防风解热合剂解热镇痛抗炎药理作用的实验研究∗

刘 羽 张月娟△ 余 毅 李 弘 刘 林

（1.湖南中医药大学第一附属医院，湖南 长沙 410007；2.湖南中医药大学，湖南 长沙410208）

防风解热合剂（防风合剂）是以地骨皮、防风等十 余味中药制成的复方合剂，适应证为清热解表、止咳化痰，主要用于治疗小儿急性支气管炎和慢性支气管炎急性发作，可迅速缓解其临床症状及体征。为了扩大药物临床应用并为临床用药提供理论依据，本文就防风合剂的解热、镇痛、抗炎作用进行了相关实验探讨。

1 材料与方法

1.1 实验动物 新西兰兔70只，雌雄各半，购自长沙天勤生物技术有限公司，许可证号：SCXK（湘）2009-0012。SD大鼠和ICR小鼠，SPF级，均购自湖南斯莱克景达实验动物有限公司，许可证号：SCXK（湘）2013-0004。

1.2 试药与仪器 1）药物与试剂：防风合剂，生药含量18 g/10mL，由湖南中医药大学第一附属医院提供，批号20140504，临床拟用人每日生药量为30 mL。儿感清口服液，北京同仁堂股份有限公司，批号：4260057。安乃近，华中药业股份有限公司，批号20131155。罗痛定，山西云鹏制药有限公司，批号A131101。阿司匹林，湖南亚大制药有限公司，批号20140519。醋酸泼尼松片，浙江仙琚制药股份有限公司，批号140347。大肠杆菌内毒素，Sigma公司进口分装；2，4-二硝基苯酚，上海试剂三厂，批号0908820；冰醋酸，湖南汇虹试剂有限公司，批号20131026；角叉菜胶，索莱宝公司进口分装；二甲苯，湖南汇虹试剂有限公司，批号20120614。2）仪器：AY-120电子分析天平，日本岛津；YLS-7B足趾容积测定仪，山东省医学科学院设备；8mm打耳器，由北京吉安得尔科技有限公司生产；BL-420生物信号采集系统，成都泰盟。

1.3 内毒素致家兔发热实验 新西兰兔70只，剔除不在正常体温范围（38.0～39.2℃）及体温波动＞0.3℃，最终选取60只，随机分为对照组、安乃近组、儿感清口服液组和防风合剂高、中、低剂量组，每组10只。对照组给予蒸馏水10 mL/kg，防风合剂高、中、低剂量予防风合剂药液5.6、2.8、1.4 mL/kg，安乃近组予安乃近药液0.14 g/kg，儿感清口服液组予儿感清口服液2.8 mL/kg.灌胃给药，每日1次，连续3 d。末次给药前，耳缘静脉注射大肠杆菌内毒素10 μg/kg，注射后立即灌胃给予相应药物。然后测定致热后0.5、1、2、3、4、6 h兔体温值。

1.4 2，4-二硝基苯酚致大鼠发热实验 SD大鼠70只，实验前预测体温3次，剔除不在正常体温范围（36.6～38.3℃）及体温波动＞0.3℃，最终选取体温合格的动物60只，随机分为对照组、安乃近组、儿感清口服液组和防风合剂高、中、低剂量组，每组10只。对照组给予蒸馏水10 mL/kg，防风合剂高、中、低剂量组予防风合剂药液10.8、5.4、2.7 mL/kg，安乃近组予安乃近药液0.27 g/kg，儿感清口服液组予儿感清口服液5.4 mL/kg，灌胃给药，连续3 d。末次给药后0.5 h后，皮下注射0.15%的2，4-二硝基苯酚1 mL/100 g，然后测量造模后0.5、1、1.5、2、2.5、3 h体温各1次，共6次。

1.5 小鼠热板实验 预选痛阈值在5～30 s内的18～22 g雌性ICR小鼠60只，随机分为对照组、罗痛定组、儿感清口服液组和防风合剂高、中、低剂量组，每组10只。对照组给予蒸馏水20 mL/kg，防风合剂高、中、低剂量组予防风合剂药液15.6、7.8、3.9 mL/kg，罗痛定组予罗痛定药液15.6 mg/kg，儿感清口服液组予儿感清口服液7.8 mL/kg，灌胃给药，连续药3 d。用热板法分别测各鼠末次给药后1、2、3 h的痛阈值。

