珍珠菜提取物的抗缺氧作用

张嵱彬 杨艳 王丽 廖秀 杨娟 傅舒安 王道平 杨小生，

(1贵州医科大学省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室，贵州 贵阳 550025；2贵州省中国科学院天然产物化学重点实验室)

珍珠菜(Lysimachia clethroides Duby)为报春花科植物虎尾珍珠菜的根或全草，又叫扯根菜、山酸汤秆、通筋草、酸罐罐等。具有活血调经、利水消肿等功效。可治疗妇女月经不调、小儿疳积、跌打损伤等〔1〕。目前对珍珠菜的药理学研究主要集中在抗肿瘤〔2〕和抗白血病〔3〕方面，而关于珍珠菜提取物耐缺氧的研究却未见报道。本研究建立常压缺氧模型、亚硝酸钠中毒模型和急性脑缺血性缺氧模型，旨在探究珍珠菜提取物的耐缺氧作用。

1 材料与方法

1.1仪器、试药与动物 RT-6000酶标仪(美国，雷杜)，XFB-200高速中药粉碎机(长沙市雨花区中诚制药机械厂)，Centrifuge-5427 R 低温高速离心机(德国艾本德股份有限公司)，N-1200B旋转蒸发仪(上海爱朗仪器有限公司)，SHZ-CD循环水式多用真空泵(巩义市予华仪器有限责任公司)，JA2003电子天平(上海浦春计量仪器有限公司)，101-2A电热鼓风干燥箱(天津市泰斯特仪器公司)，SB25-12DTD超声波清洗机(宁波新芝生物科技股份有限公司)。

珍珠菜采自贵州省榕江县，经鉴定为珍珠菜全草；钠石灰(成都金山化学试剂有限公司)；亚硝酸钠(重庆百倍精细化工厂)；超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)试剂盒(南京建成生物工程研究所，生产批号：20180302)，红景天胶囊(北京同仁堂，批准文号：国食健字G20100243)；昆明种小鼠90只，雌雄各半，体重18～22 g〔合格证号：SCXK(军)2012-0011由重庆腾鑫生物技术有限公司提供，SPF级〕。

1.2动物分组 将90只小鼠随机分为空白组、红景天组和珍珠菜组，雌雄各半，每组30只，每组分别进行常压缺氧实验、亚硝酸钠中毒实验和急性脑缺血性缺氧实验。

1.3试剂制备 将珍珠菜阴干粉碎，过筛，经70%甲醇回流提取3次，合并过滤液，浓缩，得浸膏。将浸膏烘干，按照1 ml原药液含生药1 g的方法〔4〕，珍珠菜浸膏的得率为14.70%，经计算得出应加水将珍珠菜浸膏配置成0.735 g/ml的溶液，备用。

1.4给药剂量 红景天胶囊的成人剂量为40 mg/(kg·d)，折合成动物的给药剂量，经计算得出红景天组给药剂量为0.063 g/(ml·d)，珍珠菜组给药剂量为0.735 g/(ml·d)，灌胃体积均为10 g/(ml·d)。空白组给予等量生理盐水〔5〕。

1.5常压缺氧实验 末次灌胃给药后，将小鼠放入250 ml广口瓶内，瓶内放置钠石灰10 g，上置滤纸，橡胶塞表面涂抹凡士林，塞紧瓶盖，使装置密闭，记录小鼠在密闭空间内的存活时间。实验结束后取出小鼠心脏和大脑，洗净血液，称重，匀浆，按照试剂盒方法测定心肌和大脑中SOD和GSH-Px活力〔6,7〕。

1.6亚硝酸钠中毒实验 于末次灌胃给药1 h后，小鼠腹腔注射1 ml/(10 mg·kg)亚硝酸钠，记录小鼠从亚硝酸钠注射完毕到死亡的时间，实验结束后取出小鼠心脏和大脑，洗净血液，称重，匀浆，按照试剂盒方法测定心肌和大脑中SOD和GSH-Px的活力〔6，7〕。

