屎肠球菌对21 日龄AA 肉鸡小肠发育和消化酶活力的影响

■胡真真 毛俊舟 董 丽 喻礼怀

（扬州大学动物科学与技术学院，江苏扬州225009）

屎肠球菌（Enterococcus faecium）属乳酸菌类。肉鸡小肠是吸收营养物质的主要场所，绒毛是小肠黏膜的特殊结构，十二指肠及空肠中绒毛分布最密[1]，屎肠球菌进入肉鸡肠道后，会较快地黏附肠道黏膜，抑制病原菌的黏附、维持肠道微生态平衡；降低肠道pH 值、改善动物生理状态。同时参与肉鸡生长、促进新陈代谢、促进非特异性免疫[2-3]。研究结果表明，屎肠球菌生长繁殖性能较好，且抗逆性强，具有无污染、无残留、无毒等特点，对动物免疫功能和消化功能有促进作用，因此它将是绿色的抗生素替代品的较好选择[4]。但是目前关于屎肠球菌对幼龄肉鸡小肠发育等的相关研究较少。故本试验基于前人已有的研究成果，进一步探究不同剂量水平的屎肠球菌对21 日龄AA 肉鸡小肠发育及部分消化酶活力的影响，寻求能够替代抗生素的屎肠球菌最佳添加剂量及功能特点，以达到在肉鸡前期生长过程中的合理应用。

1 材料和方法

1.1 材料

屎肠球菌NCIMB10415，有效含量1.0×1010CFU/g；试验选取600 只1 日龄AA 肉鸡（公鸡），试验时间为2016年6月～2016年7月，试验地点为江苏省家禽研究所仪征试验基地。

1.2 试验动物及分组

试验选取600只1日龄AA肉鸡（公鸡），随机分为5 组，每组6 个重复，每个重复20 只鸡，试验期21 d。对照组（CON 组）饲喂基础日粮，抗生素组（Ant 组）在基础日粮中添加0.1%金霉素，低（LEF 组）、中（MEF组）、高（HEF 组）剂量屎肠球菌组分别在基础日粮中添加50、100、200 mg/kg屎肠球菌。

1.3 试验日粮与饲养管理

试验前对鸡舍和器皿灭菌消毒，调节室温为22 ℃，光照强度30 lx，适当通风。试验阶段动物采取网上平养，自由采食和饮水。定期清理粪便，消毒。按常规模式进行免疫。

参照NRC（1994）配制基础日粮。1～21 d 基础日粮的组成及营养水平见表1。

表1 基础日粮组成及营养水平（风干基础）

1.4 样品采集

于试验第21 d 08：00 采样，采样前12 h 停止饲喂，每组随机抓取6只鸡，每个重复1只。颈静脉放血处死，采血，脱毛，打开腹腔。先分离出空肠，取空肠中段3 cm，用PBS冲洗肠道，取0.5 cm左右肠段2块，放入多聚甲醛固定液中保存。再分离出十二指肠、空肠，采集各肠段食糜分别移入冷冻离心管中，装满冻存管2/3，样品全部放置于液氮中保存，后转移至-80 ℃冰箱中冻存，用于消化酶活力的测定。

1.5 指标测定与方法

测定21 日龄肉鸡空肠发育指标，测定肠道形态指标为绒毛高度、隐窝深度、绒毛宽度及绒隐比。取出固定液中的肠段，处理后用石蜡包埋，后用切片机将组织蜡块切片，再根据苏木精-伊红染色法将切片染色并制成永久切片用于组织学观察，用光学显微镜观察组织切片，并从每个肠道切片选出10根完好的绒毛和隐窝，测量绒毛高度、隐窝深度和绒毛宽度。

测定21 日龄肉鸡十二指肠、空肠黏膜酶活力指标，分别为糜蛋白酶（Chymotrypsin，CAS）（货号：A080-3）、麦芽糖酶（Maltase）（货号：A082-3）、脂肪酶（Lipase，LPS）（货号：A054-1）、胰蛋白酶（Trypsin）（货号：A080-2）、乳糖酶（Lactase）（货号：A082-1）。具体操作方法见试剂盒说明书，试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。

1.6 统计分析

采用Excel 软件对数据进行初步处理，用SPSS 18.0 进行统计，采用one-way ANOVA 进行单因素方差分析，采用Duncan's 法进行多重比较，以P＜0.05 为差异显著。

2 结果

2.1 屎肠球菌对21 日龄AA 肉鸡空肠肠道结构的影响

表2 屎肠球菌对21日龄AA肉鸡空肠肠道结构的影响

由表2可知，21日龄肉鸡各处理组间空肠绒毛宽度及绒隐比均无显著差异（P＞0.05）。相比于CON组，LEF 组肉鸡空肠中绒毛高度有显著性增加（P＜0.05），Ant 组肉鸡空肠中隐窝深度也有显著性增加（P＜0.05），其他各处理组间差异不显著（P＞0.05）。