1.6 小鼠醋酸扭体实验 取60只ICR小鼠，雌雄各半，体质量18～22 g，随机分组。分组与给药同“1.5小鼠热板实验”，于末次药后1 h，腹腔注射0.6%冰醋酸0.1 mL/10 g，记录给药后15 min内各动物的扭体次数，并计算扭体抑制率：扭体抑制率=［（对照组扭体次数-给药组扭体次数）/对照组扭体次数］×100%。

1.7 大鼠足肿胀实验 取SD大鼠60只，雌雄各半，体质量180～220 g。随机分为对照组、阿司匹林组、儿感清口服液组和防风合剂高、中、低剂量组，每组10只。对照组给予蒸馏水10 mL/kg，防风合剂高、中、低剂量组予防风合剂药液10.8、5.4、2.7 mL/kg，阿司匹林组予阿司匹林药液0.135 g/kg，儿感清口服液组予儿感清口服液5.4 mL/kg。灌胃给药，每日1次，连续5 d。末次给药30 min后，大鼠右后肢足跖皮下注射1%角叉菜胶0.1 mL致炎。于致炎后1、2、3、4、5、6 h测右踝关节下容积1次。以足肿胀度、足肿胀抑制率为指标，计算肿胀度。肿胀度=致炎后足趾容积-致炎前足趾容积，足肿胀抑制率=［（对照组足肿胀度-给药组足肿胀度）/对照组足肿胀度］×100%。

1.8 小鼠耳肿胀实验 取ICR小鼠60只，雌雄各半，体质量180～220 g。随机分为对照组、阿司匹林组、儿感清口服液组和防风合剂高、中、低剂量组，每组10只。对照组给予蒸馏水20 mL/kg，防风合剂高、中、低剂量组予防风合剂药液15.6、7.8、3.9 mL/kg，阿司匹林组予阿司匹林药液0.195 g/kg，儿感清口服液组予儿感清口服液7.8 mL/kg。每日1次，连续7 d。末次给药1 h后，各组小鼠均于右耳正反面各均匀涂抹25 μL二甲苯致炎，致炎1 h后处死动物，用8 mm打孔器打取左右耳同一部位圆片，称质量，按下式计算肿胀度和肿胀抑制率。肿胀度=右耳片质量-左耳片质量。耳肿胀抑制率=（对照组耳肿胀度-给药组耳肿胀度）/对照组耳肿胀度×100%。

1.9 统计学处理 应用SPSS19.0统计软件。计量资料以（±s）表示，数据分析采用单因素方差分析及t检验。P＜0.05为差异有显著统计学意义。

2 结 果

2.1 各组家兔内毒素致发热实验体温比较 见表1。与对照组比较，防风合剂高剂量组大鼠药后1、2、3、4 h时间点体温均显著降低（P＜0.05或P＜0.01）；防风合剂中剂量组大鼠药后2、3、4 h时间点体温均显著降低（P＜0.05或P＜0.01）；防风合剂低剂量组大鼠药后2 h时间点体温显著降低（P＜0.05）。与安乃近组比较，儿感清组大鼠药后3、4 h时间点体温均显著升高（P＜0.05）；与儿感清组比较，其他各组大鼠药后各时间点体温差异无统计学意义（P＞0.05）；与防风高剂量组比较，其他各组大鼠药后各时间点体温变化差异无统计学意义（P＞0.05）；与防风中剂量组比较，防风低剂量组大鼠药后各时间点体温变化差异无统计学意义（P＞0.05）。

表1 各组家兔内毒素致发热实验体温比较（℃，±s）

表1 各组家兔内毒素致发热实验体温比较（℃，±s）

与对照组比较，∗P＜0.05，∗∗P＜0.01；与安乃近组比较，▲P＜0.05。下同

给药后组 别n 基础体温对照组安乃近组儿感清组防风高剂量组防风中剂量组防风低剂量组10101010101038.92±0.2638.88±0.1838.90±0.2738.91±0.2038.91±0.2138.89±0.240.5h 39.43±0.4739.19±0.2139.30±0.3239.24±0.3239.30±0.3939.41±0.361h 39.68±0.4239.26±0.18**39.49±0.3039.31±0.33*39.41±0.4339.49±0.352h 40.01±0.3439.48±0.25**39.62±0.39*39.52±0.49*39.63±0.27*39.65±0.39*3h 40.14±0.3139.57±0.41**39.94±0.34▲39.77±0.34*39.85±0.4539.86±0.494h 40.20±0.2439.58±0.30**39.95±0.31▲39.80±0.22**39.87±0.25**39.89±0.436h 39.69±0.4739.44±0.3039.58±0.3439.51±0.3539.55±0.3739.57±0.31