1.7急性脑缺血性缺氧实验 于末次灌胃给药1 h后，各组均在双耳连线处快速断头，记录小鼠断头后至张口呼吸次数和喘息停止时间(以小鼠张口呼吸停止且舌头外露为标准停止计时)。实验结束后取出小鼠心脏和大脑，洗净血液，称重，匀浆，按照试剂盒方法测定心肌和大脑中SOD和GSH-Px的活力〔6,7〕。

1.8统计学方法 采用SPSS17.0软件进行单因素方差分析、LSD-t检验。

2 结 果

2.1常压缺氧实验结果 红景天组和珍珠菜组生存时间〔(42.30±2.71)、(35.91±2.51)min〕明显长于空白组〔(26.50±4.72)min,P<0.05,P<0.01〕，珍珠菜组存活时间延长了35.51%。珍珠菜组心肌中SOD和GSH-Px活性明显高于空白组，脑组织GSH-Px活力明显高于空白组(P<0.05)，见表1。

2.2亚硝酸钠中毒实验结果 红景天组和珍珠菜组生存时间〔(11.00±1.50)、(8.89±1.45)min〕明显长于空白组〔(7.40±0.84)min,P<0.05,P<0.01〕，珍珠菜组存活时间延长了20.14%。珍珠菜组心肌和脑组织中SOD和GSH-Px活性均明显高于空白组(P<0.05或P<0.01)。见表2。

2.3急性脑缺血性缺氧实验结果 红景天组和珍珠菜组生存时间〔(23.49±3.13)、(31.40±3.42)min〕明显长于空白组〔(20.22±1.67)min,P<0.05,P<0.01〕，珍珠菜组存活时间延长了55.29%。珍珠菜组心肌和脑组织中SOD和GSH-Px活性均明显高于空白组(P<0.05或P<0.01)。见表3。

表1 珍珠菜提取物在常压缺氧下对小鼠心肌、脑组织中SOD和GSH-Px的影响

与空白组比较：1)P<0.05,2)P<0.01；下表同

表2 珍珠菜提取物对亚硝酸钠中毒所致小鼠心肌、脑组织中SOD和GSH-Px的影响

表3 珍珠菜提取物对急性脑缺血性缺氧所致小鼠心肌、脑组织中SOD和GSH-Px的影响

3 讨 论

珍珠菜属植物中的主要化学成分为三萜及其皂苷类、黄酮及其皂苷类、甾醇类、苯并内酯及有机酸类〔8,9〕。研究表明，黄酮类化合物有较好的抗氧化活性和清除自由基能力，从而对缺氧引起的机体氧化损伤具有保护作用〔10〕。缺氧是临床上常见的病理过程，可导致多种疾病发生，引起机体代谢、功能甚至结构异常，严重或长期缺氧可导致机体心脑等重要器官死亡。小鼠在密闭环境中受到缺氧的损害，主要反映在心脏和脑部。本实验结果表明，珍珠菜粗提物能够使小鼠缺氧存活时间延长，有助于改善机体的缺氧损伤。

在机体缺氧的情况下，SOD和GSH-Px 很容易被诱导产生，其活性可作为机体抗氧化能力的标准。珍珠菜粗提物能够清除过量的氧自由基，催化超氧阴离子自由基歧化生成氧和过氧化氢，修复受损细胞，可减少缺氧对心肌组织和脑组织造成的损伤。SOD值越大，保护细胞免受损伤的能力越强；GSH-Px酶活力越大，保护细胞膜结构和功能完整的能力越强〔11〕。

综上所述，珍珠菜提取物能显著延长常压缺氧小鼠和急性脑缺血性缺氧小鼠的存活时间，提高机体抗氧化能力，增强小鼠缺氧耐受力，延长缺氧耐受时间，降低自由基对心肌和脑组织的损伤。