+、CD4+、CD8+水平和CD4+/CD8+。

1.3 统计学方法

采用SPSS 18.0软件对所有数据进行统计分析。计数资料以例数和率（%）标准，组间比较采用χ2检验；计量资料以均数±标准差（±s）表示，多组间比较用单因素方差分析，多组间两两比较采用LSD-t检验，两组间比较采用两独立样本t检验；相关性分析采用Pearson相关分析；以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.13 组受试者HE 4和AMH水平的比较

3组受试者HE4和AMH水平比较，差异均有统计学意义（P＜0.01）。观察组患者HE4水平明显高于对照1组患者和对照2组受试者，AMH水平明显低于对照1组患者和对照2组受试者，差异均有统计学意义（P＜0.01）。对照1组患者与对照2组受试者HE4和AMH水平比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。（表1）

表1 3组受试者HE 4和AMH水平的比较（±s）

表1 3组受试者HE 4和AMH水平的比较（±s）

注：a与对照1组比较，P＜0.01；b与对照2组比较，P＜0.01

AMH（ng/L）0.52±0.11a b 1.52±0.64 1.55±0.49 115.344 0.000 HE4（pmol/L）341.54±22.37a b 57.71±7.13 55.19±5.63 6750.807 0.000组别观察组（n=78）对照1组（n=53）对照2组（n=39）F值P值

2.2 观察组和对照 1组患者 T淋巴细胞水平的比较

观察组患者 CD3+、CD4+水平和 CD4+/CD8+均明显低于对照1组患者，CD8+水平明显高于对照1组患者，差异均有统计学意义（P＜0.01）。（表2）

表2 观察组和对照 1组患者 T淋巴细胞水平的比较（±s）

表2 观察组和对照 1组患者 T淋巴细胞水平的比较（±s）

组别观察组（n=78）对照1组（n=53）t值CD3+（%）57.46±2.46 69.57±4.89 18.688 CD4+（%）27.43±2.14 42.37±4.61 24.966 CD8+（%）24.21±2.44 21.11±2.09 7.554 CD4+/CD8+1.13±0.21 2.01±0.57 12.465P值0.0000.0000.0000.000

2.3 观察组患者HE 4、AMH水平与T淋巴细胞的相关性分析

观察组患者HE4与CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均呈负相关（P＜0.05），与CD8+呈正相关（P＜0.05）；AMH与 CD3+、CD4+、CD4+/CD8+均呈正相关（P＜0.05），与CD8+呈负相关（P＜0.05）。（表3）

表3 HE 4、AMH水平与 T淋巴细胞的相关性（r值）

3 讨论

卵巢癌是女性病死率最高的生殖系统恶性肿瘤，早期卵巢癌患者的临床症状缺乏典型性，多数患者确诊时已处于中晚期，远期预后较差[7-8]。因此，早诊断、早治疗卵巢癌对改善患者的预后具有重要的意义。HE4基因位于人染色体20q12-13.1，其编码的HE4蛋白的分子量为20～25 kD。临床研究表明，HE4在卵巢癌患者中表达水平较高，而在卵巢良性肿瘤中表达水平较低或不表达[9-10]。HE4是一种从人体附睾上皮细胞中发现的新型肿瘤标志物，在正常组织、良性病变组织或血清中表达水平相对较低，但在卵巢癌患者中表达水平相对较高。本研究结果显示，观察组患者HE4水平明显高于对照1组患者和对照2组受试者，AMH水平明显低于对照1组患者和对照2组受试者，差异均有统计学意义（P＜0.01）。表明HE4在卵巢癌患者中水平较高，可直接参与肿瘤的发生发展过程。AMH又称为缪勒管抑制物，最早于20世纪40年代发现。成熟的AMH主要由二硫键连接72 kD单体形成二聚体糖蛋白，属于转化生长因子β超家族成员，且可通过AMH受体Ⅱ发挥生物学作用[11]。临床研究表明，AMH在评估卵巢储备方面具有明显的优势，是卵巢衰老最准确的生物标志物，且该指标不受月经周期、妊娠及药物的影响[12]。由此可见，HE4、AMH可反映卵巢功能，在卵巢癌的诊断、治疗中发挥重要作用。

肿瘤细胞可通过自分泌与旁分泌，改善并维持自身的生存和发展状态，促进肿瘤的增殖与生长。全身与局部组织均可通过代谢、免疫、结构或功能改变等方式影响肿瘤的发生发展过程。研究显示，肿瘤组织与肿瘤微环境相互促进、相互依存，但二者又相互拮抗，是现代肿瘤生物学的核心[13]。免疫功能是生物体进化、个体发育过程中相对重要的防卫能力，也是肿瘤微环境的重要组成部分。健康机体的免疫功能包括抵抗外界传染因子的免疫防护功能、机体清除受损细胞及维持内环境稳态的能力，可及时发现并清除细胞。人体免疫主要包括细胞免疫与体液免疫，且以细胞免疫为主。研究显示，T淋巴细胞不仅在免疫耐受中发挥重要的作用，还在肿瘤免疫逃逸中发挥作用，多表现为CD3+、CD4+水平和CD4+/CD8+的下降，CD8+水平的升高[14]。因此，通过测定T淋巴细胞水平可反映肿瘤微环境的免疫情况。本研究结果显示，观察组患者CD3+、CD4+水平和CD4+/CD8+均明显低于对照1组患者，CD8+水平明显高于对照1组患者，差异均有统计学意义（P＜0.01）。表明卵巢癌的发生发展过程中伴有免疫水平的下降，导致肿瘤微环境向促进卵巢癌方向发展。为进一步了解HE4、AMH与肿瘤微环境的相关性，本研究采用相关性分析，结果显示，观察组患者HE4与CD3+、CD4+、CD4+/CD8+呈负相关（P＜0.05），与CD8+呈正相关（P＜0.05）；AMH与CD3+、CD4+、CD4+/CD8+呈正相关（P＜0.05），与CD8+呈负相关（P＜0.05）。表明HE4、AMH在卵巢癌患者中水平异常，且与肿瘤微环境存在相关性。

综上所述，卵巢癌患者中HE4水平较高，AMH水平较低，与T淋巴细胞存在相关性，测定其水平有助于评估患者疾病严重程度并指导临床治疗。