2.2 各组大鼠2，4-二硝基苯酚致发热实验体温比较 见表2。与对照组比较，防风合剂高剂量组大鼠药后1、1.5、2 h时间点体温均显著降低（P＜0.05或P＜0.01）；防风合剂中剂量组大鼠药后1、1.5、2 h时间点体温均显著降低（P＜0.05或P＜0.01）。与安乃近组比较，其他各组体温差异无统计学意义（P＞0.05）；与儿感清组比较，其他各组体温差异无统计学意义（P＞0.05）；与防风高剂量组比较，其他各组体温差异无统计学意义（P＞0.05）；与防风中剂量组比较，防风低剂量组大鼠药后各时间点体温差异无统计学意义（P＞0.05）。

表2 各组大鼠2，4-二硝基苯酚致发热实验体温比较（℃，±s）

表2 各组大鼠2，4-二硝基苯酚致发热实验体温比较（℃，±s）

给药后组 别n基础体温对照组安乃近组儿感清组防风高剂量组防风中剂量组防风低剂量组10101010101037.74±0.1837.74±0.1537.71±0.1937.79±0.1637.81±0.1537.79±0.160.5h 38.14±0.3138.00±0.4838.14±0.2638.12±0.3938.06±0.1838.32±0.361h 38.39±0.2537.98±0.45*38.02±0.35*37.99±0.44*38.05±0.26*38.25±0.401.5h 38.50±0.2737.94±0.56*38.19±0.4538.07±0.58*38.22±0.27*38.26±0.682h 38.86±0.3338.16±0.62**38.41±0.46*38.19±0.64**38.39±0.33**38.43±0.622.5h 38.87±0.3538.32±0.53*38.60±0.4638.47±0.6238.52±0.4638.61±0.633h 38.82±0.4438.43±0.5538.85±0.3938.63±0.6638.75±0.4438.87±0.59

2.3 各组小鼠热板实验痛阈值和扭体实验扭次数比较 见表3。与对照组比较，防风合剂高、中剂量组小鼠药后1、2、3 h痛阈值明显升高，扭体次数显著减少（P＜0.05或P＜0.01）；防风合剂低剂量组小鼠药后3 h痛阈值显著升高（P＜0.05）。与罗痛定组比较，其他各组扭体次数显著增加（P＜0.05或P＜0.01），防风低剂量组小鼠药后1 h痛阈值显著降低（P＜0.05）；与儿感清组比较，防风低剂量组小鼠药后1h痛阈值显著降低（P＜0.05），不同时间痛阈值差异无统计学意义（P＞0.05）；与防风高剂量组比较，各组小鼠扭体次数和不同时间痛阈值差异无统计学意义（P＞0.05）；与防风中剂量组比较，防风低剂量组小鼠扭体次数和不同时间痛阈值差异无统计学意义（P＞0.05）。

表3 各组小鼠热板实验痛阈值和扭体实验扭体次数比较（±s）

表3 各组小鼠热板实验痛阈值和扭体实验扭体次数比较（±s）

与对照组比较，∗P＜0.05，∗∗P＜0.01；与罗痛定组比较，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01

不同时间痛阈值（s）组别n对照组罗痛定组儿感清组防风高剂量组防风中剂量组防风低剂量组101010101010给药前24.17±6.3224.19±4.2424.72±4.8423.45±3.1124.68±4.8823.70±5.431 h 23.35±4.4535.40±11.57**34.85±12.21*33.12±11.72*32.90±12.72*25.44±6.92▲★2 h 23.56±5.6339.48±9.52**36.50±12.77**36.37±11.34**33.24±11.63*31.78±15.513 h 23.62±4.1840.13±8.84**39.51±14.84**37.44±11.44**38.96±11.41**34.33±14.85*扭体次数（次）27.03±7.6810.43±4.91**19.04±5.56*▲▲17.81±7.32*▲19.14±7.68*▲▲22.71±7.64▲▲

2.4 各组角叉菜胶致大鼠足肿胀程度的比较 见表4。与对照组比较，防风合剂高、中剂量组大鼠在致炎后5、6 h足跖肿胀度均显著降低（P＜0.05）。与阿司匹林组比较，各组大鼠不同时间肿胀度差异无统计学意义（P＞0.05）；与儿感清组比较，各组大鼠不同时间肿胀度差异无统计学意义（P＞0.05）；与防风高剂量组比较，各组大鼠不同时间肿胀度差异无统计学意义（P＞0.05）；与防风中剂量组比较，防风低剂量组大鼠不同时间肿胀度差异无统计学意义（P＞0.05）。