2.2 屎肠球菌对21日龄AA肉鸡小肠酶活的影响

表3 屎肠球菌对21日龄AA肉鸡十二指肠消化酶活性的影响（U/mg prot）

表4 屎肠球菌对21日龄AA肉鸡空肠消化酶活性的影响

由表3 可知，各处理组间21 日龄AA 肉鸡十二指肠酶活中糜蛋白酶、胰蛋白酶及乳糖酶无显著差异（P＞0.05）。与CON 组相比，HEF 组和Ant 组麦芽糖酶活性显著提高（P＜0.05）。LEF 组、HEF 组及Ant 组脂肪酶活性显著低于CON组（P＜0.05）。

由表4 可知，各处理组相比，脂肪酶和胰蛋白酶影响不显著（P＞0.05）。相比于CON 组，LEF 组、HEF组和Ant 组肉鸡空肠中糜蛋白酶活性显著降低（P＜0.05），HEF 组和Ant 组麦芽糖酶活性显著提高（P＜0.05）。与CON组相比，Ant组和HEF组肉鸡空肠中乳糖酶活性显著提高（P＜0.05）。

3 讨论

3.1 屎肠球菌对AA肉鸡小肠发育的影响

正常的小肠绒毛呈柱状、细长且排列整齐紧密，当小肠内微环境失去平衡时，绒毛组织会表现出绒毛歪斜、倒伏及短粗等受损现象[1]。小肠形态结构的完整性保证了小肠的吸收消化功能，且小肠绒毛高度、隐窝深度和绒隐比（绒毛高度/隐窝深度）起着更为关键的作用[5]。玄家洁[6]发现，3%屎肠球菌复合物可显著提高肉鸡空肠和十二指肠绒毛高度和绒隐比。李树鹏等[7]证实，屎肠球菌可使肉鸡回肠绒毛显著增长、变粗。Awad 等[8]发现，肉鸡饲粮中添加屎肠球菌后，小肠绒毛高度及绒隐比都显著提高。本试验结果表明，相比于CON组，LEF组21日龄肉鸡空肠中绒毛高度有显著性增加，Ant 组肉鸡空肠中隐窝深度也有显著性增加，其他各处理组间差异不显著，这与玄家洁及Awad的研究结果一致。添加屎肠球菌增加了小肠的绒毛高度，表明屎肠球菌增强了肠道的消化吸收功能；而抗生素的添加使隐窝深度有所增加，从而使营养物质的消化吸收功能降低。综合分析比较，21 日龄肉鸡日粮中添加50 mg/kg屎肠球菌可增加小肠绒毛高度，这可能与添加剂量有关，具体确切原因还有待进一步研究。

3.2 屎肠球菌对AA肉鸡小肠酶活的影响

动物的消化道内，蛋白酶等的分泌量会受到多种因素的影响，而且消化酶的分泌状况会直接影响营养物质的消化率[9-10]。脂肪酶、糜蛋白酶、胃蛋白酶和胰蛋白酶等共同参与完成家禽体内营养物质的消化过程，麦芽糖酶活性与淀粉降解有着密切关系[5，9-10]。Jin等报道在饲粮中添加屎肠球菌可显著提高肉鸡小肠内胰蛋白酶活性[11-12]。潘木水等[13]研究表明在肉鸡饲粮中添加屎肠球菌可分别提高小肠蛋白酶和糜蛋白酶的活性15%和18%。王志祥等提出添加0.25%的屎肠球菌可显著提高断奶仔猪十二指肠食糜脂肪酶活性。李华丽[14]发现灌喂1.0 ml/kg 乳酸菌抑制了肉鸡小肠脂肪酶活性。本试验结果中，添加屎肠球菌能显著提高AA 肉鸡十二指肠、空肠中麦芽糖酶活性以及空肠中乳糖酶活性，胰蛋白酶活性无显著变化，空肠中糜蛋白酶活性以及十二指肠中脂肪酶活性均降低。葛龙等[15]发现屎肠球菌能分解乳糖、麦芽糖等，故肉鸡小肠中麦芽糖酶和乳糖酶活性的提高的一个原可能是屎肠球菌对麦芽糖和乳糖的分解作用产生的。糜蛋白酶以及脂肪酶活性的降低与潘木水和王志祥的结论相反，但与李华丽的结论一致，这可能与屎肠球菌的添加剂量有关，具体原因还有待进一步研究。

4 结论

本试验结果表明，在21日龄AA肉鸡基础日粮中添加200 mg/kg 屎肠球菌在一定程度上提高了AA 肉鸡十二指肠、空肠肠道内麦芽糖酶和乳糖酶活性，添加50 mg/kg屎肠球菌可增加AA肉鸡空肠肠道绒毛高度。故添加屎肠球菌可改善肉鸡小肠绒毛发育及活性，提高肉鸡生长性能，但与添加剂量有关。