表4 各组角叉菜胶致大鼠足肿胀程度的比较（mL，±s）

表4 各组角叉菜胶致大鼠足肿胀程度的比较（mL，±s）

致炎后组别n对照组阿司匹林组儿感清组防风高剂量组防风中剂量组防风低剂量组1010101010101 h 0.17±0.070.151±0.060.16±0.070.16±0.060.15±0.050.16±0.062 h 0.28±0.070.25±0.060.26±0.070.25±0.060.25±0.090.27±0.073 h 0.38±0.090.33±0.040.33±0.090.31±0.070.32±0.100.36±0.124 h 0.46±0.100.35±0.05**0.38±0.070.38±0.070.40±0.100.42±0.125 h 0.45±0.040.36±0.08**0.37±0.06**0.38±0.07*0.39±0.08*0.39±0.116 h 0.40±0.080.29±0.07**0.30±0.07**0.29±0.11*0.32±0.08*0.33±0.10

2.5 各组二甲苯致小鼠耳肿胀程度的比较 见表5。与对照组比较，防风合剂高、中剂量组小鼠耳肿胀度显著降低（P＜0.01）。与阿司匹林组比较，其他各组小鼠耳肿胀度显著增加（P＜0.01）；与儿感清组比较，防风高剂量组小鼠耳肿胀度显著降低（P＜0.01），防风低剂量组小鼠耳肿胀度显著增加（P＜0.05）；与防风高剂量组比较，防风中、低剂量组小鼠耳肿胀度显著增加（P＜0.01）；与防风中剂量组比较，防风低剂量组小鼠耳肿胀度显著增加（P＜0.01）。

表5 各组对二甲苯致小鼠耳肿胀程度比较

3 讨论

急性气管支气管炎是以支气管黏膜急性炎症为主因，表现为咽痛、鼻塞、流涕等症状的小儿常见疾病。抗病毒等药物治疗存在肝肾损害的风险，中医药防治该病具有副作用小、安全性高、全面调节的优势，是重要的治疗途径之一。地骨皮主要含有生物碱类、有机酸类等生物活性成分，其具有抗炎、抗菌、抗病毒、解热镇痛等活性［1-3］。防风化学成分主要有色原酮类、香豆素类、多糖类等，具有镇痛、镇静、抗过敏、抗炎、抗菌、抗病毒等生物活性［4-8］。本实验研究旨在探讨防风合剂具的解热、镇痛、抗炎的药理作用。

发热模型的致热原常用的为干酵母、内毒素（LPS）、2，4-二硝基酚（DNP）、角叉菜胶等［9］。其中LPS致热模型是目前经典的炎性发热模型，其作用于动物后使分泌大量的炎性致热原TNF-α、TL-I等，引起发热［10-11］。而皮下注射DNP，能刺激动物出现无菌性炎症，为非感染性发热模型［12-13］。因LPS致热模型和DNP致热模型的经典性，研究发现，防风合剂的高、中剂量对于LPS致热模型的家兔和DNP致热模型的大鼠均有良好的解热作用，说明防风合剂有一定的解热作用，且呈一定的剂量依赖性。

热板法是通过热刺激足部的感觉神经末梢致痛，类似于急性锐痛，是筛选中枢镇痛药的有效方法［14］。扭体法是通过化学刺激致痛，类似于慢性钝痛，是筛选弱镇痛药的一种敏感、简便、重复性好的方法［15-16］。热板实验表明防风合剂高、中剂量组在给药后1、2、3 h均可以明显提高小鼠的痛阈值，低剂量组只在给药后3 h明显的升高痛阈值。而在醋酸致痛的扭体实验中发现，高、中剂量组可以明显抑制给药后1 h，小鼠15 min内的扭体反应。在抗炎的实验中，结果发现防风解热高、中剂量组在给药后5、6 h可以明显减轻对角叉菜胶所致大鼠足肿胀的肿胀度和给药后1 h的小鼠耳肿胀度；以上结果表明防风合剂有一定的镇痛、抗炎作用，且呈一定的剂量依赖性。

综上所述，防风合剂具有一定的解热、镇痛、抗炎的作用，且呈剂量依赖性。其研究发现将为防风合剂扩大临床应用及临床用药提供一定的理论依据。但其具体的解热、抗炎、镇痛作用机制还有待进一步的研究。